загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Приготування середовищ

Посуд для приготування середовищ не повинна містити сторонніх речовин, наприклад лугів, що виділяються деякими сортами скла , або оксидів заліза, які можуть потрапити в середовище при варінні її в іржавих каструлях. Найкраще користуватися скляному, емальованому або алюмінієвої посудом. Великі кількості середовища (десятки і сотні літрів) готують у спеціальних виручених котлах або реакторах. Перед вживанням посуд необхідно ретельно вимити, прополоскати і висушити. Нову скляний посуд попередньо кип'ятять 30 хв в 1-2% розчині хлороводневої кислоти або занурюють у цей розчин на ніч, після чого протягом години прополіскують в проточній воді. (Посудом, призначеної для приготування середовищ, не можна користуватися в інших цілях, наприклад для зберігання хімічних реактивів або дезінфікуючих розчинів - навіть сліди цих речовин можуть поміщати зростанню мікроорганізмів.)

Початковою сировиною для приготування більшості середовищ служать продукти тваринного або рослинного походження: м'ясо та його замінники, молоко, яйця, картопля, соя, кукурудза, дріжджі та ін

Основні поживні бульйони готують на м'ясній воді або на різних переварити, отриманих при кислотному або ферментативному гідролізі вихідної сировини. Бульйони з Переваров в 5-10 разів економічніше, ніж з м'ясної води. Середовища на переварили багатшими амінокислотами, отже, поживнішою; володіють більшою буферностью, тобто мають більш стабільну величину рН. Крім того, препарати можна готувати із замінників м'яса (згустків крові, плаценти, казеїну і т. д.).

В даний час постачання лабораторій м'ясної водою і переварити централізовано. Найчастіше користуються панкреатическим переварили Хоттингера, гідролізатами казеїну або кормових дріжджів. З цих напівфабрикатів, за певними рецептами, готують необхідні середовища.

Етапи приготування середовищ: 1) варіння; 2) встановлення оптимальної величини рН; 3) освітлювання; 4) фільтрація; 5) розлив; 6) стерилізація; 7) контроль.

Варять середовища на відкритому вогні, водяній бані, в автоклаві або виручених котлах, що підігріваються парою.

Встановлення рН середовищ орієнтовно роблять за допомогою індикаторних папірців. Для точного визначення рН використовують потенціометр.

Розливають середовища в пробірки (по 3-5 мл або по 10 мл), флакони, колби, матриці і пляшки не більше ніж на 23 ємності, так як при стерилізації можуть намокнути пробки і середовища втратять стерильність .

Середовища, які стерилізують при температурі вище 100 ° С, розливають у чистий сухий посуд. Середовища, що стерилізуються при більш низькій температурі, обов'язково разли вають в стерильний посуд.

Розливають середовища за допомогою воронки, на кінець якої * надіта гумова трубка з затиском Мора. Для мірного розливу застосовують мензурки, бюретки, дозатори, шприци-піпетки і т. п.

Посуд із середовищем зазвичай закривають ватно-марлевими пробками, поверх яких надягають паперові ковпачки. Важливо, щоб при розливі середовище не змочувала краї посуду, інакше до них можуть прилипнути пробки. До кожного судині обов'язково прикріплюють етикетку з назвою середовища й тієї її приготування.

Стерилізація. Режим стерилізації залежить від складу середовища і вказаний в її рецепті. Орієнтовна схема режиму сте-| рілізаціі середовищ наведена в таблиці.

