Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія і реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаГематологія
« Попередня Наступна »
Мокєєв И.Н.. Інфузійно-трансфузійна терапія: Довідник, 1998 - перейти до змісту підручника

Визначення резус-належності крові

Основні поняття

В еритроцитах людини маються 5 основних антигенів системи резус (D, C, c, E, e), з яких найбільш імуногенним є антиген D - Rh (D). Наявність або відсутність цього антигену визначає резус-належність крові: особи, які мають D-антиген, належать до групи резус-позитивних (серед осіб білої раси їх приблизно 85%); особи, що не мають його, відносяться до резус-негативним (їх, відповідно , близько 15%).

Імуногенність інших (мінорних) антигенів системи Rh значно нижче і зменшується в ряді: з> Е> З> е. Визначення мінорних антигенів системи резус, як правило, проводиться при необхідності багаторазових трансфузій, в тих випадках , коли в сироватці реципієнта виявлені імунні антитіла до антигенів системи резус, в тому числі при індивідуальному підборі крові.

Антиген D має слабкі варіанти, що об'єднуються в групу Dweek (Du), частота якої в популяції становить близько 1%. Ці еритроцити слабо або взагалі не агглютинируются повними анти-Rh-антитілами в реакції прямої аглютинації.

Донори, що містять Du, повинні бути віднесені до резус-позитивним, так як, по-перше, переливання їх крові сенсибілізованим до D-антигену резус-негативним реципієнтам може викликати важкі трансфузійні реакції і, во- другий, може викликати імунну відповідь у резус-негативних реципієнтів. Тому кров донорів повинна обов'язково тестуватися на присутність Du і, в разі виявлення вважатися резус-позитивною.

Реципієнти, містять антиген Du, повинні бути віднесені до резус-негативним і їм повинна бути перелита тільки резус-негативна кров, так як нормальний антиген D може викликати у таких осіб імунну відповідь. Тому кров реципієнтів не обов'язково тестувати на присутність Du.

Резус-приналежність визначається в реакції аглютинації за допомогою моноклональних реагентів або ізоімунному антирезусних сироваток, призначених для виявлення Rh (D)-aнтігена в реакції прямої аглютинації (на площині і в пробирочную тесті; в сольовий середовищі; у присутності високомолекулярних підсилювачів; з еритроцитами, обробленими протеолітичними ферментами) або в непрямому антіглобуліновой тесті (непряма проба Кумбса). Метод визначення залежить від класу антитіл в реагенті: якщо в ньому присутні повні антитіла (класу IgM), то реагент використовується для визначення резус-фактора методом прямої аглютинації в сольовому середовищі; якщо в ньому містяться неповні антитіла (класу Ig G), то він використовується в реакції аглютинації в присутності високомолекулярних підсилювачів (альбуміну, желатини та ін), з еритроцитами, обробленими протеолітичними ферментами, в непрямому антіглобуліновой тесті.

Техніка визначення резус-належності крові

Реакція аглютинації на площині за допомогою анти-D моноклональних реагентів (повних антитіл)

Визначення проводять в приміщенні з хорошим освітленням. Найкращі результати тест дає при використанні високої концентрації еритроцитів і температурі близько +37 ° С, тому бажано використовувати підігріту пластинку. Для дослідження використовують цільну кров, відмиті еритроцити, еритроцити в плазмі, сироватці, консерванті або фізіологічному розчині.

Процедура проводиться в такій послідовності:

1. Наноситься велика крапля (близько 0,1 мл) реагенту на пластинку або планшет.

2. Поруч наноситься маленька крапля (близько 0,03 мл) досліджуваної крові (еритроцитів).

3. Ретельно змішується реагент з кров'ю чистою скляною паличкою.

4. Через 10-20 с пластинка м'яко погойдується.
Незважаючи на те, що чітка аглютинація настає в перші 30 с, результати реакції слід враховувати через 3 хв після змішування.

5. Результати реакції записуються негайно після закінчення.

За наявності аглютинації досліджувана кров маркується як резус-позитивна, якщо аглютинація відсутня - як резус-негативна. Якщо аглютинація набагато слабкіше спостережуваної з Rh (D)-позитивними еритроцитами, досліджувана кров належить до підгрупи слабких антигенів Rh - Du. Для уточнення приналежності такого зразка крові до групи Du дослідження проводять з другим реагентом, що містить IgG (неповні) анти-D антитіла (див. гл. 6.2.2.3).

Реакція аглютинації за допомогою неповних анти-D-антитіл (IgG) у присутності високомолекулярних добавок

Реакція проводиться або зі спеціально приготованим реагентом, вже містить підсилювач (універсальний реагент з поліглюкін або альбуміном для площині), або підсилювач додають у процесі проведення реакції (реакція конглютинації з желатином у пробірці).

Техніка постановки реакції аглютинації на площині не відрізняється від описаної в гл.6.2.2.1. Однак універсальні реагенти можуть давати хибно позитивну реакцію з резус-негативними еритроцитами за рахунок містяться в них високомолекулярних речовин, а також можуть викликати аглютинацію еритроцитів, покритих антитілами інша (не антирезус) специфічності. Тому необхідне проведення паралельних тестів з контрольним розчином використовуваного підсилювача, але без анти-0-антитіл. Якщо контрольний розчин викликає аглютинацію еритроцитів, то результати тестування не достовірні і слід повторити визначення з іншим реагентом, що містить повні антитіла IgM (краще з моноклональними).

Реакції конглютинації із застосуванням желатину. Для проведення цього тесту можуть бути використані моноклональні реагенти і стандартні ізоімунні антирезус сироватки з неповними антитілами.

1. Вносять в пробірку 1 краплю (близько 0,05 мл) досліджуваної крові або суспензії еритроцитів (приблизно 50%) у сироватці.

2. Додають 2 краплі (0,1 мл) 10% розчину желатину, попередньо підігрітого до розрідження при +46 ... +48 ° С.

3. Додають 2 краплі (0,1 мл) реагенту анти-D і змішують.

4. Поміщають пробірку у водяну баню з температурою +46 ... +48 ° С на 5-10 хв або в суховоздушний термостат при тій же температурі на 30 хв.

5. Доливають у пробірку 5-8 мл фізіологічного розчину і обережно 1-2 рази перевертають закриту пробкою пробірку для перемішування.

6. Визначають наявність агглютінати, переглядаючи пробірку на світло неозброєним оком або через лупу.

7. Негайно записують результати визначення.

Желатинова проба вимагає обов'язкового проведення наступних контролів:

зі стандартними резус-позитивними еритроцитами;

зі стандартними резус-негативними еритроцитами;

з досліджуваними еритроцитами і розчином желатину, але без анти-0-антитіл.

При позитивному результаті агглютінати помітні у вигляді агрегатів різної величини на прозорому тлі - кров є резус-позитивною. При негативному результаті в пробірці агрегатів немає, а видна рівномірно забарвлена ??непрозора суспензія еритроцитів - кров є резус-негативною. Якщо спостерігається дрібнозерниста, що викликає сумнів аглютинація, то кров необхідно тестувати в непрямому антіглобуліновой тесті (див. гл.6.2.2.3). Результати желатиновій проби є достовірними лише у разі, коли желатин сам не викликає аглютинацію досліджуваних еритроцитів, а результати контролів зі стандартними еритроцитами відповідають очікуваним.
У разі неадекватних результатів контролів визначення резус-належності слід повторити з використанням іншого реагенту або зразка желатину. Якщо желатин викликає сам по собі агглютинацию досліджуваних еритроцитів, то можна припускати наявність на них антиеритроцитарних антитіл антирезус або іншої специфічності (це спостерігається при гемолітичної хвороби новонароджених, аутоімунної гемолітичної анемії і деяких інфекційних захворюваннях). У цьому випадку кров повинна бути спрямована на дослідження в спеціальну серологическую лабораторію.

Непрямий антіглобуліновой тест за допомогою неповних анти-0-антитіл (IgG)

1. Приготувати 2-5% суспензія тричі відмитих у фізіологічному розчині досліджуваних еритроцитів. Для цього помістити в пробірку 5 крапель (близько 0,25 мл) досліджуваної крові, тричі відмити в 5-10 мл фізіологічного розчину; суспендувати осад еритроцитів в 2-3 мл фізіологічного розчину або, переважніше, в 2-3 мл розчину LISS, в якому фіксація антитіл на еритроцитах міцніше і відбувається швидше, ніж у фізіологічному розчині.

2. Внести 1 краплю анти-0-реагенту в чисту маркіровану пробірку.

3. Додати 1 краплю 2-5% суспензії еритроцитів.

4. Інкубувати суміш при +37 ° С 30-45 хв (якщо еритроцити зважені у фізіологічному розчині) або 10-15 хв (якщо еритроцити зважені в LISS).

5. Відмити еритроцити 1 раз (у разі використання мо-ноклонального реагенту) або 3 рази (у разі використання ізоімунної анти-0-сироватки) великим обсягом (5-10 мл) фізіологічного розчину. Одноразова відмивання допустима тільки при використанні моноклональних реагентів. Повністю видалити фізіологічний розчин.

6. Додати до осаду 1 краплю антіглобуліновой реагенту і ретельно змішати.

7. Центрифугувати 15-20 с при 2 000-3 000 об. / Хв.

8. М'яко ресуспендувати осад і візуально визначити наявність аглютинації.

9. Негайно записати результати визначення.

За відсутності аглютинації кров є резус-негативною. При позитивній реакції - резус-позитивної; підгрупи Du можуть викликати слабку агглютинацию навіть у цьому високочутливому тесті. Перш ніж віднести донора Du до резус-позитивним слід підтвердити висновок контрольним дослідженням антіглобуліновой сироватки зі стандартними еритроцитами. Якщо контрольний тест позитивний, інтерпретація не є достовірною. У цьому випадку реципієнт повинен отримувати тільки резус-негативну кров (еритроцити), а кров такого донора не повинна використовуватися для трансфузій до остаточного з'ясування його резус-належності.

Аглютинація еритроцитів, оброблених протеолітичними ферментами, за допомогою неповних анти-0-антитіл (IgG)

Неповні антитіла здатні викликати пряму аглютинацію в сольовий середовищі еритроцитів, оброблених бромелін, папаїном, трипсином та іншими протеазами. Цей метод високочутливий і надійний при виявленні слабких форм D-антигену. Він використовується, головним чином, при автоматичному визначенні груп крові в системах "Gruppomatic", в яких забезпечується стандартність обробки еритроцитів ферментами і спеціально підбирається потрібне розведення реагенту, так як для цього тесту характерний феномен Прозона (інгібування аглютинації надлишком антитіл).

При неавтоматизованому визначенні груп крові метод може бути використаний в спеціалізованих серологічних лабораторіях.
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
Інформація, релевантна "Визначення резус-належності крові"
  1. Профілактика і лікування изосерологической несумісне-сти залежно від ступеня ризику розвитку гемолітичної хвороби плода
    визначення наявності і титру антитіл до 28 тижнів 1 раз на місяць, після 28 тижнів 2 рази на місяць. При виконанні інвазивних втручань, до яких відносяться біопсія хоріона, кордоцентез, амніоцентез, а також при ускладненому перебігу вагітності (відшарування хоріона, маткова кровотеча, загроза переривання вагітності) проводять неспецифічну і специфічну изоиммунизации під час вагітності.
  2. ОРГАНІЗАЦІЯ РОБОТИ ЖІНОЧОЇ КОНСУЛЬТАЦІЇ диспансерне спостереження ВАГІТНИХ
    визначенні резус-негативного типу крові у вагітної або групи крові 0 (I). Крім того, потрібно провести реакцію зв'язування комплементу з токсоплазменним антигеном (ми вважаємо, що від внутрішньошкірної проби слід відмовитися, так як вона не є неспецифічної). Надалі лабораторні дослідження проводять у такі терміни : загальний аналіз крові - 1 раз на місяць, а з 30 тижнів
  3. СТРУКТУРА І ОРГАНІЗАЦІЯ РОБОТИ акушерських стаціонарів санітарно-протиепідемічних РЕЖИМ В акушерському стаціонарі
    певного обладнання. Якщо ж вони представлені окремими структурами, то повинні бути в подвійному наборі, щоб чергувати їх роботу з ретельної санітарної обробкою (робота не більше трьох діб підряд). У передпологовій необхідна централізована підводка кисню і закису азоту і відповідна апаратура для знеболювання пологів, кардіомонітори, апарати для УЗД . У передпологовій
  4. V Питання про резус-факторі крові
    певних обставин, наприклад, коли йдеться про переливання крові ("негативна" більш рідкісна і дорога) або про зачатті дитини. Що стосується періоду вагітності, то резус-фактор крові важливий для визначення взаємозв'язку жінки і плоду, а після народження малюка - для його благополучного існування. Ситуація може розвиватися по одному з трьох сценаріїв. 1. У обох батьків кров
  5. Передопераційна підготовка ГІНЕКОЛОГІЧНИХ ХВОРИХ
    визначення групи крові, резус-приналежності, реакції Вассермана, коагулограма; - біохімічний аналіз крові (глюкоза, білірубін, сечовина, холестерин, загальний білок і білкові фракції, електроліти, залізо в сироватці; - обстеження на СНІД; - загальний аналіз сечі, аналіз калу на яйця глистів; - дослідження мазків на ступінь чистоти і флори з піхви, цервікального каналу, уретри; -
  6.  ОБЛІК І ВВЕДЕННЯ РОДОВОГО СЕРТИФІКАТА
      визначенні основного захворювання слід керуватися такими правилами: а) при наявності декількох діагнозів, які мають між собою причинний зв'язок, основним слід вважати діагноз хвороби, що є причиною інших захворювань, зазначених у заключному діагнозі, б) при двох і більше незалежних захворюваннях основним вважається найбільш важке і тривале; в) якщо серед
  7.  Структура акушерських стаціонарів і надання допомоги бере-менним
      визначення груп крові і резус-фактора та ін В обов'язки відповідального по службі крові входять відбір і постійний контроль за групою резервних донорів з числа співробітників. Велике місце в роботі відповідального по службі крові, який в пологовому будинку працює в постійному контакті зі станцією переливання крові (міський, обласний), а в акушерських відділеннях - з відділенням переливання
  8.  ДОДАТКИ
      певні терміни вагітності. Жінки з первісної недостатньою масою тіла можуть більше додавати у вазі, ніж інші вагітні. При відсутності видимих ??набряків розвантажувальні дні у цієї категорії вагітних потрібно проводити після ретельного обстеження, оскільки вони Угрожаема на передчасні пологи і народження дітей з низькою масою тіла. Загальна збільшення маси тіла у всіх вагітних
  9.  Дані анамнезу та об'єктивного обстеження
      визначення термінів допологової відпустки і передбачуваного терміну пологів, а також оцінка розмірів плода за даними УЗД в терміни вагітності більше 12 тижнів. Отже, для визначення акушерського терміну вагітності від дати останньої менструації відраховують належну кількість днів до моменту дослідження. Для визначення передбачуваного терміну пологів, згідно акушерському терміну від дати 1-го дня
  10.  I триместр вагітності (період органогенезу і плацен-тації)
      певна частина батьківських генів повинні бути піддані процесу імпринтингу. Якщо цей процес не відбувається, патологічна самоактівація (партеногенез) може призвести до утворення дермоїдних кіст яєчників або герміногенних пухлин (дісгермінома) у молодих дівчат. Дермоіди виявляються у плодів та новонароджених. За допомогою сучасних молекулярних технологій було показано, що хромосоми в
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека