загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

ПЦР-ММК - метод ранньої діагностики ракових клітин

З першої ракової клітини за рахунок її поділу спочатку в тканині утворюється вузлик в 1-2 мм в діаметрі. Але вже з цього розміру ракові клітини індукують-ють всередині вузлика ангіогенез і лімфангіогенез. З початком відтоку крові і лімфи з вузлика ракові клітини відокремлюються від нього і з кров'ю і лімфою раз-носяться по організму пацієнта - рак стає хворобою всього організму па-цієнта.

З цього випливає, що діагностика раку, будь-якого розміру, відомого оком і за допомогою приладів - це пізня діагностика. Поки в практиці лікаря-онколога діагностика раку тоді, коли рак проявляє себе симптомами.

Вчені різних країн і нашої країни різними методами прагнуть перейти до діагностики раку задовго до його симптомів. Саме на такому етапі хвороби, можна сподіватися на лікування від раку.

Нормальна клітка перетворюється в ракову після впливу на неї якого-небудь канцерогену. Це викликає в ній зміни експресії генів, що створюють її властивості. Друга причина - зміни експресії генів-супресорів в цій клітці метилированием їх промотора, а також мутації. Ці зміни відбуваються в генах, що регулюють процес поділу клітини, в генах, що пригнічують ділення клітини при порушеннях в її геномі, а також у генах, що викликають апоптоз в таких клітинах.

Кожен дефект в геномі ракової клітини є маркером такої клітини. Термін маркер (від англ. Mark - мітка). Діагностика першої ракової клітини і її близьких нащадків по генам-маркерами - це рання діагностика раку у пацієнта.

Але як знайти в організмі пацієнта ракову клітку і її нащадки від перших поділів серед 5 1013-14 клітин організму дорослої людини.

Як і будь-яка клітина, ракова клітина мікроскопічного розміру, виникнувши в тканини, нічим не турбує пацієнта. За рахунок властивості до інвазії її нащадки поширюються в навколишні здорові тканини і по всьому організму, де, осідаючи, дають нові вогнища раку - метастази.

Завдання діагностики розрізнених ракових клітин в тканинах різних органів порівнянна навіть не з пошуком голки в копиці сіна, а з пошуком конкретного пучка сіна в цьому стозі. Тому не потрібно бути занадто великим песимістом, щоб припустити всю «безвихідність» такої ситуації в практиці лікаря-онколога.

Але все змінив метод ПЛР, тобто полімеразна ланцюгова реакція, а в поєднанні з ММК - методом молекулярних колоній, розробленим нашими вченими - чл.-кор. А.Б. Четверін і Є.В. Четверін (2002), став для ранньої діагностики вельми точним.

При будь-якої локалізації раку в кров пацієнта потрапляють: а) самі ракові клітини - зі стінок музичних капілярів вузлика з ракових клітин в 1-2 мм в діаметрі і б) гени-маркери із загиблих ракових клітин ще задовго до прояву як первинного вогнища раку, так і його метастазів. Це і дозволяє виявляти рак у пацієнта з самого початку, тобто з розміру вузлика в 1-2 мм в діаметрі.

Ще в 60-70-х рр.. XX в. Ф. Анкер (Ph. Anker) зі Швейцарії зробив перші спроби довести можливість виявлення дефектних генів з ракових клітин в крові від пацієнта.

Наш учений, проф. А.С. Білохвостов ще в 1960 р. XX в. виявив дефектні гени з ракових клітин яєчника і шлунка в асцитної рідини. Він же з колегами в 1978 р. XX в. довів вихід дефектних генів з ракових клітин в кровотік з пухлин в експерименті на тварин.

Тепер дефектні гени з ракових клітин виявляють за допомогою ПЛР, а також ПЛР-ММК не тільки в крові, але і в інших виділеннях від пацієнта - слина, слізна рідина, слиз, харкотиння, сеча та ін ., залежно від типу ракової клітини.