Режим стерилізації середовищ

Режим стерилізації | Ц

Апарат

Температура, тиск

Прості

Автоклав

120 ° С (1 атм)

20 хв

Складні: 1) з вуглеводами, молоком, желатином

Автоклавування із закритою кришкою або апарат Коха

100 ° С (текучий пар)

30 - 60 хв 3 дні поспіль (дробова стерилізація)

2) білкові (сироваткові або яєчні) з ущільненням

Свертиватель Коха (можливі два режими)

80-85 ° С

1 год 3 дні поспіль

1 год одноразово |

3) білкові, рідкі

Водяна баня або інактиватор

1 год 3 - 4 дні поспіль Ш

Контроль готових середовищ: а) для контролю стерильності середовища ставлять в термостат на 2 сут.
трусы женские хлопок
, Після чого їх просматрі-^ вають. Якщо на середовищах не з'являться ознаки зростання, їх вважають стерильними і передають для хімічного контролю пс кілька зразків кожної серії; б) хімічний контроль: остаточно встановлюють рН, вміст загального та амінного азоту, пептона, хлоридів (мул кількість повинна відповідати зазначеному в рецепті).

Хімічний контроль середовищ виробляють в хімічній лабораторії, в) для біологічного контролю кілька зразків середовища засівають спеціально підібраними культурами мікроорганізмів, і по їх зростанню судять про поживних (ростових) властивості середовища. До готової середовищі докладають етикетку і паспорт, в якому вказують назву і склад середовища, результати контролю та ін

Зберігають середовища при кімнатній температурі в шафах, бажано спеціально для них призначених. Деякі середовища, наприклад, середовища з кров'ю і вітамінами, зберігають у холодильнику.

Рецепти приготування простих (основних) середовищ і ізотонічного розчину натрію хлориду

Ізотонічний розчин натрію хлориду. До 1 л дистильованої води додають 9 г натрію хлориду. Розчин фільтрують, встановлюють заданий рН і, якщо потрібно, стерилізують при 120 ° С протягом 30 хв.

Мясопептонном бульйон (МПБ). До м'ясної води додають 1% пептону і 0,5% х. ч. натрію хлориду, кип'ятять на слабкому вогні 10-15 хв для розчинення речовин, встановлюють потрібний рН і знову кип'ятять 30-40 хв до випадання осаду. Фільтрують, доливають до початкового об'єму водою і стерилізують 20 хв при 120 ° С.

Бульйон Хоттингера. Перевар Хоттингера розводять водою 5-6 разів залежно від того, яка кількість амінного азоту він містить і яке його кількість повинна бути в бульйоні (зазначено в паспорті переварити і рецепті середовища). Наприклад, для приготування середовища з 1,2 гл амінного азоту перевар, що містить 9,0 гл, треба розвести в 7,5 раз (9,0: 1,2). До розлученій переварили додають 0,5% натрію хлориду і кип'ятять на слабкому вогні до розчинення солі. У остигнула середовищі встановлюють рН, фільтрують, розливають і стерилізують 20 хв при 120 ° С.

Мясопептонном агар (МПА). До готового бульйону (до стерилізації або після неї) додають 2-3% подрібненого агар-агару і кип'ятять, помішуючи, на слабкому вогні до; повного розплавлення агару. МПА можна варити в автоклаві або апараті Коха. Готову середу, якщо потрібно, освітлюють, фільтрують і стерилізують 20 хв при 120 ° С. Напіврідкий агар містить 0,4-0,5% агар-агару.

Поживний желатин. До готового бульйону додають 10-15% желатину, підігрівають до його розплавлення (не кип'ятити!), Розливають у стерильний посуд і сте-i ріліз текучим паром.

Рецепти приготування складних середовищ Середовища з вуглеводами. До основного бульйону або розплав-1 ленному агару додають потрібну кількість (0,1-2%) певного вуглеводу (наприклад, глюкози). Після його розчинення розливають у стерильний посуд і стерилізують] текучим паром. Оскільки вуглеводи частково руйнуються навіть при такому режимі стерилізації, переважніше 25 - 30% розчин вуглеводів, простерилізувати через бактеріальний фільтр, додавати в потрібному обсязі з дотриманням | асептики до стерильних основним середах. Після контролю] стерильності середу готова до вживання.

Середовища з кров'ю готують з стерильних простих середовищ, додаючи в асептичних умовах (краще в боксі) від 3 дс 30% (зазвичай 5%) дефібринованою крові. Агарові середовища перед цим розтоплюють і остуджують дс 45 ° С.
При потрібній температурі має бути терпиме відчуття гарячого, але не опіку. Після додавання крові, поки середовище не застигла, вміст посудини ретельно перемішують * вають і розливають у чашки або пробірки.

Увага! Середовища з кров'ю розтоплювати не можна - кров виміру | ніт свої властивості. Середовища з сироваткою крові готують так само, як середовища кров'ю. До основних середах додають 10-20% сироватки, що не містить консерванту і попередньо инактиви-рова при 56 ° С протягом 30 хв на водяній бані або: інактіватори. При інактивації руйнується речовину (комплемент), згубно діє на мікроби.

Середовища з жовчю. До простих середах додають жовч в кількості 10-40% об'єму середовища, встановлюють потрібний рН і стерилізують 20 хв при 120 ° С. Можна стерильну жовч додати до стерильному середовищі в асептичних умовах.

Розлив агарових середовищ в чашки Петрі. Середовища перед розливом розплавляють на водяній бані і остуджують до 45-50 ° С. Зазвичай для чашки діаметром 9 см достатньо 15-20 мл середовища (висота шару 0,25-0,3 см). Якщо шар вище, на ньому менш контрастно виглядають колонії. При дуже тонкому шарі різко обмежено кількість поживних речовин і вологи (середа швидко висихає) - погіршуються умови культивування.

Розливають середовища в стерильні чашки в асептичних умовах. Чашки ставлять кришкою вгору. Посудина з середовищем беруть у праву руку, тримаючи його біля вогню. Лівою рукою виймають пробку, затиснувши її мізинцем і долонею. Обпалюють шийку посудини і двома пальцями лівої руки злегка відкривають кришку. Вводять під неї горлечко флакона, не торкаючись їм до краю чашки. Наливаючи середу, стежать, щоб вона рівномірно розподілилася по дну чашки. Якщо при розливі на поверхні середовища утворюються бульбашки повітря, до них до того, як середовище застигне, підносять полум'я сірника або пальника - бульбашки луснуть. Потім чашку закривають і дають середовищі застигнути. Якщо посів виробляють в день розливу, середовище необхідно підсушити. Для цього чашки в термостаті обережно відкривають і встановлюють кришки і чашки відкритою стороною вниз на 20-30 хв. Якщо посів виробляють наступного дня після розливу, чашки, що не підсушуючи, загортають у ту ж папір, в якому їх стерилізували, і поміщають в холодильник.

Приготування скошеного агару. Пробірки з 4-5 мл стерильної розплавленої агарового середовища укладають в похилому положенні (приблизно під кутом 20 °) з таким розрахунком, щоб середовище не заходила за 23 пробірки, інакше вона Може змочити пробку. Після того як середовище застигне, пробірки ставлять вертикально - дають стекти конденсату. Краще вживати свіжоскошений агар.

Увага! Користуватися середовищем, в якій немає конденсату, не можна. Її слід знову розтопити на водяній бані і скосити.
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
Інформація, релевантна " Приготування середовищ "
  1. . Розбавлення, зберігання і транспортування сперми Значення і необхідність розбавлення сперми
    Під час еякуляції до вмісту епідідіміса домішуються секрети придаткових статевих залоз. Вони змінюють рН середовища, насичують плазму електролітами (солі натрію, калію, магнію); останні викликають руйнування липопротеидного покриву сперміїв. Зазначені зрушення зумовлюють перехід сперміїв з анабіозу в активний стан; це, в свою чергу, призводить до швидкої їх загибелі. Безпосередніми
  2. Тема: бактеріологія, мікології, протозоологов
    Систематика і номенклатура мікроорганізмів. Об'єкти вивчення мікробіології. Прокаріоти (бактерії), їх відмінність від мікробів еукаріотів (найпростіші, гриби) за структурою, хімічним складом, функції. Сучасні підходи до систематики мікроорганізмів. Таксономічні категорії: царство, відділ, сімейство, рід, вид. Внутрішньовидові категорії: біовар, серовар, фаговар, морфовар, культивар.
  3. Пневмонії
    ПНЕВМОНІЯ (Пн) - гостре інфекційне ураження нижніх відділів дихальних шляхів, підтверджене рентгенологічно, домінуюче в картині хвороби і не пов'язане з іншими відомими причинами. У визначенні Пн підкреслюється гострий характер запалення, тому немає необхідності вживати термін «гостра пневмонія» (в Міжнародній класифікації хвороб, ухваленій Всесвітньою організацією
  4. ДІАГНОСТИКА ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ
    Джеймс Дж. Плорд (James f. Plorde) Для діагностики інфекційної хвороби потрібно пряме або непряме виявлення патогенного мікроорганізму в тканинах ураженого макроорганізму. У даній главі описані основні методи, за допомогою яких це досягається. Пряме мікроскопічне дослідження. Пряме мікроскопічне дослідження тканинних рідин, ексудатів і тканин є одночасно
  5. сибірка
    Дональд Кейі, Роберт Дж. Петерсдорф (Donald Kaye, Robert G. Peters dor f) Визначення. Сибірська виразка - хвороба диких і домашніх тварин. Вона передається людині при його контактах з інфікованими тваринами або їх продуктами, при контактах з комахами, переносниками збудника, а в деяких країнах, що розвиваються при прямих побутових контактах, наприклад при користуванні спільними домашніми
  6. ТУЛЯРЕМІЯ
    Дональд Кайе (Donald Кауе) Визначення. Туляремия (кроляча лихоманка, лихоманка від укусу оленячої мухи) - інфекція, що викликається FranciseHa tularensis. Збудник хвороби виявляється у багатьох тварин і передається від них людині при прямому контакті або через комах - переносників інфекції. Хвороба характеризується виразковим ураженням в місці проникнення збудника з регіонарної
  7. Вірус сказу ТА ІНШІ рабдовирусами
    Лоуренс Корі (Lawrence Corey) Сказ Сказ являє собою остропротекающая вірусну хворобу ссавців, характеризується ураженням центральної нервової системи та передающуюся з інфікованим секретом, зазвичай слиною. Найчастіше зараження сказом відбувається під час укусу інфікованої тварини, проте в ряді випадків воно може відбутися при попаданні в організм
  8.  Лейшманіозу
      Річард М. Локслі, Джеймс Дж. Плорд (Richard М. Locksley, James 1. Florae) Визначення. Найпростіші з роду лейшманий викликають чотири основні клінічні форми захворювання - вісцеральний лейшманіоз (кала-азар), шкірний лейшманіоз Старого і Нового Світу, шкірно-слизовий лейшманіоз (еспундія) і дифузний шкірний лейшманіоз. Лейшманій є паразитами тварин родини собачих і загону
  9.  Ультраструктура бактерії
      Бактерії (прокаріоти) істотно відрізняються від клітин рослин і тварин (еукаріоти). ^ Прокаріоти - зазвичай містять один ген, який не відокремлений спеціальною мембраною від цитоплазми, не мають мітохондрій та апарату Гольджі, не володіють амебоідним рухом. Вони складаються з нуклеоида, цитоплазми (яка містить різні включення), оболонки та інших структур-органоїдів (джгутики), і незважаючи на
  10.  Сухі середовища
      Вітчизняна промисловість випускає сухі середовища різного призначення: прості, елективні, диференціально-діагностичні, спеціальні. Це порошки у флаконах з загвинчуються кришками. Зберігають сухі середовища в темному місці щільно закритими - вони гігроскопічні. У лабораторії з порошків готують середовища по прописи на етикетці. Перевага сухих середовищ порівняно з середовищами, виготовленими в
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...