Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаВірусологія
« Попередня Наступна »
Кільбурн Е.Д.. Віруси грипу та грип (1978), 1978 - перейти до змісту підручника

Структура вірусу грипу

П. В. ШОППІН І Р. В. КОМПАНС (PW CHOPPIN, Я. W. COMPANS)



I. ВСТУП

Вивчення вірусу грипу протягом тривалого часу перебувало «а передовому рубежі структурних досліджень у вірусології. Вірус грипу одним з перших був вивчений: допомогою електронної мікроскопії (Taylor et al., 1943), і при використанні саме цього об'єкта в якості моделі було "вчинено, що деякі віруси утворюються шляхом відбруньковування від клітинних мембран (Murphy, Bang, 1952). Введення в експериментальну вірусологію методу негативного контрастування більшою мірою стимулювало структурні дослідження вірусів взагалі, а вірус грипу з'явився об'єктом найбільш ранніх і яскравих робіт (Home et al., 1960; Hoyle et al., 1961), в яких було показано наявність у вірусу оболонки з включеними в неї поверхневими «шпильками» і внутрішнього спирализованную нуклеокапсида. Останніми роками вірус грипу вивчали за допомогою багатьох фізичних і хімічних (методів, в результаті чого цей вірус є в даний час одним з найбільш вивчених оболонкових вірусів з точки зору їх структурної організації.

Величезний інтерес до структури і збірці вірусів грипу пов'язаний з біологічним значенням захворювання, яке віруси грипу викликають у людини і тварин. Крім того, віруси грипу, як і інші оболонкові віруси, є прекрасною моделлю для вивчення ' клітинних мембран. Можливість використання вірусів в якості такої моделі зумовлена ??тим, що вірусні частинки мають зовнішньою оболонкою, яка формується з клітинної мембрани і морфологічно їй ідентична. Зручність ж використання оболонкових вірусів для цієї мети полягає в тому, що вони являють собою просту модель, ( яку можна отримати в високоочищеної і гомогенної формі для фізичних, хімічних і біологічних досліджень. Віріони грипу містять у своєму складі лише невелике число вірус-специфічних білків, склад 'яких може змінюватися при селекції різних штамів і мутантів і які в багатьох випадках можуть бути виділені в біологічно активному стані. Ліпідний і вуглеводний склад віріонів грипу можна змінити, варіюючи тип хазяйських клітин, оскільки ці компоненти вірусних мембран визначаються в основному клітиною-господарем. Зручність використання вірусів в якості моделей мембран підкреслювали багато авторів (Choppin et al., 1971; Lenard, Compans, 1974; Choppin, Compans, 1975; Compans, Choppin, 1975).

Справжня глава присвячена опису загального складу і морфології частинок вірусу грипу та взаємодії різних його компонентів. У наступних розділах (див. гл. 3 , 6, 10 і 12) дано детальний опис біологічних і імунологічних властивостей різних компонентів вірусної частки, а також структури нуклеїнової кислоти і деяких індивідуальних білків. У літературі вже є кілька оглядів з викладенням робіт з вивчення структури і складання віріонів грипу (Compans, Choppin, 1971, 1973, 1975; Choppin et al., 1972; Schulze, 1973; Laver, 1973; White, 1974; Choppin, 1975).



СКЛАД вірусні частки



А. ЗАГАЛЬНИЙ ХІМІЧНИЙ СКЛАД І відносною молекулярною масою

Хімічний склад віріонів грипу не може бути приведений абсолютно точно тому, що вірусна популяція гетерогенна, а також тому, що склад вірусної частки в деякій мірі (для ліпідів і вуглеводів) визначається клітиною-хозіно1М (див. далі). Проте, приблизний хімічний склад був визначений: 0,8-1,1% РНК, 70-75% білка, 20-24% ліпідів і 5-8% вуглеводів (Ada, Perry, 1954; Frommhagen et al., 1959; Blough et al., 1967). Вірусна популяція зазвичай містить велику кількість неінфекційних «неповних» вірусних часток і, таким чином, наведене вміст РНК відображає нижню межу величини, характерної для інфекційних віріонів, які містять повний набір фрагментів вірусної РНК. Ретельний аналіз вірусних частинок, культивованих на клітинах нирки бика лінії MDBK, для яких характерний високий вихід інфекційних частинок з низьким порівняно з іншими клітинами виходам дефектних віріонів (Choppin, 1969), 'поряд з додатковим відділенням повних часток в градієнті щільності, мабуть, повинен дати уточнену величину вмісту РНК у вірусній частці.

Визначення точного значення відносної молекулярної маси 'віріонів грипу також ускладнюється гетерогенністю вірусної популяції, одержувані величини варіюють в широких межах. За допомогою ікжтронно-мікроекопіческого і седиментационного методів аналізу отримані значення відносної молекулярної маси від 270-106 до 290-106 (Lauffer, Stanley, 1944; Scharp et al., 1945; Schramm, 1954). Низьке значення (151 - К6) було отримано для вірусу FPV на основі визначення коефіцієнтів дифузії і седиментації (Schafer et al., 1952; Schramm, 1954), а більш високе (360-106)-на основі вимірювання вмісту білка в вирионе і підрахунку числа частинок за допомогою електронного мікроскопа ' (Reimer et al., 1966). У зв'язку з тим що розміри вірусних частинок варіюють, неможливо отримати величину відносної молекулярної (маси, однакову для всіх віріонів вірусної популяції. Крім того, у разі оболонкових вірусів, форма яких непостійна, а самі віріони легко руйнуються, важко очікувати високої точності при отриманні результатів за допомогою таких методів, як підрахунок часток і визначення коефіцієнтів седиментації. Хоча величина маси віріонів грипу варіює з об'єктивних причин і не можна привести одного і того ж значення для всіх вірусних частинок, і нині між різними лабораторіями мається узгоджена думка про межах величин вмісту РНК і білків в вірусної частці.

Б. РІБУНОКЛЕІНОВАЯ КИСЛОТА

Зміст РНК у вирионах грипу одно 0,8-1,1% (Ada, Perry, 1954; Frisch-Niggemeyer, Hoyle, 1956; Frommhagen et al., 1959). Оскільки в цих дослідженнях не була точно встановлена ??ступінь чистоти використаних вірусних препаратів, наведена вище величина залишає грунт для деяких СО (Мненій. Так, за даними Frisch-Niggemeyer і Hoyle (1956), вміст РНК в ізольованому нуклеопро-теіде вірусу грипу одно 5,3%, в той час як, згідно з більш пізнім дослідженням, ця величина становить 10 - 12% (Pons et al., 1969 ; Krug, 1971). Це вказує на невисоку точність визначення вмісту РНК в вирионе в ранніх роботах. Дана в цих роботах (на основі визначення вмісту РНК в вирионе) величина для розміру вірусного генома - приблизно 2-Ю6 (Frisch-Niggemeyer, 1956) -також значно нижче величини 4-Ю6-5-Ю6, визначеної за допомогою електрофорезу вірусної РНК в гелі.

Відомі в даний час біологічні та біохімічні дані вказують на те, що РНК вірусу грипу існує в вирионе у вигляді декількох фрагментів. Повний доказ цього положення ми тут не наводимо, оскільки це питання буде детально обговорено в гол. 6. При електрофорезі вірусної РНК в поліакриламідному гелі спостерігається шість чи сім фрагментів з відносною молекулярною масою в межах від 3,5-105 до 10-105дальтонов1 (Skehel, 1971; Lewandowski et al., 1971; Bischop et al, 1971). Встановлено, що розмір фрагментів дискретний, а вивчення їх кінців вказує на те, що виникнення фрагментів не пов'язане з фрагментацією однієї молекули РНК або з її розщепленням Нуклеази (Young, Content, 1971; Lewandowski et al., 1971). Розміри індивідуальних фрагментів РНК добре корелюють з відносною молекулярною масою вірускодіруемих поліпептидів, і в зв'язку з цим можна висловити припущення, що кожен фрагмент генома кодує один вірусний поліпептид. Вірусна РНК входить до складу внутрівірусного спирализованную рибонуклеопротеидов і, як буде показано нижче, були виявлені дискретні за розмірами рібонуклеолротеіди, що містять різні фрагменти вірусної РНК-До теперішнього часу не було отримано переконливих доказів існування ковалентного зв'язку або специфічної агрегації фрагментів вірусної РНК в вирионе або в інфікованій клітині. Агрегати з відносною молекулярною масою близько 3-Ю6 були отримані при екстракції РНК з віріонів у присутності двовалентних. катіонів. При тепловій обробці ці агрегати переходили в повільно седіментірующіе структури (Agrawal, Bruening, 1966; Pons, 1967). В одному з електронно-мікроскопічних досліджень повідомлялося про виявлення молекул РНК з відносною молекулярною масою 3-Ю6, диссоциирующих на менші за розмірами молекули при рН 3,0 (Li, Seto, 1971). Однак спостережувана гетерогенність не є доказом того, що є специфічна агрегація всіх фрагментів вірусного генома.

Вміст у вирионе різних фрагментів РНК варіює. Кілька пасажів вірусу грипу з високою множинністю зараження призводять до репродукції неінфекційних частинок, що відбивається в низькому відношенні інфекційності препаратів до їх гемагглютінірующей активності (von Magnus, 1964). Такий вірус називають неповним. Він характеризується відсутністю самого великого за розмірами фрагмента РНК і збільшеним вмістом низькомолекулярних гетерогенних фрагментів (Pons, Hirst, 1968; Dues-berg, 1968; Choppin, Pons, 1970). Деякі відмінності спостерігаються в седиментаційних профілях РНК, виділених з різних штамів, а також з вірусів одного штаму при різному часу культивування і різної множинності зараження (Barry et al., 1970). Такого роду відмінності можуть відбивати неоднакову швидкість синтезу різних фрагментів вирионной РНК; при цьому низькомолекулярні фрагменти, ймовірно, синтезуються з більшою швидкістю, ніж великі за розмірами.

В. БІЛКИ

1. Число і функції поліпептидів

Різні поліпептиди, які виявляються в вирионах грипу, будуть описані тут коротко у зв'язку з тим, що їх морфологія і взаємозв'язок у вирионе обговорюватимуться в розділі III цієї глави. Крім того, властивості деяких з цих білків, зокрема гематглютініна і нейрамінідази, будуть детально обговорені у наступних розділах книги [синтез (див. гл. 8), хімічні, біологічні (див. гл. 3) та імунологічні (див. гл. 10 і 12) властивості]. Хоча вирион грипу і формується шляхом отпочковиванія від цито-плазматичних мембран клітини-господаря, хазяйські поліпептиди не присутні в вирионе в якості структурних білка різних клітинних культурах (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970), а також відсутність загальних білків у вірусах грипу та інших оболонкових віруси, вирощених «а клітинах одного типу. Крім того, всі поліпептиди, що входять і склад віріона грипу, можуть бути виявлені в інфікованій клітині в процесі синтезу як нові білкові освіти (Lazarowitz et al., 1971; Skehel, 1972; Klenk et al., 1972b; Compans, 1973a).

В зв'язку з тим що три білка, що входять до складу віріона грипу, а саме білок нуклеокапсида, гемаглютинін та нейрамінідази, можна ідентифікувати імунологічно (див. гл. 10 і 12), починаючи з 60-х років, основну увагу було залучено до дослідження саме цих білків. Ранні роботи з використанням електрофорезу також показали наявність трьох основних поліпептидів, які були ідентифіковані за цими трьома антигенами. Однак після введення в експериментальні дослідження електрофорезу в поліакриламідному гелі, що володіє високим ступенем дозволу білків, а також методів введення радіоактивних міток в амінокислоти і цукру ( для ідентифікації білків і глікопротеїдів) було виявлено, що в вирионе грипу присутня принаймні сім структурних поліпептидів з відносною молекулярною масою приблизно від 25 000 до 94 000 (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Нині існує узгоджене; думка про склад поліпептидів в вирионах грипу (Haslam et al., 1970a; Corn-pans et al., 1970a; Schulze, 1970; Skehel, Schild, 1971; Lazarowitz et al., 1971, 1973a; Klenk et al., 1972a) . На 1 наведено електрофоретичний профіль поліпептидів вірусу грипу типу А (штам WSN), вирощеного на первинних клітинах нирки макаки резусу. В табл. 6 представлені дані про поліпептидах вірусу грипу, існування яких в даний час твердо встановлено, а також відомості про їх функціональної ролі і локалізації в вирионе (якщо це відомо). Усі позначення відповідають прийнятим на конференції з грипу, що проходила в 1971 р. у Мадісоні (США) (Kilbourne et al., 1972).

2. Поліпептиди Р

Опції і точна локалізація в вирионе найбільших білків з відносною молекулярною масою 81000-94 000, що позначаються як Pi і Р2, до теперішнього часу не встановлені. Відомо, однак, що ці білки є внутрішніми компонентами віріона; вони, по всій ймовірності, асоційовані з нуклеокапсидом і можуть здійснювати РНК-транскріптазная активність віріона (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970; Skehel, 1971; Klenk et al., 1972a; Bishop et al., 1972; Caliguiri , Compans, 1974).

3. Гемаглютинін

Найбільший гликопротеид - гемаглютинін, що позначається символом НА, з відносною молекулярною масою 75 000-80 000, є білком, здійснюють адсорбцію віріонів на клітинних рецепторах. Він синтезується як окремий первинний продукт одного гена, але за певних умов може протеолітичних розщеплюватися з утворенням двох поліпептидів: HAi і НА2 - з відносною молекулярною масою близько 50 000 і 28 000 відповідно (Lazarowitz et al., 1971 ). Таке розщеплення, ступінь якого може. варіювати в широких межах, залежить від типу клітини-господаря, штаму вірусу і наявності або відсутності плазміногену або інших протеолітичних фер1ментов в середовищі культури клітин або інший хазяйської системи, такої, наприклад, як аллантоісной рідина курячого ембріона (Lazarowitz et al., 1971, 1973а, b; Rifkin et al., 1972; Klenk et al., 1972b; Skehel, 1972; Stanley et al., 1973). В курячих ембріонах зазвичай відбувається повне розщеплення (Lazarowitz et al. , 1973), що зумовило виявлення двох поліпептидів гемаглютиніну в ранніх роботах (Laver, 1971; Stanley, Haslam, 1971), зазвичай званих важкої і легкої ланцюгом гемаглютиніну і позначаються символами HAi і НА2. Ці дві компоненти НА-білка утримуються поруч один з одним за рахунок існування між ними дисульфідних містків (Laver, 1971). Розщеплення молекули НА не є необхідною умовою складання вірусної частки або наявності у неї гемагглютінірующей активності (Lazarowitz et al., 1963a; Stanley et al., 1973) і за деяких умов віріони формуються взагалі без розщеплення молекул НА (Lazarowitz et al., 1973a, b; Choppin et al., 1975),. що вказує на несуттєву роль цього етапу в процесі складання. На 2 представлений електрофоретичний профіль білків вірусу грипу штаму WSN, де розщеплення поліпептиду НА не відбувається за відсутності сироваткового плазміногену, але має місце у випадку, коли цей фермент є в середовищі. Нещодавно було показано, що інфекційність віріонів грипу (як типу А, так і типу В), в яких спочатку не було виявлено розщеплення молекул НА, може бути збільшена при розщепленні цих молекул за допомогою трипсину (Choppin, Lazorowitz, неопубліковані дані; Klenk і Rott, персональне повідомлення). Детальний механізм подібного зростання інфекційності в даний час ще не встановлено, однак при з'ясуванні його повинні бути, ймовірно, враховані ранні етапи взаємодії вірусу з клітиною, не пов'язані з адсорбцією.

  Як буде детально обговорено в гол. 3, 10 і 12, гемаглютинін та нейрамінідази, виділені з різних штамів вірусу грипу, сильно відрізняються по послідовності амінокислот і антигенними властивостями. Ці поверхневі глікопротеїди відповідальні за штаммовие специфічність віріонів грипу.

  4. Нейрамінідазу

  Поліпептид нейрамінідази (NA) є гликопротеидом, субодиниці якого мають відносну молекулярну масу в межах від 5000 до 65000. Величина відносної молекулярної маси NA залежить як від штаму вірусу, так і від умов виділення, прийнятих в різних лабораторіях (Haslam et al., 1970b; Webster, 1970; Skehel, Schild, 1971; Gregoriades, 1972; Lazdins et al., 1972) . Було виявлено два різних види поліпептидів NA при її ізоляції з одного типу віріонів (Webster, 1970; Skehel, Schild, 1971; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972). Lazdins і співавт. (1972) виявили мажорну компоненту з відносною молекулярною масою 63 000 і мінорний поліпептид в 56000, однак при обробці препарату вірусу трипсином вони виявили тільки одну компоненту з низькою молекулярною масою. Це вказує на те, що менший за молекулярною масою поліпептид був отриманий з більшого за допомогою протеолітичного розщеплення. Менший за розмірами поліпентиди агрегованих. Це означає, що при протеолітичної обробці отщепляется гідрофобна область молекули. Електронно-мікроскопічне дослідження Wrigley і співавт. (1973) показало, що при обробці трипсином віддаляється «ніжка» грибообразной нейрамінідазной «шипа». Збереження ферментативної активності при такій обробці вказує на те, що активний центр ферменту знаходиться на гантелеобразная «голівці» «шипа» нейрамінідази. Як буде докладно викладено в гол. 3, є багато доказів того, що фермент присутній у вирионе у формі тетрамера з відносною молекулярною масою 200 000 - 250 000 (Kendal, Eckert, 1972; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972; Wrigley et al., 1973 ).

  5.Белок нуклеокапсида

  Поліпептид, що позначається символом NP, являє собою білкові субодиниці нуклеокапсида (Duesberg, 1969; Joss et al., 1969; Pons et al., 1969). Оцінки відносної молекулярної маси, проведені в багатьох лабораторіях для білка NP різних штамів вірусу грипу, дали величини від 55 000 до 65 000. Величина 60000 звичайно приймається за середню відносну молекулярну масу цього білка. Він не містить вуглеводів і є типоспецифічними антигенів, на властивостях якого заснована класифікація вірусу грипу на типи А, В і С (див.. Гл. 12). Амінокислотний аналіз білка NP, виділеного з штаму вірусу грипу типів А і типу В, дав істотно різні результати (Laver, Baker, 1972). Білок NP володіє аффінним спорідненістю як до вирионной РНК, так і до комплементарним до неї ланцюгах (Scholtissek, Becht, 1971).

  7. Кількість поліпептидів в вирионе

  У зв'язку з тим що віріони грипу гетерогенних за своїми розмірами, а також у зв'язку зі штаммовие варіабельністю дуже важко точно визначити число молекул різних поліпептидів, що входять до складу окремої вірусної частинки. Крім того, число молекул поліпептиду НА, а також продуктів їх розщеплення - поліпептидів HAi і голий - може істотно залежати від ступеня розщеплення НА, яка, як було описано раніше, в свою чергу залежить від багатьох умов. І, нарешті, загальне число молекул глікопротеїдів НА і NA в вирионе одного штаму вірусу може змінюватися в залежності від типу клітини-господаря (Lazarowitzetal., 1973а; Choppin et al., 1975). Таким чином, будь-який розрахунок числа поліпептидів в вирионе грипу можна вважати лише приблизними і справедливим тільки для усередненого віріона при певному наборі умов. У табл. 7 наведені граничні значення для числа поліпептидів в вирионе, отриманих в різних лабораторіях з досить гарною збігом результатів. Для більш детальної інформації про значення, «отриманих різними авторами, що вивчали різні штами вірусів, читач може звернутися до докладного огляду White (1974), де зведені дані про білки вірусу грипу.

  8. Віруси грипу В і С

  Дослідження хімічного складу і структури віріонів, а також містяться в них білків було виконано в основному на штамах вірусів грипу А. У деяких роботах, проте, як об'єкта вивчення використовували штам Lee вірусу грипу В. В основному була показана ідентичність хімічного складу і структури вірусів грипу Аі В (Haslam et al., 1970b; Lazdins et al., 1972; Laver, Baker, 1972; Oxford, 1973; Tobita, Kilbourne, 1975). Однак деякі невеликі, але істотні відмінності-були знайдені для штаму GL/1760/54 вірусу грипу В (Choppin et al., 1975). Цей вірус, вирощений на клітинах нирки хом'ячка, не мав білка Р, а порівняння злектрофоретіческого профілю білків вірусу цього штаму і штаму WSN вірусу грипу А показало, що білки НА, NP і NA штаму GL/1760 мають дещо більшу молекулярну масу (відносна молекулярна маса було дорівнює відповідно 82 000, 66 000 і 64 000), в той час, як М-білок штаму GL/1760 (молекулярна маса - 24 000) був дещо менше, ніж М-білок штаму WSN. На 3 представлений електрофоретічеокій профіль в поліакриламідному гелі білків штаму B/GL/1760. Дивним фактом, виявленим для штаму GL/1760, який вирощували на клітинах почій хом'ячка, була повна відсутність розщеплення білка НА. Проте можна було провести розщеплення поліпептиду НА на фрагменти HAi і НА2 в системі in vitro. Було, крім того, показано, що поліпептиди NA і HAi містять залишки фукози, а НА2 їх не містить і до його складу входить глюкозамін. Таким чином, в цьому випадку в області НА2 гемаглютиніну «шипа» спостерігається відсутність цукрового залишку, зазвичай локалізованого на кінцях цукрових ланцюжків. За допомогою цієї області, як відомо, «шип» гемаглютиніну приєднується до вірусної мембрані. Відсутність фукози у складі поліпептиду НА2 і наявність її в складі HAi і> NA цього штаму, а також у складі поліпептиду НА2 інших штамів вказує на можливу наявність більш тісної взаємодії поліпептиду НА2 штаму GL/1760 з вірусною мембраною і на те, що ця взаємодія може вплинути на процес глікозідірованія, що закінчується на поверхні мембрани.

  Іншим цікавим спостереженням, зробленим при аналізі експериментів по / пізнього та раннього включенню радіоактивних амінокислот в вирион грипу штаму GL/1760, стало те, що мембранний білок синтезувався в процесі репродукції відносно пізно, а білок NP, що синтезується на ранніх етапах інфекційного циклу, інкорпоровані в віріони, що вже містять білок М, який синтезується пізніше. Цей результат був отриманий за допомогою методу включення в білки радіоактивних амінокислот на ранніх і пізніх етапах репродукції (Choppin et al., 1975). Подібні дані були недавно отримані для штаму WSN (Meier-Ewert, Compans, 1974). Ці результати узгоджуються з висловленою раніше твердженням, що синтез М-білка жорстко детермінується і може бути етапом, на якому контролюється швидкість вірусної репродукції (Lazaro-witz et al., 1971).

  Щодо мало робіт було виконано з використанням як об'єкта вивчення вірусу грипу С. Виконане недавно попереднє дослідження показало в основному сходность його хімічного складу зі складом вірусів грипу А і В. Однак слід зазначити, що вірус грипу С не володів нейрамінідазной активністю. Це вказує на те, що цей вірус може містити в своєму складі глікозідазу іншого типу, здатну руйнувати вірусні рецептори (Kendal, Kiley, 1974).

  м. ліпіди

  Ліпіди, що містяться в вирионе грипу, локалізовані в вірусної мембрані і, як буде описано далі, існують у вигляді подвійного ліпідного шару. З 20-24% маси віріона, що припадають на ліпіди, основну частину складають фосфоліпіди (ГО-13%) і холестерин (6-8%), а також малий за кількістю, але, ймовірно, важливий компонент - гліколіпіди (1-2% ) (Frommhagen et al., 1959; Kates et al., 1961; Blough, Merilie, 1970; Klenk et al., 1972a; Klenk, Choppin, неопубліковані дані). Проведені раніше дослідження показали, що попередньо мічені клітинні ліпіди включаються до віріони грипу (Wecker, 1957) і що ліпідний склад віріонів, культивованих на різних клітинах, подібний з ліпідним складом цих клітин (Kates et al., 1961). Було виявлено, що клітина-господар відіграє визначальну роль у формуванні ліпідів вірусу. Пізніше Blough і співавт. проаналізували ліпідний склад вірусів-грипу різних штамів, вирощених на курячих ембріонах (Tiffany, Blough, 1969; Blough, 1971; Blough, Tiffany, 1973). На підставі відмінностей у ліпідному складі цих вірусів автори припустили, що склад ліпідів вірусу визначають білки вірусної оболонки за рахунок селективного взаємодії між молекулами білків і ліпідів. Однак спостерігаються відмінності стосувалися в основному жирних кислот нейтральних ліпідів. У зв'язку з тим, що цей компонент становить лише невелику частину від загального ліпідного вмісту вірусу і оскільки жирні кислоти полярних ліпідів, що входять до складу різних штамів вірусу грипу, в основному подібні, значення зазначених вище відмінностей поки ще неясні.
 Аналіз ліпідного складу був проведений для віріонів, вирощених на курячих ембріонах в умовах множинного циклу репродукції; штами могли відрізнятися за кінетиці зростання вірусної популяції і за ступенем впливу на клітинний метаболізм. У зв'язку з цим міг змінюватися ліпідний склад мембран хазяйських клітин. Крім того, аналіз ліпідного складу проводили на вирионах, вирощених в різний час на різних партіях ембріонів, що також важко врахувати при інтерпретації отриманих результатів.

  Аналіз ліпідного складу віріонів грипу при їх культивуванні в більш контрольованих умовах клітинних культур має очевидні переваги. Було проведено детальне порівняння ліпідного складу оболонкових вірусів і плазмових мембран різних клітин, на яких ці віруси культивувалися. Аналізували включення в мембрани фосфолшгадов, холестерину, гликолипидов і жирних кислот (Klenk, Choppin, 1969, 1970а, b; Choppin et al., 1971; Renkonen et al., 1971; Quigley et al., 1971; Laine et al., 1972 ; McSharry, Wagner, 1971). Хоча в деяких випадках і спостерігалися незначні відмінності, ліпідний склад вірусів був дуже схожий з ліпідним складом плазматичних мембран хазяйських клітин. Концентрація фосфоліпідів в даному вірусному штамі може відрізнятися принаймні в 3 рази залежно від типу клітини-хазяїна. Спостерігалися також якісні відмінності у складі гліколіпідів (Klenk, Choppin, 1969, 1970b). Крім того, було показано, що вміст жирних кислот може змінюватися в 4 рази залежно від середовища культивування (Klenk, Choppin, 1970b). Наведені результати вказують на те, що, хоча за певних умов і можуть спостерігатися незначні варіації в ліпідному складі вірусу грипу, за які можуть бути відповідальні вірусні білки, визначальний вплив на ліпідну композицію мембрани надає клітина-господар і що ліпідний склад вірусу повторює ліпідний склад плазматичних мембран хазяйських клітин.

  Однак спостережуване схожість ліпідного складу вірусних і клітинних мембран та затвердження про визначальний вплив клітини-господаря на склад ліпідів віріона зовсім не означають, що всі ліпіди, включающиеся надалі в вірусну частку, присутні в клітці до початку інфекційного процесу. Дійсно, той факт, що для багатьох оболонкових вірусів вірусна репродукція триває протягом тривалого періоду, вказує на те, що деякі знову синтезовані молекули ліпідів инкорпорируются в віріони. Однак повідомлення Blough (1974) про те, що знову синтезовані ліпіди включаються до складу віріона, зовсім нееквівалентно твердженням, що синтез цих ліпідів визначається вірусом. Це означає тільки, що біосинтез ліпідів, які згодом увійдуть до складу вірусної мембрани, не припиняється після початку інфекції і що при оборці вірусної частки використовуються як знову синтезирующиеся, так і вже предсуществующие в клітці молекули ліпідів.

  Основне якісна відмінність між ліпідами вірусу і клітини-хазяїна полягає в тому, що в вирионах грипу не виявляється гликолипидов, містять нейрамінової кислоту (ганглеозіди); нейрамінової кислоти немає також у складі вірусних глікопротеїдів (Klenk, Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970b ). Відсутність залишків нейрамінової кислоти в вирионе пояснюється включенням вірусного ферменту нейрамінідази в ті області мембрани, які згодом сформують вірусну оболонку. Оболонкові віруси, що не містять нейрамінідазу, такі, наприклад, як вірус везикулярного стоматиту, містять в мембрані ганглеозіди, подібні з ганглеозідамі клітинних мембран (Klenk, Choppin, 1971).

  Ліпіди, що входять до складу мембран вірусів грипу та інших оболонкових вірусів, з'явилися предметом вийшли недавно оглядів '(Choppin et al., 1971; Blough, Tiffany, 1973; Klenk, 1973, 1974; Lenard, Compans, 1974; Choppin, Compans, 1975 ; Сотргпе, Choppin, 1975).

  Д. ВУГЛЕВОДИ

  Крім рибози, що входить до складу вірусної РНК, приблизно 5-8% маси віріона грипу становлять вуглеводи (Frommhagen et al., 1959). Велика частина, якщо не всі вуглеводи віріона, ковалентно приєднана до молекул глікопротеїдів або гликолипидов. У вирионе грипу присутні галактоза, манноза, глюкоза-мін і фукоза, а склад Сахаров еквівалентний складу вуглеводного компонента мукопротеїдів клітини-хазяїна (Ada, Gottschalk, 1956). Ізольований HAi-гликопротеид гемаглютиніну вірусу грипу штаму BEL, який попередньо (культивували на курячих ембріонах, містив 9,4% N-ацетилглюкозаміну і близько 20% його загальної маси становили вуглеводи (Laver, 1971, 1973). Вуглеводи є саме тим хазяйським антигеном, який був знайдений у складі очищених віріояов (Knight, 1946; Smith et al., 1953) в ковалентно пов'язаному з вірусним гликопротеидом вигляді (НагЬое, 1963; Laver, Webster, 1966; Lee et al., 1969). З мембран інфікованих клітин ( Laver, Webster, 1966) і з аллантоісной рідини курячих ембріонів (Haukenes et al., 1965; Lee et al., 1969) був виділений вуглеводний компонент, який володів антигенними спорідненістю з хазяйським антигеном очищених віріонів. Антиген, виділений з аллантоісной рідини, був борошно-полісахарідсульфатом, що не містить уронової або нейрамінової кислоти, і за своїм складом належав до класу кератосульфатов (Haukenes et al., 1965). Нещодавно було показано, що глікопротеїди віріона грипу селективно метятся радіоактивним сульфатом, що зв'язуються, ймовірно, з вуглеводною частиною у вигляді ефіру (Compans, Pinter, 1975). Крім того, 'було виявлено, що сульфат включається в компонент з великою відносною молекулярною масою, що є, ймовірно, мукополісахаридом хазяйської клітини, який може бути тотожний хазяйському клітинному антигену, асоційованому з очищеним вирионом.