Ракові клітини руйнуються в тканинах за рахунок апоптозу як клітини з дефектами в геномі, а також при знищенні Т-клітинами. ДНК з них потрапляє в міжклітинну рідину, а з неї в кров. У кров потрапляють ракові клітини з первинного вогнища раку та метастазів. У крові вони руйнуються, в тому числі Т-клітинами.

Молекули ДНК і іРНК не можуть бути поза клітини, зокрема, ракової клітини, а ракова клітина не може бути без ДНК і іРНК. Тому виявлення цих молекул є еквівалентом виявлення їх носія - ракової клітини.

Точно також по молекулам ДНК, РНК діагностують бактерії і віруси - збудників різних інфекцій у пацієнтів.

Виявлення генів-маркерів ракових клітин в їх ДНК є ідеальним методом для ранньої діагностики ракових клітин, контролю лікування і вилікування, а також передбачення та діагностики рецидиву та метастазу раку у пацієнтів.

ПЛР-діагностика ракових клітин по плазмі крові

Процес, завдяки якому можна одержувати копії генів із ДНК в необмеженій кількості, називають полімеразної ланцюгової реакцією - ПЛР.

ПЛР відкрив в 1983 р. американський учений К. Мюлліса (Kary B. Mullis), за що він був удостоєний Нобелівської премії.

Мішенями ПЛР є - фрагмент ДНК з перебувають в ньому геном і іРНК - копія гена.

Мета ПЛР - розмножити фрагмент ДНК із зразка плазми крові пацієнта, тобто отримати його копії, а також розмножити іРНК до рівня, детектуючі-емого стандартними методами. Щоб розмножити іРНК, її спочатку потрібно за допомогою зворотної транскриптази перевести в комплементарную їй ДНК, тобто кДНК.

Таким методом можна виявити експресію гена або генів за рівнем їх мРНК, а також мутації в гені, що стало причиною перетворення нормальної клітини в ракову.

Принцип ПЛР

Для ПЛР-методу з клінічного зразка - плазми крові виділяють суміш всіх розміщених там ДНК і РНК. Далі, щоб зрозуміти принцип копіювання цих молекул, нам не обійтися без деяких знань про їх природу.

Молекула ДНК складається з двох ланцюгів, побудованих з нуклеотидів, основною частиною яких є азотисті основи: аденін - А, цитозин - Ц, гуанін - Г і тимін - Т. Азотисті основи несуть в собі генетичну інформацію про структуру білків, а через них - будову клітини та її функції, а також її відтворення, тобто поділ на дві дочірні клітини.

В англійській мові є слово? Complement? - Доповнювати, доповнення. Від нього в молекулярній біології з'явився термін - компліментарність. Сенс його в тому, що молекули впізнають один одного ділянками, які доповнюють один одного як «ключ і замок».

За цим принципом ланцюга нуклеотидів складають комплементарних пару: А одного ланцюга завжди проти Т іншого ланцюга, а Г проти Ц. Коли А і Т в двох ланцюгах ДНК розташовані один проти одного, між ними утворюються дві водневі зв'язку. Те ж відбувається з Г і Ц, але між ними виникає три водневі зв'язки.

З комплементарності пар основ слід, що послідовність або порядок розміщення азотистих основ на одного ланцюга ДНК, визначає порядок азотистих основ у її іншою ланцюга. Кінці ланцюгів ДНК хімічно різні: у кожної ланцюга є 3'-кінець і 5'-кінець (Мал. 1, 2, 3).



Рис 1.

Фрагмент молекули ДНК

.

Ланцюг ДНК, яка служить матрицею для синтезу матричної РНК називається матричної ланцюгом.



Рис. 2.

Ланцюг мРНК - це копія матричної ланцюга ДНК

, послідовність азотистих основ у ній та ж, що і в нематрічной ланцюга ДНК, але з заміною Т на У.

Ланцюг мРНК за допомогою ПЛР розмножують, але спочатку її за допомогою зворотної транскриптази переводять в комплементарную їй матричну ланцюг ДНК - кДНК.



Рис. 3

. кДНК синтезована на матриці мРНК - копії гена

.

Освіта водневих зв'язків між парами підстав: А-Т і Г-Ц - це спонтанний процес, тобто без участі ферменту. Ці зв'язки слабкі і легко рвуться при нагріванні - ланцюги ДНК відокремлюються один від одного, а при охолодженні розчину - знову спаровуються в колишнє комплементарное стан. Спонтанний процес утворення пар основ А-Т і Г-Ц називають гібридизацією.

В основі ПЛР-аналізу і лежить гібридизація пар основ, як спонтанний процес.

Виділені з зразка плазми крові ДНК і іРНК є мішенями для ПЛР. Їх змішують з реакційним буфером та іншими компонентами ПЛР в спеціальну пробірку і поміщають в прилад - ДНК-ампліфікатор, що дає циклічні зміни температури реакції.

Цикл ПЛР для розмноження молекул-мішеней - ДНК і іРНК складається з трьох стадій:

1) розплавлення двухцепочечной ДНК шляхом підвищення температури реакційного середовища до 90 ° С;

2) знаючи порядок підстав на кінцях фрагмента ДНК, взятого для розмноження, тобто ампліфікації, синтезують хімічним шляхом олігонуклеотиди, комплементарні цим ділянкам - це праймери;

3) приєднання праймерів до матриць, т.
трусы женские хлопок
тобто до однотяжевим ланцюгах ДНК, отриманими в результаті першої стадії. Температура реакційного середовища - 50-60 ° С.

На цій стадії відбувається подовження, тобто елонгація гібрідізоваться праймерів ДНК-полімеразою при температурі для роботи ферменту 70-75 ° С, що перетворює кожну з ланцюгів в двухцепочечную молекулу ДНК (Мал. 4).



Рис. 4.

Схема ПЛР

[рис. і цит. по: А.С. Білохвостов (1995) з зміни-ми]. На схемі цикл подвоєння молекули ДНК з досліджуваного зразка:

а - ланцюги вихідної молекули ДНК зображені двома прямими лініями;

б - після поділу ланцюгів ДНК, до їх кінців приєднані по одному комплементарному праймеру у вигляді прямокутника;

в - йде синтез нових ланцюжків ДНК.

ПЛР.

Примітка. Стрілками показано напрямок синтезу нових ланцюгів в

По закінченні одного першого циклу з однієї молекули двухцепочечной ДНК отримано дві, в наступному циклі кожна з двох молекул знову подвоюється і так далі, з наростанням числа молекул (N) за формулою: N=2n, де n - число циклів. Звідси і назва реакції - ланцюгова.

Теоретично ПЛР дозволяє розмножити до легко детектіруемих кількостей навіть единственною молекулу-мішень ДНК, навіть якщо вона знаходиться серед безлічі інших молекул ДНК і РНК. Стандартна ПЛР постійно вдосконалюється.

Продукти ПЛР - молекули ДНК, а значить гени і іРНК піддаються аналізу поруч методів, наприклад електрофорезом в гелі з забарвленням молекули ДНК бромідом етидію та ін Визначаються ген (-и) і мутації в них: заміна - пара підстав змінюється на іншу; вставка - в молекулу введена нова пара підстав; делеция - відсутність пари комплементарних підстав в гені. За кількістю копій іРНК гена судять про ступінь його експресії в клітині.

Розрізняють два варіанти ПЛР-діагностики: 1) якісний тест і 2) кількісний тест.

Для якісного тесту потрібно лише дати відповідь: «так» чи «ні», тобто чи міститься у зразку ДНК або іРНК. Для діагностики вірусної інфекції звичайно достатній факт виявлення у зразку вірусної ДНК або іРНК.

Для виявлення ракової клітини у зразку недостатньо, наприклад, виявити іРНК, так як вона може бути продуктом і нормальною, і ракової клітини.

Кількісний тест визначає титр, тобто число копій молекул-мішеней в певній кількості зразка, тут украй важливі мішені - ДНК і іРНК.

Адже для ранньої діагностики раку вкрай важливо виявити його на самому ранньому етапі - на рівні першої ракової клітини і її перших нащадків, а ще краще на рівні передраковій клітини за генетичними маркерами в молекулах-мішенях - ДНК і іРНК. На рівні однієї з цих клітин титр мішені буде мінімальним.

Титр мішеней - ДНК і іРНК і їх генетичні маркери необхідні:

1) для дослідження молекулярних причин перетворення нормальної клітини в ракову клітку в конкретному випадку;

2) для стеження за перебігом прихованого ще раку на рівні першої ракової клітини і її перших нащадків, але також і для раку з симптомами;

3) для оцінки ефективності лікування раку, корекції лікування раку в процесі його лікування станом генетичних маркерів ракових клітин.

Чутливість стандартної ПЛР різні автори оцінюють по-різному; причиною цього може бути і ступінь чутливості її в специфічному виявленні молекул-мішеней, а й характер клінічного зразка - плазма крові, тканину пухлини, слина, сеча та інші різні виділення.

ПЦР-ММК-метод для ранньої діагностики ракової клітини або клітин по плазмі крові

Стандартна ПЛР може давати збої і помилки, в результаті чого: 1) молекули-мішені будуть виявлено через втрату їх в процесі підготовки зразка;

2) молекули-мішені можуть бути не розмножені в процесі ПЛР, тим більше що у звичайній клінічній практиці молекули-мішені представляють незначну частку серед непотрібних матриць у зразку.

Член-кор. А.Б. Четверін і Є.В. Четверін - співробітники Інституту білка РАН - відкрили метод молекулярних колоній - ММК, для прямого визначення титру молекули-мішені і просторове розділення розмноження потрібних молекул-мішеней від непотрібних. Цей метод запатентований вченими в РФ і в США (1995, 1998).

Принцип методу в тому, що молекули-мішені - ДНК і іРНК - розмножуються не в рідини, а в гелі. Це створює окремі колонії, кожна з яких є потомством єдиної молекули, тобто клон.

ММК може поєднуватися з ПЛР для розмноження молекул-мішеней. Спочатку гель полімеризують, потім вимочують у воді, щоб видалити всі розчинні речовини, потім автоклавують і сушать.

  Перед початком ПЛР гель просочують реакційної сумішшю. Цим автори досягають повного збереження активності ДНК-полімерази і знищення молекул ДНК з навколишнього середовища, які могли б потрапити в гель при його приготуванні. Синтез кДНК на молекулі іРНК може бути здійснений окремо або в гелі. Для детекції мішеней використовується універсальна реакційна суміш з ДНК-полімеразою (Мал. 5).



  Рис. 5.

 Схема проведення ПЛР-ММК

 (Рис. і цит. По: А.Б. Четверін, Є.В. Четверін, 2002).

  1. а - лунка з висушеним поліакриламідних гелем;

  2. б - просочування гелю реакційним розчином, що містить, зокрема, досліджуваний зразок і специфічні праймери;

  3. в - інкубація гелю протягом 30 хв при 55-65 ° С - умови зворотної транскрипції, з подальшими 40 циклами ПЛР;

  4. г - промаківанія гелю нейлонової мембраною - перенесення колоній;

  5. д - гібридизація мембрани з радіоактивно міченим зондом, специфічним до шуканої мішені; отримання радіоавтографа мембрани.

  Як пишуть автори методу, «ММК дозволяє подолати всі проблеми стандартної ПЛР і вперше зробити ПЛР-діагностику дійсно чутливої, кількісної та надійної» (2003).

  Основні відмінності ПЛР-ММК від стандартної ПЛР

  1) Реакційну суміш для розмноження мішеней - ДНК і РНК, вносять не в рідину в спеціальній пробірці, а в лунку з плівкою висушеного поліакріламідного гелю. В результаті чого «потомство кожної молекули утворює колонію, а не поширюється по реакційного обсягом».

  2) Кожна колонія є клоном молекул, а число колоній прямо вказує «на число молекул ДНК або РНК, присутніх в гелі до початку реакції».

  3) ПЛР-ММК фактично дешевше стандартної ПЛР: а) «багаторазово» скорочує число проб для проведення аналізу; б) витрата реактивів «майже ткой ж»: обсяг гелю - 65 мкл, в стандартній ПЛР об'єм реакційної суміші 50 мкл.

  Для виконання ПЛР-методу, а тим більше ПЛР-ММК придатні будь-яка тканина, біологічна рідина і виділення людини. За генним маркерам ці методи дозволяють виявляти мінімальне число ракових клітин при раку крові та лімфатичної системи, так і при солідному раку. Це вкрай важливо для ранньої діагностики ракових клітин первинного вогнища раку або метастазів, а також для виявлення залишків ракових клітин після лікування рецидиву раку.

  Плазма крові від пацієнта є універсальним джерелом генних маркерів з ракових клітин будь-якого типу клітини, тобто будь-якої локалізації раку у пацієнта.

  Підвищення змісту генів-маркерів з ракових клітин в плазмі крові при раку встановлено багатьма дослідниками.

  Проф. Д. Сідранскі (1994) вважає, що ПЛР дозволила здійснити «генетичну революцію в ранній діагностиці раку», підкреслюючи наступне:

  - Рак починається з однієї клітини, яка втратила залежність розподілу від захисних механізмів організму;

  - В такій клітці виникають зміни генів, що викликає безконтрольне її поділ з утворенням з неї клона клітин - рак;

  - Особливість лікування людини від раку в тому, що ефект лікування можливий лише до утворення його метастазів;

  - Рак небезпечний через те, що окремі його клітини відриваються від клону і, продовжуючи ділитися, проникають у навколишні здорові тканини, а інші утворюють метастази у віддалених органах. Це причина загибелі людей від раку;

  - ПЛР дозволяє в біологічних рідинах від хворого виявляти початкові зміни в структурі ДНК клітин, а в сутності передрак;

  - За допомогою ПЛР вдається в рідинах виявити навіть одну дефектну або мутантну молекулу ДНК із ракових клітин серед багатьох інших молекул в досліджуваній рідині; чутливість цього методу до 100%.

  - ПЛР - це універсальний метод для ранньої діагностики ракових клітин будь-якої локалізації раку у пацієнта. Їм можна виявити тих осіб, яких необхідно обстежити детально.


  Проф. А.С. Білохвостов (2000) вперше в двох роботах виклав основи ранній діагностиці ракових клітин за допомогою ПЛР-методу; ми викладаємо їх коротко:

  1) безсимптомний ріст раку від однієї клітини до вогнища в 2 мм в тканини триває довгі роки або навіть десятиліття;

  2) такий вогнище з ракових клітин до 2 мм в діаметрі дрімає в тканинах до тих пір, поки не відбудуться зміни в генах його клітин, що викликають ангіогенез і лімфангіогенез. З цього моменту починається ріст і поширення його клітин через кров і лімфу по організму пацієнта - рак стає хворобою всього організму.

  3) ще недавно діагностувати рак розміром 2 мм, особливо якщо він перебував у внутрішніх органах, було майже не можливим. І тільки метод ПЛР дозволив визначати дуже мале число дефектних генів, іноді навіть одну молекулу дефектного гена з ракової клітини.

  Ракові клітини містять епімутаціі основних властивостей і мутації або епімутаціі генів-супресорів. Такі зміни є генетичної міткою, тобто маркером ракової клітини.

  Ген-супресор білка р53. У нормі він стримує поділ «генетично дефектних клітин і змушує їх запускати апоптоз».

  Мутації в цьому гені виявляються в половині випадків ракової клітини різного типу; ці поломки в гені «дозволяють генетично дефектної клітці уникнути апоптозу».

  Ген-супресор білка p16. Він в нормі придушує розподіл дефектної клітини «в іншій точці клітинного циклу», але инактивирован через метилування його промотора майже у половини ракових клітин різного типу.

  Ген k-ras - мутантна форма одного з ключових нормальних генів стимуляторів поділу клітини. Є ще ряд генів з високою частотою дефектів в ракової клітці. Для ранньої діагностики ракової клітини важлива реєстрація епімутацій і мутацій у кількох генах.

  ДНК із ракових клітин потрапляє «в міжклітинну рідину і далі в кровотік» після руйнування ракових клітин в тканинах.

  У плазмі крові у таких пацієнтів будуть, пише автор, перебувати фрагменти ДНК із ракових клітин. Виявити їх довго не вдавалося, поки не з'явився ПЛР-метод.

  За розрахунками проф. А.С. Белохвостова і перший його досвід застосування цього методу показав можливість діагностувати в будь-якій тканині рак розміром з 2-х мм в діаметрі.

  Автор підкреслює, що діагностика ракових клітин в організмі паці-по їх генам-маркерами в плазмі крові ПЛР-методом, дозволяє здійснювати стеження за ефектом лікування раку. Він рекомендує терміни взяття для цього плазми крові: до операції, після операції висічення раку і шляхів лімфовідтоку, а також через не раніше, ніж через 2 тижні після лікування, і після хіміотерапії.

  Якщо, маркер, наприклад ген білка р53, виявлений в клітинах і в плазмі до операції та / або після закінчення хіміотерапії, це означає, що ракових клітин «або зовсім не залишилося в організмі або їх незначна частина знаходиться в стані, що покоїться». У кожному разі, рецидив або метастази в найближчі місяці малоймовірні.

  «Якщо ж мутантний ген або змінений в експресії ген продовжує виявлятися в ДНК плазми крові або його кількість наростає, це вказує на рецидив раку або метастази. Це вимагає зміни схеми лікування - додавання або заміни хіміопрепаратів, коштів біотерапії і т.д. ». Такі аналізи вчений рекомендує виконати кілька днів, а «значення відповіді - ціною в життя».

  Ми бачимо, що вчені сконцентрували свою увагу на пошуку в плазмі та інших біологічних рідинах генів-маркерів з ядер ракових клітин, а це нелегке завдання (В.П. Шелєпов і співавт., 1997).

  Виявилося, що мутації можуть бути і в мітохондріях - органелах, розташованих в цитоплазмі клітини і виявити їх у ракових клітинах досить просто. Це відкриття зроблено проф. Д. Сідранскі (2000).

  Гени, що перетворюють нормальну клітку в ракову клітку, часто знаходяться в ядрі клітини у вигляді однієї або багатьох копій. Але, виявилося, що дефекти і зміни можуть виникати не тільки в них, а й в генах мітохондрій ракової клітини.

  У кожній клітині, в тому числі і ракової, є кілька сот мітохондрій. Мітохондрії - це самореплицирующихся органели.

  У кожної з них є своя ДНК, в ній кілька генів, що забезпечують синтез білків мітохондрій. Кількість копій такої ДНК може бути від од-до десяти на мітохондрії.

  Гени ДНК мітохондрій в ракових клітинах піддаються «посиленому впливу токсичних продуктів кисню». Це викликає «накопичення великої кількості змін в генах мітохондрій, ніж у генах ядра ракової клітини».

  У результаті мутації ряду генів мітохондрій виявляються в більш ніж половині випадків ракової клітини різного типу.

  Іншою важливою особливістю в ракової клітці є «витіснення мітохондрій з нормальними генами шляхом переважного розмноження мітохондрій з мутантної ДНК». Це призводить до того, що «всі мітохондрії в ракової клітки стають нащадками мітохондрій з мутантними генами її ДНК».

  Звідси: якщо «в гені, що знаходиться в ДНК ядра клітини може бути лише одна або дві копії гена мутанта, то в мітохондріях однієї ракової клітини може перебувати від кількох сотень до десяти тисяч копій мутантного гена мітохондріальної ДНК».

  З цього, проф. А.С. Білохвостов (2000) робить висновок: «якщо ракові клітини виявляти по мутантним генам мітохондрій в плазмі крові і в інших біологічних середовищах пацієнта, чутливість ПЛР-тесту можна збільшувати ще в сотні разів порівняно із застосовуваним зараз методом виявлення маркерів змінених генів із ДНК ядра ракової клітини ».

  Зараз, пише проф. А.С. Білохвостов, можливим межею розміру обнаруживаемое раку вважається вогнище в 2-3 мм в діаметрі, то при застосуванні ПЛР для пошуку в плазмі крові мутантних генів мітохондріальної ДНК, з ракових клітин, мабуть, можна буде визначати вогнище раку в тканини в 1 мм в діаметрі.

  У випадку успіху такого підходу до оцінки генів-маркерів ракових клітин ядерного генезу будуть додані гени-маркери з ДНК мітохондрій ракових клітин.

  Про підвищення її виявлення ракових клітин автор дає пояснення. Він каже, що «мутації якого гена ракової клітини, взятого в якості маркера, зустрічаються тільки у частини пацієнтів».

  Зміни в експресії генів властивостей нормальної клітини - головна причина канцерогенезу.

  Метилирование CpG-острівців у промоторі гена вимикає ген, а деметилювання - включає ген. При цьому змін структури в послідовності підстав гена не відбувається. Це позначають терміном - епімутація, про що ми вже писали в розділі канцерогенезу.

  Метилирование або деметилювання промотора генів - це маркери ракової клітини. Для аналізу статусу метилювання генів ракової клітини часто використовують МС-ПЛР - метілспеціфіческая полімеразна ланцюгова реакція. Матеріалом для цього є ДНК ракових клітин у зразках плазми крові та інших біологічних рідин, фрагменти з пухлини від пацієнта.

  Діагностика ракових клітин по їх епігенетичних змін у порівнянні з нормальною клітиною - це новий напрямок у ранній діагностиці ракових клітин. Воно відкриває нові шляхи для створення нових лікарських засобів і методів лікування від раку.

  З метою вивчення канцерогенезу та інших проблем вчені використовуючи методи - ПЛР-ММК, МС-ПЛР, мікрочіпи та ін зайнялися вивченням профілів експресії «ізольованих клітин і клітинних культур».

  1. Фенотип стовбурової клітини. Мета - знати типовий профіль експресії генів в ембріональних і регіональних стовбурових клітинах. Виявилося, що в цих клітинах набір експрессіруемих генів «обмежений». Це важливо для розуміння явища «стовбурові».

  2. Порівняння експресії генів в ембріональних стовбурових і ракових клітинах. Виявлено, що багато ракові клітини експресують білки-маркери ембріональних стовбурових клітин. Наприклад, Oct-4, Nanog і hTERT, що вказує на схожість біології ембріональних стовбурових «і, принаймні, частини ракових клітин».

  3. Порівняння профілів експресії регіональних стовбурових і ракових клітин. Профіль експресії деяких типів ракової клітини подібний з профілем експресії регіональних стовбурових клітин тієї тканини, з якої виникає ракова клітина, це вказує на те, що «саме регіональні стовбурові клітини в цих тканинах здатні зазнавати злоякісне переродження» (К.Н. Яригін, Е. Є. Єгоров, І.Б. Чеглаков і співавт., 2006). 
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "ПЛР-ММК - метод ранньої діагностики ракових клітин"
  1.  РАК ЯЄЧНИКІВ
      методом діагностики є гістологічне дослідження біоптату яєчника. Лікування. Основні методи лікування онкології - операція і хіміотерапія. При операції на ранній стадії захворювання можуть видалити тільки уражену яєчник, в складніших випадках, залежно від поразки, можуть видалити матку і
  2.  Генітальний ендометріоз
      методу діагностики, як MP, істотно розширило можливості подібних досліджень. За допомогою отриманих при MP даних було, зокрема, вперше описано захворювання аденоміозом в 3 поколіннях жінок в одній родині. У цій сім'ї пробанд була оперована з приводу аденоміозу у віці 34 років, її мати - в 58 років. Крім того, в процесі обстеження за допомогою MP аденоміоз був виявлений у сестри (32
  3.  Пневмонії
      методом, що дозволяє уточнити наявність Пн і ступінь залучення в процес легеневої тканини, є рентгенологічне дослідження органів грудної клітини. Великокадрова флюорографія і рентгенографія у двох проекціях, вироблена в динаміці, допомагають (з урахуванням клінічної картини) поставити діагноз Пн. Іноді за характером рентгенологічних змін можна з певною часткою ймовірності
  4.  РАК ЛЕГКОГО
      методам дослідження - томографії, бронхографії, а також пульмоангіографіі. Томографічне дослідження виявляє тінь пухлинного вузла, приховану ателектатіческой тканиною легенів, ознаки розпаду пухлини. Бронхографія - звуження ураженого бронха, деструкцію його стінок, ригідність бронхів, симптоми «культи» або «ампутації» бронха. Ангіографія - «ампутацію» судин і різке зближення судинних
  5.  Онкоген І неопластичними ЗАХВОРЮВАННЯ
      методів генетики соматичних клітин дали можливість визначити приблизні положення низки протоонкогенов в хромосомах людини (табл. 59-4). Деякі з цих генів розташовані поблизу точок розриву хромосом, трансформованих за певних пухлинах. Таблиця 59-4. Локалізація деяких протоонкогенов в хромосомах людини {foto118} q - довге плече хромосоми, р - коротке
  6.  ОСНОВИ неоплазією
      методів молекулярної генетики та імунології здатні забезпечити створення нової групи протиракових речовин, які в свою чергу можуть бути швидко піддані клінічних випробувань. Такі розробки представляються можливими, оскільки розуміння раку як патологічного процесу підкріплюється новими знаннями про нього як про набутий генетичному порушенні. Це глава являє собою
  7.  Стафілококової інфекції
      методів найменш точний метод визначення чутливості до антибіотиків, а найбільш точний метод виявлення плазмід. Спроби диференціювати штами епідермального стафілокока методом тільки біотіпірованія, визначення чутливості до антибіотиків або серотипування в цілому не супроводжуються задовільними результатами. Тільки 20-40% його лікарняних культур можуть бути тіпірованних за допомогою
  8.  ПУХЛИНИ ЛЕГКИХ
      методів дослідження - в 6% випадків. Для цієї «скринінгової» популяції хворих на рак легені клінічно безсимптомний дебют хвороби був підтверджений в 90% спостережень; в 62% випадків була можливість радикального хірургічного лікування, що, за даними AJC, характеризується 5-річної виживаності 45% хворих. Враховуючи той факт, що летальність в «скринінгової» групі хворих на рак легені
  9.  РАК МОЛОЧНОЇ ЗАЛОЗИ
      методу, не дозволяє з достовірністю судити про залучення в пухлинний процес їх тканини. Приблизно у 25% обстежених хворих, у яких пальпировались пахвові лімфатичні вузли, гістологічні ознаки злоякісного переродження не визначались, і, навпаки, у 30% хворих, у яких вони пальпаторно не визначалися, при гістологічному дослідженні було виявлено їх ракове
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...