  Включення радіоактивних попередників глюкоза-на і фукози в вірусні глікопротеїди НА і NA вказує на те, що вуглеводна частина цих молекул синтезується вже після початку вірусної інфекції (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Синтезуються Чи знову або використовуються існуючі раніше вуглеводи для побудови вірусних гликолипидов - питання, який ще потребує дозволу.

  Існуючі в даний час факти вказують на те, що послідовність і склад вуглеводних залишків у вірусних глікопротеїдів і гліколіпідів визначаються клітиною-господарем. На додаток до зазначених «хазяйським» антигенними властивостями вуглеводного компонента відмінність в електрофоретичної рухливості гликопротеидов віріонів грипу, вирощених на різних клітинних культурах, вказує на те, що якась кількість цукрових залишків, включених в молекули глікопротеїдів, може мати клітинне походження (Haslam et al ., 1970a; Compans et al., 1970a; Schulze, 1970). Для синтезу вуглеводних ланцюжків гликопротеидов необхідно принаймні чотири типи специфічних трансфераз і, ймовірно, сама вірусна частка не містить достатньої кількості генетичної інформації для кодування синтезу цих ферментів. Глікозідірованіе поліпептиду НА, ймовірно, відбувається на мембранах ендо-плазматичного ретикулума за механізмом, подібному з механізмом синтезу вуглеводів Клітинних гликопротеидов (Compans, 1973b; Hay, 1974).

  Залишки нейрамінової кислоти не містяться в вирионах грипу, ймовірно, тому, що в них присутня нейрамінідаза (Klenk, Choppin, 1970; Klenk et al., 1970a, b; Palese, et al., 1974). Віріони парагрипу, до складу (Яких також входять нейрамінідаза, не містять в тлікопротеідах і Глік-ліпідах залишків нейрамінової кислоти (Klenk, Choppin, 1970b; Klenk et al., 1970a, b). Водночас до складу обол-пралень вірусів інших типів, не 'містять нейрамініда-зи, входять залишки нейрамінової кислоти. Нейрамінідазу, ймовірно, необхідна тим оболонкових вірусів, які прикріплюються до рецепторів, що містить нейрамінової кислоту. Це питання буде докладніше висвітлено в гол. 3. У «льотках, заражених температурочувствітельной мутантом, позбавленим нейрамінідази, синтезуються вірусні частинки, що містять залишки нейрамінової кислоти і утворюють великі за розмірами агрегати на поверхні клітини (Palese et al., 1974). Процес агрегації може бути пригнічений додаванням нейрамінідази. Ці факти вказують на те, що нейрамінової кислота, що міститься в складі ві-Ріона, може служити рецептором для гемагглютининов інших вірусних частинок, а це має сприяти агрегації і низькому виходу інфекційних частинок. Таким чином, відсутність залишків нейрамінової кислоти в вирионах грипу та парагрипу є вирусспецифической модифікацією вірусних вуглеводів; цей. процес необхідний для нормального вивільнення вірусу з інфікованої «льотки.

  У присутності модифікованого метаболіту 2-Дезо, ксі-D-глюкози або високих концентрацій глюкозаміну Інтібах-руется процес глікозідірованія вірусних глікопротеїдів і в інфікованих клітинах виявляється неглікозіді-рова або глікозідірованний частково поліпептид - попередник НА (Klenk et al., 1972b; Gandhi et al ., 1972). Дефектні глікопротеїди, синтезовані в присутності зазначених вище інгібіторів, виявляються на гладких і грубих мембранах ендоплазматичного ретикулума і включаються до складу знову синтезованих вірусних частинок (Klenk et al., 1974; Compans et al., 1974). Ці вірусні частки володіли зниженою инфекционностью і гемагглюті-нірующей активністю. Таким чином, наявність нормального вуглеводного компонента, ймовірно, не є необхідною умовою асоціації гликопротеидов з цітоплазматіч-ськими мембранами. Однак, оскільки в цьому випадку має місце зниження виходу зрілих віріонів, можна укласти, що процес глікозідірованія, ймовірно, необхідний для реалізації повної 'біологічної активності' віріона.

  Hi. МОРФОЛОГІЯ І ВЗАЄМОЗВ'ЯЗОК

  КОМПОНЕНТІВ У віріони

  А. РОЗМІР І ФОРМА

  Ранні дослідження вірусу грипу за допомогою методів ультрафільтрації та електронної мікроскопії показали, що віріони грипу мають форму, близьку до сферичної, з середнім діаметром 80-120 нм (Elford et al., 1936; Taylor et al., 1943). За допомогою негативного контрастування віріонів грипу було виявлено, що поверхня вірусних частинок покрита близько розташованими один до одного виступами, ворсинками довжиною 10-12 нм і що нуклеокапсид, укладений всередині вірусної оболонки, має спіральну симетрію (Home et al., 1960; Hoyle et al ., 1961). Метод негативного контрастування дозволив, крім того, виявити гетерогенність і плеоморфізм популяції віріонів грипу. Плеоморфізм, однак, обумовлений в основному методом виділення і очищення і може бути зведений до мінімуму за допомогою фіксації віріонів перед контрастуванням (Choppin et al., 1961). На 4 і 5 показані віріони грипу після їх негативного контрастування.

  Хоча більшість лабораторних штамів вірусу грипу має форму віріонів, близьку до сферичної, що відтіняють напиленням препарати штаму Японія/305 вірусу грипу А мали злегка витягнуту, бактеріоподобную форму вірусних частинок (Choppin et al., 1960), а при спостереженні за допомогою методу ультратонких зрізів знову утворюються віріонів грипу було показано, що вони мають злегка витягнуту форму (6) (Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969; Compans et al., 1970b). Нуклеокапсид вірусних частинок г, ультратонкому зрізі виглядає як нитки з більш високою електронною щільністю, орієнтовані паралельно довгій осі частинки, а оболонка являє собою мембрану го шаром виступів на зовнішній поверхні (див. 5-8).

  Крім зазвичай спостережуваних частинок, форма яких близька до сферичної або злегка витягнутої, в препаратах вірусу грипу іноді виявляються филаментозному форми. Филаментозному віріони покриті поверхневими виступами і мають діаметр, характерний для сферичних віріонів, тобто 80-100 нм, але їх довжина може бути дуже велика - 4 мкм (Mosely, Wickoff, 1946; Chu et al., 1949; Choppin et al ., 1960, 1961). На 5 показаний филаментозному вирион грипу при його негативному контрастуванні. Наявність филаментозному форм характерно для знову виділених штамів (Chu et al., 1949; Choppin et al., 1960). Можливо, що филаментозному форми також переважають при інфекціях верхніх дихальних шляхів людини, оскільки при першому пасажі на курячих ембріонах вірусна популяція містить велику кількість филаментов, в той час як-після декількох пасажів в популяції виявляються переважно сферичні частки (Choppin et al., 1960) . Малоймовірно, що перший пасаж на курячих ембріонах призводить до селекції филаментозному частинок з переважно сферичної популяції вірусів при інфекції у людини, а потім, при подальших пасажах на курячих ембріонах, знову відбираються сферичні форми. Однак природа морфології віріонів, продукованих при захворюваннях людини, буде встановлена ??лише після дослідження досить великого числа вірусних популяцій, виділених безпосередньо у людини. Була визначена питома інфекційність филаментозному форм. Вона виявилася вище, ніж питома інфекційність сферичних вірусних частинок. Филаментозному віріони містили більше РНК в розрахунку на один вирион, ніж сферичні (Ada et al., 1958).

  Здатність IK репродукції филаментозному форм є генетичним ознакою, який може бути втрачений або придбаний в процесі рекомбінації (Kilbourne, Murphy, 1960; Kilbourne, 1963; Choppin, 1963). Рекомбінація між штамами АТ, для яких характерні сферичні частинки, з филаментозному штамами А2 приводила до виникнення сферичних частинок з ознаками штаму А2 і віріонів високофіламентозного штаму АТ. Таким чином, ознака филаментозному може використовуватися в якості маркера в генетичних дослідженнях. Також генетично обумовлені варіації морфології віріонів вказують на відмінність у структурній організації або у швидкості синтезу білків вірусної оболонки, ймовірно М-білка. Попередні дослідження сферичних і филаментозному форм одного і того ж штаму не виявили відмінностей в сумарному білковому складі (Choppin, неопубліковані дані), однак для повного з'ясування цього питання потрібно більш детальне вивчення.

  Було показано, що поверхнево-активні речовини, такі, як алкоголят вітаміну А, індукують утворення филаментозному і високоплеоморфних частинок у штамах, для яких у звичайних умовах характерна продукція сферичних частинок (Blough, 1963). Хоча ці спостереження і вказують на те, що форма віріонів може залежати від присутності такого роду сполук, вони не суперечать даним, які інтерпретуються з урахуванням генетичного контролю за утворенням филаментозному форм за відсутності поверхнево-активних речовин.

  При дослідженні віріонів грипу за допомогою методики ліофільного висушування і методики «фрізейтчінг» (Nermut, Frank, 1971) спостерігали високий ступінь однорідності популяції віріонів. Деякі з частинок давали тіні, характерні для правильних багатогранників, і на цій підставі був зроблений висновок, що віріони грипу можуть мати ікосаедрічеськая симетрію. Спостерігалися також впорядковані гексагональні утворення на поверхні віріонів (Almeida, Waterson, 1957; Archetti et al., 1967; Nermut, Frank, 1971), а в разі віріонів грипу С була виявлена ??гексагональная решітка, що вистилає внутрішню сторону поверхні віріона (Waterson et al. , 1963; Flewett, Apostolov, 1967). Було припущено, що М-білок вірусу грипу утворює ікосаедрічеськая оболонку під подвійним ліпідним шаром і таким чином виступає як свого роду капсида вірусу (Schulze, 1973). Однак більш пізні експерименти не підтвердили наявності у віріонів ікосаедріческой симетрії, і, дійсно, є вагомі причини на користь того, що така симетрія для віріонів грипу малоймовірна. Хоча й є інші приклади віріонів з ікосаедріческой симетрією, які можуть існувати або у вигляді довгих трубчастих структур, або у вигляді ікосаедра, сферичні віріони грипу мають розміри, що лежать в широких межах, а досі немає прецеденту, коли ідентичні субодиниці утворили б ікосаедрічеськая календ з безперервним набором розмірів. Більшість спостережуваних віріонів не має контурів, характерних для ікосаедріческой симетрії, а іноді спостерігаються незграбні контури можуть бути результатом деформації. Таким чином, для переконливого доказу наявності у вірусної оболонки ікосаедріческой симетрії потрібні додаткові аргументи.

  Б. ПОВЕРХНЕВІ «ШИПИ»

  Оскільки питання про будову гемаглютиніну та нейрамінідази будуть присвячені гл. 3 і 10, тут ми коротко торкнемося цієї проблеми.

  1. Гемаглютинін

  Як вже було зазначено, поверхневий «шип» гемаглютиніну формується з субодиниць гликопротеида з молекулярною масою приблизно 75 000-80 000. Гликопротеид може перебувати або у вигляді однієї поліпептидного ланцюга II А, або у вигляді комплексу продуктів її протеолітичного розщеплення - HAi і НА2, які продовжують утримуватися поруч один з одним за рахунок наявності між ними дисульфідом містків.

  У дослідженнях з використанням для руйнування віріонів ефіру було показано, що з вірусу може бути ізольований компонент, що володіє гемагглютінірующей активністю (Hoyle, 1952; Scharer, Zillig, 1954) і що при негативному контрастуванні субодиниць гемаглютиніну спостерігаються розеткоподобние структури діаметром 30-40 нм, в яких частинки, ідентичні присутнім на поверхні віріона, розташовуються радіально (Hoyle et al., 1961; Choppin, Stoeckenius, 1964). Laver і Valentine (1969) ізолювали поверхневі «шипи», використовуючи штам, в якому гемаглютинін був стійкий до обробки додецилсульфатом натрію (SDS). Ці структури мали діаметр близько 4 нм і довжину 14 нм. Після видалення SDS структури агрегованих ідентичними кінцями, що вказує на гідрофобний характер цих областей поверхневих «шпильок». Грунтуючись на розмірах «шпильок» гемаглютиніну, визначених за електронно-мікроскопічним знімкам, Laver і Valentine (1969) встановили, що їх молекулярна маса повинна бути не менше 150 000. Після того як стало ясно, що поверхневі «шипи» формуються з білкових молекул з молекулярною масою 75 000-80 000, було припущено, що дві такі білкові молекули (що представляють собою комплекс HAi і НА2) утворюють «шип» гемаглютиніну (Laver, 1971; Stanley, Haslam, 1971; Skehel, Schild, 1971). Пізніше за допомогою седиментаційних методів (Brand, Skehel, 1972) було з'ясовано, що молекулярна маса «шпильок» гемаглютиніну дорівнює 215 000, а їх вивчення за допомогою методу електронної мікроскопії показало, що вони мають трикутну форму, якщо дивитися в торець виступу (Laver, 1973; Griffith, 1975). У зв'язку з цим було зроблено висновок, що кожен «шип» гемаглютиніну є тримером, що складається з трьох НА-поліпептидів, кожен з яких є комплексом HAi + + НА2.

  Гідрофобне властивість заснування «шипа» гемаглютиніну вказує на те, що саме ця область визначає його зв'язок з вірусною мембраною (Laver, Valentine, 1969). Впоследствие було показано, що після обробки протеазой можна отримати вірусні частки, що зберігають у своєму складі поліпептид НА2, але не володіють гемагглютінірующей активністю і не містять помітних поверхневих «шпильок» (Compans et al., 1970а). Це доводить, що саме НА2-частина молекули НА-відповідає за зв'язок «шипа» з поверхнею віріона. Це узгоджується з висновком Brand і Skehel (1972) про те, що «шипи» гемаглютиніну можуть бути солю-білізіровани за допомогою протеази і при цьому вони втрачають лише невелику частину лоліпептіда НА2. Такі частинки нездатні ж агрегації і можуть бути кристалізувати. Таким чином, наведені факти ясно показали, що НА2 - частина гликопротеида НА-містить гидрофобную область і відповідає за зв'язок «шипа» гемаглютиніну з мембраною. Деталі механізму взаємодії «шипа» з вірусною мембраною ще не зовсім ясні. Проте вже зараз можна стверджувати, що, як буде детально обговорено далі, ліпіди вірусної мембрани згруповані в подвійний шар і лише невелика частина «шипа» гемаглютиніну проникає в цей шар. Саме тому невеликий за молекулярною масою пептид, який містить велику кількість гідрофобних амінокислотних залишків, ймовірно, залишається в складі вірусної частки після її обробки протеазой (Compans, неопубліко-занние дані). Протеаза лише незначно змінює структуру ліпідного подвійного шару і, ймовірно, ця структура стабілізується більшою мірою ліпід-ліпідним взаємодією, ніж зв'язком між глшдапротеіднимі і ляпід-ними молекулами (Compans et al., 1970a; Landsberger et al 1971, 1973).

  2. Нейрамінідазу

  У роботі, в якій з різних штамів вірусу грипу ізолювали поверхневі «шипи» гемаглютиніну (La-ver, Valentine, 1969), крім того, виділяли структури відмінною морфологією, володіють нейрамінідазной активністю. Це спостереження підтвердило думку про те, що на поверхні віріонів грипу є два різних типи «шпильок». «Шипи» нейрамінідази мали видовжену головку розміром приблизно 5x8, 5 нм, приєднаної до ниткоподібної ніжці довжиною близько 10 нм, на кінці якої було невелике потовщення діаметром 4 нм. У відсутність детергента ці структури злипалися своїми кінцями, утворюючи розетки. Отже, в їх складі також є гідрофобні області. Хоча з віріонів за допомогою детергентів і ізолювали два різних типи поверхневих структур, їх не вдалося дотепер розрізнити на поверхні необроблених вірусних частинок, що, ймовірно, пояснюється їх близьким розташуванням у вірусній оболонці. Це може бути також обумовлено труднощами ідентифікації «шпильок» нейрамінідази на тлі великого числа поверхневих структур гемаглютиніну.

  Як було вже надано, молекулярна маса мономерной субодиниці NA лежить в межах 55000-65 000. Є біохімічні та морфологічні аргументи на користь того,

  що нейрамінідазной «шип» представляє СТОВ тетрамер з молекулярною масою 200 000-250 000 (Kandal, Eckert,. 1972; Bucher, Kilbourne, 1972; Lazdins et al., 1972; Wrigley i '. t al .. 1973). Електронно-мікроскопічні. Дослідження нейрамінідази після її обробки трипсином виявили структури, які з чотирьох сфер діаметром 4 нм, згрупованих у квадратну компланарності структуру (Wrigley et al., 1973). Такого роду тетрамер на вигляді збоку відповідає витягнутої голівці нейрамінідазной «шипа»,, ізольованого за допомогою детергента. За допомогою обробки трипсином руйнувалася стеблеобразная нитка субодиниці нейрамінідази.

  Так само як у випадку гемаглютиніну, механізм приєднання нейрамінідази до вірусної мембрані не зовсім ясний. Ймовірно, подібно до «шіпу» гемаглютиніну, «шип» нейрамінідази має гідрофобну область, яка залучена в це взаємодія і за певних умов схильна до дії протеази.

  В. ПОДВІЙНИЙ ЛІПІДНИЙ СЛОЙ

  У зв'язку з тим що віріони грипу утворюються в процесі відбруньковування від плазмових мембран, причому вірусні частки отримують свої ліпіди саме від цих клітинних ор-ганелл, цілком імовірно, що організація ліпідів у вірусній оболонці дзеркально відображає організацію ліпідного шару плазмових мембран клітини. Наявні в даний час дані вказують на те, що-вірусні ліпіди організовані в структуру, що представляє собою подвійний ли-Підну шар. Дослідження, проведені за допомогою методу електронного парамагнітного резонансу (ЕПР) при використанні спін-мічених похідних стеаринових кислот, показали, що в вирионах грипу мається саме двошарова структура ліпідів (Landsberger et al., 1971, 1973). Градієнт рухливості спінових зондів, характерний для структур тина подвійного шару (McConnell, McFarland, 1972), спостерігався також і в разі спін-мічених віріонів грипу. Якщо 'спіновий зонд, що містить нітроксідное ядро, був прикріплений близько до полярного кінця молекули стеаринової кислоти, він перебував у вирионе в області з відносно високим ступенем впорядкованості ліпідного шару. Якщо ж ця група перебувала відносно далеко від. Карбоксильного кінця молекули стеаринової кислоти, то її оточення більш наближалося до Рідкофазний станом. На 9 наведені спектри ЕПР віріонів грипу з включеними в них спін-міченими стеаринової кислоти і спектри еритроцитів людини, отримані в аналогічних умовах; в разі обох мембран спектри дуже подібні.

  На підставі експериментів, проведених з з'єднанням, яким мітили поверхневі структури, був зроблений висновок, що структура фосфоліпідів поверхневих мембран-клітини асиметрична, причому холінсодержащіе молекули в основ-н:> м зосереджені в зовнішній частині подвійного шару, в той вре-VR як амінофосфоліпіди розташовані в його внутрішній частині (Bretscher, 1972, 1973).
 Властивий чи такий тип структури вірусної оболонці, поки не ясно, проте існуючі г даний час дані про організацію ліпідної оболоч-УМ ларагріппозних вірусів (Klenk, Choppin, 1969, 1970а) не узгоджуються з твердженням про те, що фосфатіділетанол-iMira і фосфатидилсерин завжди розташовані на внутрішній частині подвійного ліпідного шару, а фосфатидилхолін - на його зовнішньої частини. Відношення кількості аедінофосфоліпідов до кількості холінсодержащіх фосфоліпідів варіює в ши-z екіх межах для вірусів, вирощених на «льотках різних типів, і це ставлення корелює з аналогічною величиною для клітин-господарів. У зв'язку з тим, що всі досліджені віруси парагрипу містили в 'поверхневому шарі однакові білки, затвердження про можливе витіснення ли-пидов з частини' біелоя за рахунок впровадження туди білкових молекул (Bretscher, 1973), не узгоджується з наявністю відмінностей з фосфоліпідних складі. У зв'язку з цим можливо, що різне співвідношення ліпідів відображає різний розподіл індивідуальних фосфоліпідних молекул у внутрішній і зовнішній частинах подвійного ліпідного шару.

  У ультратонких зрізах вирион грипу має характерну мембранну структуру, морфологічно подібну зі структу-еой поверхневої клітинної мембрани «льотки-господаря (див. 6-8). Зовнішній вигляд вірусної оболонки залежить як від виду клітин, на яких вірус вирощували, так і від виду електронно-мікроскопічного контрастування (Compans, Dimmock, 1969). Якщо на поверхні клітини вдається виявити елементарну мембрану, в вірусної частці спостерігається мембрана аналогічного виду. Зовнішній шар вірусної мембрани покритий поверхневими «шпильками», а на внутрішній поверхні був виявлений додатковий шар з високою електронною щільністю, який не виявляється в нормальній клітинній мембрані. Як буде показано далі, цілком імовірно, що цей шар відповідає локалізації на внутрішній поверхні подвійного ліпідного шару молекул М-білка.

  Розподіл контрастної речовини після фіксації мембран осмієм, ймовірно, відображає локалізацію амннофос-фоліпідов (Bretscher, 1973). При фіксації і контрастуванні осмієм чітко фарбуються як внутрішній, так і зовнішній шари листка елементарної мембрани клітин MDBK, в той час як в клітинах BHK21-F або клітинах курячих фібробластів забарвлюється тільки цитоплазматический шар. Забарвлення зовнішнього шару віріонів грипу, вирощених на «льотках MDBK, корелює з більш високим вмістом амінофоофоліпідов в цих клітинах (Klenk, Choppin, 1970а) і можливо, що в цих умовах амінофосф'Оліпіди розподілені на обох сторонах подвійного шару, в той час ка, до вони відсутні на внутрішній поверхні ліпідного шару клітин BHK21-F.

  У вмріонах грипу виявляються також гліколіпіди, причому їх локалізацію на зовнішній 'поверхні подвійного ліпідного шару продемонстрували агглютинацией віріонів за допомогою специфічних лектинів (Klenk et al., 1972а).

  У інтактних вирионах гліколіпіди закриті, але стають доступними для лектинів після видалення поверхневих «шпильок» з ломощью обробки протеазой.

  Г. МЕМБРАННИЙ БІЛОК

  Як вже було зазначено, при вивченні за допомогою електронного мікроскопа забарвлених ультратонких зрізів віріонів грипу на внутрішній поверхні вірусної оболонки спостерігається додатковий шар з високою електронною щільністю (див. 7 і 8). Цей шар не виявляється в нормальних цітсшлазматіческіх мембранах (Apostolov, Flewett, 1969; Kendal et al., 1969; Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969; Apostolov et al., 1970). В даний час існує декілька незалежних груп аргументів на користь того, що цей шар утворений самим низькомолекулярним і найбільш широко представленим білком віріона, званим мембранним, або матриксних, білком (М-білок). Докази ці наступні: 1) глікопротеїнові «шипи» можуть бути вилучені за допомогою протеолітичних ферментів при збереженні М-білка і шару з високою електронною щільністю (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970, 1972; Kendal et al., 1969). Після такої обробки, окрім М-білка в складі віріона ^, залишаються тільки білок NP і Р-білки, і жоден з них не може бути відповідальним за наявність шару з високою електронною щільністю. Кілька адолекул Р-білків, присутніх в вирионе, не можуть утворити такий шар, а білок NP знаходиться у внутрішній частині віріона, входячи до складу спірального нуклеокапсида; 2) розрахунки показують, що тільки М-білок присутній в вирионе в (кількості, достатній для формування безперервної оболонки товщиною 4-6 нм під подвійним ліошдньш шаром (Compans et al., 1972; Schulze, 1972), 3) після екстракції ліпідів з фіксованих, позбавлених поверхневих «шпильок» віріонів

  залишається оболонка, яка може 'бути утворена тільки М-білком (Schulze, 1972), 4) експерименти з йодированием хлораміном Т показали, що М-білок, хоча і не розташований па поверхні віріона, є зовнішнім по відношенню до пуклеонротеіду (Stanley, Haslam , 1971), 5) дослідження,. проведені за допомогою методу спектрофлуорометріі, показали можливість перенесення енергії з М-білка на флюоресцентний зонд, впроваджений в ліпідний бішар віріона (Lenard et al., 1974).

  Наведені аргументи вказують на тісний зв'язок М-білка з внутрішньою частиною мембрани; проте цей білок, ймовірно, не пронизує наскрізь подвійний ліпідний шар і не виступає на зовнішню сторону мембрани. Це доводиться відсутністю дії на цей білок протеолити-чеських ферментів (Compans et al., 1970a; Schulze, 1970; Klenk et al., 1972a), недоступністю М-'білка для речовин, специфічно реагують з поверхневими білками (Stanley, Ha'slam , 1971; Rifkin et al., 1972), і неможливістю виявити внутрімембранние частинки при вивченні мембран вірусу грипу за допомогою методу сколів при заморожуванні (Bachi et al., 1969).

  З самого просторового розташування М-білка, що утворює каркас подвійного ліпідного шару, і того факту, що глікопротеїнові поверхневі «шипи» не грають основної ролі в підтримці форми і цілісності вірусної мембрани, можна зробити наступний висновок: ймовірно, М-білок у вірусній оболонці грає основну структуруючу роль. Крім того, цей білок володіє і іншими функціями, які випливають з його розташування і властивостей. Під час складання оболонкових вірусів нуклеокапсид розташовується під тією ділянкою клітинної мембрани, який містить вірусні поверхневі білки, що вказує на існування «впізнавання» нуклеокапсидом цієї ділянки мембрани.

  Далі, під час збірки і отпочковиванія вірусна оболоч-. ка формується з клітинної мембрани, проте в вирионе не міститься білків клітини-хазяїна, що є додатковим аргументом на користь можливості міграції білків в площині клітинної мембрани. Ці факти наводять на думку, що вірус має механізм для підтримки локалізації своїх компонентів поблизу тієї частини клітинної мембрани, яка містить вірусні білки і з якої вилучені клітинні білки. Як вже передбачалося, найбільш вірогідним кандидатом, що здійснює як «впізнавання» місця локалізації 'вірусного нуклеокаісіда, так і підтримання поблизу мембрани вірусних компонентів, є М-білок (Choppin et al., 1972; Choppin, Compans, 1975; Compans, Choppin, 1975 ; Choppin, 1975).

  Нуклеокапсид

  Внутрішня структура віріонів грипу при негативному контрастуванні препаратів проявляється досить рідко, тому основна інформація про структуру внутрішнього ри-бо-нуклеоіротеіда (РНП) була отримана гару вивченні ізольованих РНП і вірусних частинок за допомогою ультратонких зрізів. Існує загальна думка, що РНП представлений в вір'Іоне у вигляді окремих фрагментів, кожен з яких складається з однієї молекули РНК, великого числа однакових молекул поліпептада NP і, ймовірно, з однієї або декількох молекул полімер-ази Р.

  Рі'бонуклеоп'ротеід може бути виділений з віріонів в градієнті щільності після їх руйнування за допомогою обробки такими детергентами, як NP40 або ефір. Якщо структури, отримані після такого виділення, досліджувати за допомогою негативного контрастування уранілацетатом або фоефовольфрамовой кислотою (10 і 11), можна спостерігати нитки діаметром 10-15 нм, довжина яких варіює в межах 30-110 нм (Pons et al., 1969; Schulze et al., 1970; Corapans et al., 1972). Нитки іноді мають петлі на одному з кінців і добре помітні повторювані сліди глибокої і дрібної борозенок, що свідчать про те, що ця структура утворена ниткою, закрученої і згорнутої в подвійну спіраль. На 12 [показана гіпотетична модель РНП. Препарат РНП можна Фракціоновані на декілька класів розрізняються до розмірами молекул за допомогою швидкісної седиментації, що відображає наявність у сумарній фракції фрагментів РНК з різною молекулярною масою (, Duesberg, 1969; Pon's, 1971). Фракції після поділу містять структури однакового діаметра і істотно різної довжини (Compans et al., 1972). Розподіл по довжині ізольованих РНП було вивчено в дослідах з використанням як контрастує речовини уранілацетатом, який переважно зв'язується з нуклеїнової кислотою (див. 11). Найбільш швидко седімен-тірующій РНП має максимум на кривій розподілу фрагментів за довжиною при 90-ПО нм, РНП з середніми розмірами - при 60-90 нм і найкоротший РНП - при 30 - 50 нм. Ці значення довжини РНП можуть бути окорреліровани з молекулярною масою нуклеїнових кислот, що входять до складу РНП різних класів. Так, найбільший за розмірами РНП містить РНК з самою 'великою молекулярною масою-106 (див. розділ II цієї глави і гол. 6). У РНП приблизно 10-12% маси доводиться на РНК, а решта - на білок, який практично повністю представлений еуб'-едівіцамі поліпептиду NP (Ponse et al., 1969; Krug, 1971). Використовуючи ці дані, можна розраховувати, що на 100 нм

  нитки РНП припадає близько 150 субодиниць білка з молекулярною масою 60 000, тобто один виток спіралі РНП містить приблизно 12 субодиниць цього 'білка, і на одну білкову субодиницю припадає 20 нуклеотидів (Compans et al., 1972).

  Дослідження віріонів грипу за допомогою методу ультратонких зрізів підтвердило ту точку зору, що вірусний РНП являє собою всередині 'вірусної частки набір коротких фрагментів РНП (Compans, Dimmock, 1969; Bactu et al., 1969; Compan's et al., 1970b; Shulze, 1973 ). Віріони в момент отпочковиванія зазвичай злегка витягнуті і внутрівен-вірусні нитки РНП розташовуються паралельно довгій осі частинки (Compans, Dimmock, 1969). Негативний контрастування за допомогою уранілацетатом вірусних частинок, позбавлених поверхневих «шпильок» при обробці протеазой, виявило наявність великої кількості внутрівірусних ниток, морфологія яких збігалася з морфологією РНП, ізольованого з віріонів за допомогою обробки детергентом (Schulze, 1973). Таким образам, різні методичні прийоми, що дозволяють спостерігати внутрішню структуру більшого числа вірусних частинок популяції, виявляють, що РНП знаходиться в вірусної частці у фрагментованому стані. При негативному контрастуванні в деяких вирионах спостерігаються великі бухтообразние структури (Apostolov, Flewett, 1965; Almeida, Waterson, 1970; Schulze et al., 1970). Передбачалося, що ці структури представляють собою «ін-тактні» нуклеокапсиди віріонів грипу та що РНП, який ізолюється з вірусних частинок, є продуктом фрагментації цих структур (Almeida, Waterson, 1970). Однак наявність петель на одному з кінців ізольованою нитки нук-леО'Протеіда, а також той факт, що довжини ниток згруповані в дискретні групи (Compans et al., 1972),. Підтверджують точку зору, згідно з якою отримані при ізоляції з (віріонів нитки РНП не є прямими продуктами фрагментації великих за розмірами структур. Крім того, як вже було описано, при дослідженні ультратонких зрізів вірусних частинок, коли дозволяється внутрішня структура більшості віріонів, 'великі бухтообразние структури виявляються дуже рідко, а іноді і взагалі не спостерігаються. В. деяких випадках подібні структури знаходять в інфікованих клітинах, проте ще немає доказів, що вони мають якесь відношення, до вірусних РНП. Наявність зв'язку цих бухтообразних структур з вирио-нами буде доведено тільки після їх ізоляції в чистому вигляді і визначення їх хімічного складу.

  На підставі високої частоти рекомбінацій, характерною для вірусів грипу (див. гл. 7), передбачалося, чтс »фрагменти РНП включаються до вірусну частку з внутрішньоклітинного резервуара випадково (Hirst, 1962). Хоча може бути строго доведено, що в результаті такого випадкового процесу лише в рідкісних випадках формуватимуться ві-Ріоні, що містять всі фрагменти геному, необхідні для здійснення інфекційне, тим не (менше відносна кількість інфекційних віріонів в 'популяції вірусу значно збільшиться, якщо віріони будуть містити надмірну кількість фрагментів РНК (Compans et al., 1970b). Доказ випадкового включення фралментов РНК в віріони грипу грунтується на спостереженні Hirst і Pons (1973), що полягає в тому, що агрегати віріонів грипу, як виявляються при нормальних умовах, так і утворені штучно за допомогою нуклеогістона, мають підвищену инфекционностью. Ці результати вказують на наявність комплементації двох або більшої кількості вірусних часток, кожна з яких окремо не містить - повного набору 'фрагментів РНК, необхідного для здійснення інфекційності.

  Рибонуклеопротеид вірусу грипу за деякими своїми властивостями відрізняється від спірального нуклеокапсида пара-міксовіруеов. РНК нуклеопротеида вірусу грипу на відміну від РНК у складі нуклеокапсида парамиксовирусов (Compans, Choppin, 1968) чутлива до дії рибо-нуклеази (Duesberg, 1969; Kingsbury, Webster, 1969; Pons. Et al., 1969). Обробка РНП вірусу грипу полівінілсуль-фатом вивільняє РНК і утворює. Комплекс субодиниць. Білка з полівінілсульфатом, структура якого дуже сход-

  на зі структурою РНП (Pons et al., 1969; Goldstein, Pons, 1970). Нуклеокалсіди парамиксовирусов нечутливі до такої обробці (Goldstein, Pons, 1970). Таким чином, механізми взаємодії РНК - білок для цих двох структур істотно різні, причому РНК вірусу грипу, що входить до складу РНП, ймовірно, більш доступна зовнішнім - впливів.

  Рибонуклеопротеид вірусу грипу чутливий також до дії протеази (Pons et al., 1969). При низьких концентраціях пронази РНП не змінює свої седиментаційні параметри, однак при попередній обробці препарату рібонуклеазою проказа призводить до деградації РНП (Duesberg, 1969). Отже проназа може розщеплювати зв'язку між субодиницями білка, що не впливаючи на структури, цілісність яких визначається взаємодією білкових субодиниць з молекулами РНК.

  З РНП, ізольованим з віріонів грипу (Bishop, 1972) або з інфікованих їм клітин (Caliguiri, Compans, 1974), ймовірно, пов'язані мінорні поліпептиди Р. Оскільки в кожному фрагменті РНП може міститися лише кілька молекул цих поліпштідов, здається малоймовірним, що вони грають якусь роль у підтримці структури РНП. Точна локалізація молекул поліпептидів Р поки невідома. Ймовірно, вони приєднуються до РНП менш міцно, ніж молекули поліпептиду NP, оскільки вони можуть видалятися під час очищення (Schulze, 1973). Мінорні поліпептиди Р можуть входити до складу вірусної транскріп-тази (Bishop et al., 1972) або 'бути инициаторного полипеп-тидами для «одягання» РНК білком РНП.

  IV. Складання віріонів

  Збірка віріонів грипу (див. гл. 8) здійснюється під час їх отпочковиванія від плазмової мембрани. Цей процес буде розглянуто в гол. 8 і раніше докладно обговорювалося в літературі у відношенні не тільки вірусів грипу, але й інших вірусів, 'що формуються шляхом отпочковиванія від клітинних мембран (Compans, Choppin, 1971, 1973, 1975; Choppin et al., 1971, 1972; Lenard, Compans, 1974; Compans et al., 1974; Klenk, 1973, 1974; Choppin, Compans, 1975). У зв'язку з цим тут ми лише коротко підсумовуємо дані про збірку віріонів грипу, наявні в даний час. РНП вірусу грипу синтезується в цитоплазмі і розташовується під тими областями клітинної мембрани, які містять вірусні поверхневі білки. Потім вирион формується за рахунок процесів отпочковиванія та відділення від плазмової мембрани. Під час процесу отпочковиванія елементарна мембрана знову утворюється віріона соявляет одне ціле з аналогічною мембраною, локалізованої на поверхні хазяйської клітини (Compans, Dimmock, l% 9; Bachi et al., 1969). Глікопротеїди, ймовірно, спочатку. Пч'оцііруются з внутрішньоклітинними мембранами, а потім іюдходят до плазмової мембрані (Compans, 1973a, b; Stan-Icy et al., 1973; Klenk et al., 1974; Hay, 1974), що можна виявити за допомогою специфічної адсорбції еритроцитів м.ч плазмових мембранах 'Інфікованих клітин (Сот-p.-ins, iDimmock, 1969). Потім, ймовірно, на внутрішню по-iH'pxHocTb плазмової мембрани адсорбується М-білок, формуючи чітко помітний шар з високою електронною щільністю (Apostolov, Flewett, 1969; Compans, Dimmock, 1969; Bachi et al., 1969). Глікопротеїди і М-білок виявляються в асоційованому з плазмовими мембранами вигляді при введенні короткою пульсової мітки (Lazarowitz et al., 1!) 71). Наявність М-білка, мабуть, сприяє утворенню «посадкових місць» для РНП, потім інкорпорує в віріони при їх отпочкованию. Зміна форми плазмової мембрани, яке супроводжує отпочкованию, можна пояснити асиметричним розтягуванням зовнішньої частини подвійного ліпідного шару за рахунок впровадження в нього поверхневих білків за механізмом, подібному з механізмом, запропонованим Sheetz і Singer (1974) для дії амфіпатіческіх. Ліків, які індукують зміна форми клітинних мембран . Процес складання віріонів закінчується формуванням цілісних вірусних і клітинних мембран шляхом їх «сплавления» в областях, де сталося відбруньковування вірусних частинок. В результаті цього процесу формуються або сферичні, або филаментозному віріони. Механізм, за допомогою якого вірусний геном контролює морфологію вірусних частинок, в даний час ще не з'ясований.

  V. ВИСНОВОК. МОДЕЛЬ віріони ГРИПУ

  На 12 наведена схематична діаграма віріона грипу, заснована на відомих у даний час відомостях про його структурі. Ця (модель відображає як добре встановлені структурні дані, так і дані, які ще потребують свого підтвердження. Як вказувалося, в даний час мають місце альтернативні пояснення деяких особливостей будови віріона грипу. Не всі деталі структури вірусної частки знайшли відображення на наведеній диаграм! Ме (наприклад, на ній не показано оли-гомерное будова поверхневих «шипів»). Ці деталі обговорюються в цьому розділі, а також в гол. 3 і 10. Існуючі в даний час дані дозволяють зробити висновок, що інформація про синтез усіх вірусних білків міститься в

  вірусному геномі, а склад ліпідів і послідовність цукрових залишків у вуглеводних ланцюжках, приєднаних, до глікоіротеідам або гліколіпідами вірусної мембрани, визначаються у великій мірі, якщо не повністю, клітиною-господарем. Віріони можуть (являти собою або сферичні частинки діаметром 80-120 нм, або филаментозному освіти того ж діаметру з різною довжиною.

  Поверхня віріона покрита виступами або шипами. Ці шипи являють собою олігомерні структурні утворення, сформовані з глікопротеїдів, що володіють або гемагглютінірующей (НА), або нейрамінідазной (NA) активністю. «Шип» 'гемаглютиніну складається з трьох НА-поліпелтідов з молекулярною масою приблизно 80 000, які організовані у паличковидну структуру довжиною приблизно 14 нм. У певних умовах полипеп-тид НА може розщеплюватися за допомогою протеолнтіческіх ферментів на два поліпептиду HAj і НА2, пов'язаних один з одним дисульфідними зв'язками. Таке розщеплення не є необхідною умовою для правильного складання віріона і для здійснення гемагглютінірующей активності. НА2 - частина поліпептиду НА - гідрофобна і містить у своєму складі область, безпосередньо взаємодіє з вірусною мембраною.

  «Шип» нейрамідазі сформований чотирма полипептидами NA з молекулярною масою близько 55 000. Поліпептиди являють собою освіти з потовщеннями на кінці діаметрохМ близько 4 нм, які сформовані в планарниє структури, що мають витягнуті бічні проекції. Ці потовщення приєднані до ниткоподібним «хвостах» довжиною близько 8 нм, зануреним у вірусну мембрану. Детальний механізм прикріплення поверхневих «шпильок» до вірусної мембрані ще не з'ясований. «Шипи» як гемаглютиніну, так і нейрамінідази мають гідрофобні підстави, здатні приєднатися до подвійного липидному шару мембрани 'вірусної частки (за рахунок гідрофобної взаємодії. Проте поверхневі «шипи», ймовірно, не пронизують ліпідний шар наскрізь і не занурені в нього на значну глибину (однак неглибоке проникнення можливо). «Шипи» можуть бути видалені з вірусної мембрани без порушення її цілісності.

  На внутрішній стороні подвійного ліпідного шару знаходиться шар,. сформований неглікозідірованним М-білком з молекулярною масою близько 25 000. Передбачається, що цей білок може здійснювати в вірусної оболонці основну структурну роль, стабілізуючи її і, ймовірно, визначаючи її форму. Крім того, цей білок може відігравати важливу роль лрі збірці вірусних частинок, з одного боку, будучи свого роду «посадкової майданчиком» на клітинній мембрані-

  задля нуклеокапсида, ас іншого-обмежуючи ту частину 'плазмової мембрани, яка містить виключно ві-руеспеціфіческіе білки.

  Всередині вірусної оболонки міститься кілька фрагментів нуклеокапсида. Вони являють собою двухспіраль-пие структури різної довжини, утворені субодиницями іслка NP з молекулярною масою близько 60 000 і містять різні відрізки фрагментированного однонитчатим l'HK-генома. Всередині вірусної оболонки, крім того, локалізовані білки Р з молекулярною масою приблизно ПО 000 (ймовірно, вони асоційовані з нуклеокалсідом ще неясним нині чином). Функція цих білків поки не з'ясована, проте передбачається, що вони здійснювала-кляют вірусну транскріптазная активність.



  ЛІТЕРАТУРА

  Ada G. L., Gottschalk A. Biochem. J., 1956, v. 62, p. 686. Ada G. L., Perry B. T. Aust. J. exp. Biol. Med. Soc, 1954, v. 32, p. 453. Ada G. L., Perry В. Т., Abbot A. J. Gen. Microbiol., 1958, v. 19, p. 23. Agrawal H. O., Bruening G. Proc. Nat. Acad. Sci. U. S., 1966

  Almeida J. D., Waterson A. P. J. gen. Microbiol., 1967, v. 46, p. 107. Almeida J. D., Waterson A. P. In: The Biology of Large RNA Viruses

  (RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press, 1970

  Apostolov K., Flewett Т. Н. Virology, 1965, v. 26, p. 506. Apostolov K., Flewett Т. Н. J. gen. Virol., 1969, v. 4, p. 365. Apostolov K-, Flewett Т. Н., Kendall A. P. In: The Biology of Large RNA

  Viruses (RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press,

  1970, p. 3-26. Archetti 1., Jamelo A., Steve-Bocciarelli D. Arch. ges. Virusforsch., 1967,

  v. 20, p. 133. Bachi Т., Gerhard W., Lindenmann J., Muhlethaler K. J. Virol., 1969

  Barry R. D., Bromley P. A., Davies P. In: The Biology of Large RNA Viruses (RD Barry and BWJ Mahy, eds.), New York, Acad. Press,

  1970, p. 279-300.

  Bishop D. H. L., Obijeski J. F., Simpson R. W. J. Virol., 1971, v. 8, p. 74. Bishop D. H. L., Roy P., Bean W. J., Jr., Simpson R. W. J. Virol., 1972

  Blough H. A. Virology, 1963, v. 19, p. 349.

  BloughH. A. J. gen. Virol., 1971, v. 12, p. 317.

  Blough H. A. Nature (London), 1974, v. 251, p. 333

  Blough H. A., Merlie J. Virology, 1970, v. 40, p. 685. Blough H. A., Tiffany J. M. Advan. Lipid Res., 1973, v. 11, p. 267. Blough H. A., Weinstein D. В., Lawson D. E. M., Kodicek E. Virology, 1967,

  v. 33, p. 459. Brand С. М., Skehel J. J. Nature (London), New Biol., 1972, v. 238,

  p. 145.

  Bretscher M. Nature (London), New Biol., 1972, v. 236, p. 11.

  Bucher D. J., Kilbourne E. D. J. Virol., 1972, v. 10, p. 60.

  Caliguiri L. A., Compans R. W. J. Virol., 1974, v. 14, p. 191

  Choppin P. W. Virology, 1963, v. 21, p. 278. 
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Структура вірусу грипу"
  1.  Кільбурн Е.Д.. Віруси грипу та грип (1978), 1978
      Книга присвячена огляду різноманітних вірусів грипу, їх культивування, біохімії і особливостям молекулярного пристрою. Зміст: Віруси грипу та грип. Структура вірусу грипу. Біологічно активні білки вірусу грипу. Гемаглютинін. Біологічно активні білки вірусу грипу. Нейрамінідазу. Активність транскриптази в клітинах і вирионах грипу. РНК вірусів
  2.  Біологічно активні білки вірусу грипу. Гемаглютинін
      І. Т. ШУЛЬЦ (I. Т. SCHULZE) I. ВСТУП ТОЙ факт, що віруси грипу мають здатність агглютинировать еритроцити, відіграв велику роль у розвитку наших уявлень про ці інфекційних частинках. Гемаглютинація виявилася вкрай зручним методом для ідентифікації, очищення і визначення. Концентрації вірусів. Крім того, з (моменту виявлення явища гемагглю-тінаціп 35 років тому
  3.  Імунологія грипу
      Дж. Л. ШУЛЬМАН (J. L. SCHULMAN) I. ВСТУП Незважаючи на 40-річний період інтенсивного лабораторного вивчення і майже такий же період,: впродовж якого розробляються вакцини проти трііпа людей, існують величезні прогалини в нашому. Розумінні імунних механізмів при грипі. Ця неповнота наших знань значною мірою є наслідком унікальною і приголомшливою здатності
  4.  Морфологія високопатогенного грипу птахів
      Популяції вірусу грипу характеризується гетерогенність форми і розмірів віріонів (малюнок 6). У більшості віріонів форма близька до сферичної, з середнім діаметром 80-120 нм. Довжина ниткоподібних віріонів, характерних для свежевиделенних епідемічних штамів, перевищує в кілька разів розміри сферичних частинок [17]. Після 2-3 пасажів вірусу через курячі ембріони в популяції переважають
  5.  ДЕСТРУКТИВНІ ЗАХВОРЮВАННЯ ЛЕГЕНЬ
      Розрізняють три основні клініко-морфологічні форми: абсцес, гангренозний абсцес і гангрену легені. Абсцесом легені називається більш-менш обмежена порожнина, що формується в результаті гнійного розплавлення легеневої паренхіми. Гангрена легені являє собою значно більш важкий патологічний стан, що відрізняється поширеним некрозом і іхо-розное розпадом ураженої
  6.  СИСТЕМНА СКЛЕРОДЕРМІЯ
      - Прогресуюче полісиндромне захворювання з характерними змінами шкіри, опорно-рухового апарату, внутрішніх органів (легені, серце, травний тракт, нирки) і поширеними вазоспастична порушеннями по типу синдрому Рейно, в основі яких лежать ураження сполучної тканини з переважанням фіброзу і судинна патологія в формі облітеруючого ендартеріїту.
  7.  ЕТІОЛОГІЯ
      Визначення етіології гострих пневмоній все ще залишається важко вирішимо проблемою. В умовах практичної медицини встановити справжню причину хвороби досить складно. Навіть виділення з мокротиння хворого певних бактерій ще не означає, що саме цей мікроорганізм є винуватцем захворювання. Для підтвердження етіологічної ролі знайденого при мікроскопічному дослідженні мікроба
  8.  КЛІНІКА ГОСТРИХ первинним паренхіматозних ПНЕВМОНІЙ
      значною мірою обумовлена ??видом збудника, особливостями патогенезу, поширення странения запального процесу і станом макроорганізму. Крупозна пневмонія Являє собою найбільш важко протікає форму пневмонії. Вона зустрічається майже в 5% випадків серед всіх гострих пневмоній, характеризується пайовою або сегментарним ураженням легкого і залученням в процес плеври.
  9.  Гнійно-запальні післяпологові ЗАХВОРЮВАННЯ
      Післяпологові інфекційні захворювання - захворювання, які спостерігаються у породіль, безпосередньо пов'язані з вагітністю та пологами і обумовлені бактеріальною інфекцією. Інфекційні захворювання, виявлені в післяпологовому періоді, але патогенетично не зв'язані з вагітністю та пологами (грип, дізентірея та ін), до групи післяпологових захворювань не відносять. ЕТІОЛОГІЯ І ПАТОГЕНЕЗ
  10.  Віруси грипу та грип
      Е. Д. Кільбурн (Е. D. KILBOURNE) I. ВСТУП. ГРИП - ЗАХВОРЮВАННЯ З Незмінних симптоматики, викликає Змінюється ВІРУСОМ Величезний інтерес, який притягається до сучасної вірусології до грипу і вірусів, відповідальним за його виникнення, вимагає пояснення, якщо врахувати ординарний характер симптоматики цього, зазвичай дуже помірного, інфекційного захворювання дихальних шляхів
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека