загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Визначення в продуктах тваринництва гормонів

Мета заняття: Вивчити і освоїти серійний аналіз м'ясних продуктів на вміст гормональних препаратів методом ELISA з використанням стандартних наборів для імуноферментного аналізу.



Завдання:

1. Підготувати проби.

2. Визначити залишковий вміст гормональних препаратів у м'ясі і м'ясних продуктах.



Об'єкти дослідження. М'ясо та м'ясні продукти з яловичини, свинини і птиці.

Матеріали, реактиви та обладнання. Набір для імуноферментної очищення екстрактів, концентрований буферний розчин для промивання колонки; допоміжний набір для визначення стильбенів імуноферментним методом (кат. NSJ 2152) на 96 визначень, що включає: микроплашку на 12? 8 мм розбір-них осередків з сенсибілізованими до стильбенів антитілами; буферний розчин для промивки плашки і розбавлення проб; білковий кон'югат; субстрат для окра-вування проби; набір стандартних розчинів концентрацією стильбену від 0 до 10 нг/см3 і спектрофотометр; метилтретбутиловий або сірчаний ефір; хлороформ; рас-твор гідроксиду натрію молярної концентрацією 1 моль/дм3 ; розчин фосфорної кислоти молярної концентрацією 6 моль/дм3; розчин соляної кислоти молярної концентрацією 1 моль/дм3; розчин етанолу (70 об.%); бідистильована во-да.

Приготування реактивів. Буферний розчин для промивання колонки. До однієї частини концентрованого розчину миючого буфера додають 19 частин бидистиллированной води.

Буферний розчин для зберігання колонки. До однієї частини концентрованого розчину буфера для зберігання додають 4 обсягу бидистиллированной во-ди.

Білковий кон'югат. Концентрований кон'югат розбавляють в 15 000 разів (див. інструкцію до приладу).

Субстрати А і Б для фарбування проби (див. інструкцію до приладу). Перед застосуванням субстрати змішують у співвідношенні 1:1.



Методичні вказівки. Так звані «гормональні технології» привертають увагу товаровиробників м'яса з-за відомого позитивного впливу деяких гормонів на швидкий приріст маси худоби (на 5-25%). Незважаючи на заборону застосування гормонів в Республіці Казахстан, Росії, у ряді європейських країн і на Американському континенті гормони використовуються досить широко. Зростання імпорту м'яса у нас в країні робить проблему гормонального контролю досить актуальною.

Для аналітичного визначення залишків гормональних препаратів використовують дві основні групи методів: хроматографічні (тонкошарова хроматографія - ТСХ; високоефективна рідинна хроматографія - ВЕРХ; рідинна хроматографія з мас-спектрофотометричним детектуванням - ЖХМС; газова хроматографія з мас-спектрофотометричним закінченням - ГХМС) і сучасні імунні методи (імуноферментний метод - ELISA і радіоімунного метод - RIA).

Серед вимог, що пред'являються до методів експрес-моніторингу продовольства, головне місце займають чувствитель-ність і селективність методу, а також час і вартість аналізу. Деякі характеристики методів представлені в таблиці 1.



Таблиця 1 - Максимальний рівень вмісту гормонів в мяс-них

продуктах, який визначається різними методами





Як видно з даних таблиці 1, метод ELISA, широко використовуваний в європейських країнах для контролю безпеки м'яса та м'ясопродуктів, має явні переваги.

Аналіз структурних особливостей складних органічних сполук показує, що розвиток метаболічних процесів у живих організмах, а також розвиток подальших процесів призводять до зменшення концентрації, наприклад, самого діетілстільбестрола і появі споріднених хімічних метаболітів, що відрізняються від вихідної речовини наявністю різних органічних заступників, тобто через певний час в залежності від хімічної стійкості токсиканта він або зникне в продукті, або трансформується, а токсичність новоутворених речовин зі структурою, подібною вихідного речовині, виявиться близькою до токсичності первісного речовини, що також небезпечно для людини .

Пропонований до вивчення і освоєння імуноферментний метод володіє так званою перехресної чутливістю, тобто, будучи виключно специфічним методом стосовно до якого-небудь речовини, дозволяє визначити всю групу споріднених сполук, що підвищує його цінність для реальної сертифікації харчової продукції за максимально можливого числа шкідливих токсикантів.

Підготовка проб. Гомогенізують 2,5 г зразка м'яса або м'ясо-продукту з 15 см3 метилтретбутилового або сірчаного ефіру, гомогенат перемішують і відокремлюють центрифугуванням при частоті обертання 33,3 с-1 протягом 10 хв або відстоюванням 12 см3 ефірного шару, який випаровують в струмі стисненого повітря . Сухий залишок розчиняють в 1 см3 хлороформу, додають 2 см3 розчину гідроксиду натрію молярної концентрацією 1 моль/дм3, розчин перемішують і відокремлюють 1 см3 водного шару з наступним додаванням ще 1см3 розчину гідроксиду натрію молярної концентрацією 1 моль/дм3 до шару хлороформу і відділенням 1 см3 водного екстракту. Водний екстракт нейтралізують, додаючи до 2 см3 екстракту 200 мкдм3 розчину фосфорної кислоти молярної концентрацією 6 моль/дм3 і розчин соляної кислоти молярної концентрацією 1 моль/дм3.

Порядок проведення аналізу. Весь обсяг нейтралізованого розчину наносять на імуноферментну колонку після її кондиціонування, яку для цього промивають 15 см3 попередньо розведеного розчину миючого буфера (витрата менш 3см3/мін). Екстракт пропускають через колонку самопливом, промивають колонку 5 см3 розведеного розчину миючого буфера і 5см3 бидистиллированной води (витрата менше 5 см3/хв). Елюіруют фракцію стильбенів, промиваючи колонку 3 см3 розчину етанолу (70 об.%) Колонку остаточно промивають 10 см3 розчину етанолу (70 об.%).

За допомогою піпетки в лунки плашки вносять по 100 мкдм3 разбав-ленного буферного і 25 мкдм3 аналізованого розчинів з імуноферментної колонки (або стандартного зразка). Потім плашку витримують у темряві при кімнатній температурі (19-25 ° С) протягом 1 ч. За допомогою піпетки додають по 75 мкдм3 розведеного розчину кон'югату в кожну лунку плашки, витримують протягом 30 хв, промивають плашку 10-12 разів розведеним буферним розчином і висушують. Потім додають по 25 мкдм3 суміші субстратів А і Б у співвідношенні 1:1, витримують плашку в темряві при кімнатній температурі протягом 20 хв і додають у кожну лунку по 50 мкдм3 розчину соляної кислоти молярної концентрацією 1 моль/дм3. При цьому спостерігають за зміною блакитного забарвлення розчину в лунках плашки на жовте. Оптичну щільність розчинів в лунках вимірюють при довжині хвилі на спектрофотометрі 450 нм. Зміст гормонів визначають за калібрувальним графіком.

Побудова калібрувального графіка. Для побудови графіка використовують стандартні розчини відомої концентрації гормону, які поміщають в лунки плашки і забарвлюють в аналогічних з досліджуваної пробою умовах.

Експериментальні дані оформляють у вигляді таблиці:



« Попередня Наступна »
=Перейти до змістом підручника=
Інформація, релевантна "Визначення в продуктах тваринництва гормонів"
  1. А
    список А, група отруйних високо токсичних лікарських засобів, що передбачається Державною фармакопеєю СРСР; доповнюється і змінюється наказами Міністерства охорони здоров'я СРСР. При поводженні з цими лікарськими засобами необхідно дотримуватися особливої ??обережності. Медикаменти списку зберігаються в аптеках під замком в окремих шафах з написом «А - venena» (отруйні). Перед закриттям
  2. Б
    + + + Б список сильнодіючих лікарських засобів; група лікарських засобів, при призначенні, застосуванні і зберіганні яких слід дотримуватися обережності. До списку Б належать ліки, що містять алкалоїди та їх солі, снодійні, анестезуючі, жарознижуючі та серцеві засоби, сульфаніламіди, препарати статевих гормонів, лікарську сировину галенових і новогаленові препарати і
  3. В
    + + + вагіна штучна (лат . vagina - піхва), прилад для отримання сперми від виробників сільськогосподарських тварин. Метод застосування В. і. заснований на використанні подразників статевого члена, замінюють природні подразники піхви самки, для нормального прояви рефлексу еякуляції. Такими подразниками в В. і. служать певна температура (40-42 {{?}} C) її стінок,
  4. Г
    + + + габітус (лат. habitus - зовнішність, зовнішність), зовнішній вигляд тварини в момент дослідження. Визначається сукупністю зовнішніх ознак, що характеризують статура, вгодованість, положення тіла, темперамент і конституцію. Розрізняють статура (будова кістяка і ступінь розвитку мускулатури): сильне, середнє, слабке. Вгодованість може бути гарною, задовільною,
  5. Д
    + + + давенеідози (Davaineidoses), гельмінтози птахів, що викликаються цестодами сімейства давенеід. Серед них мають значення давенеози і райетіноеи. + + + Давенеоз (Davaineosis), гельмінтоз птахів, що викликається цестодами роду Davainea сімейства Davaineidae, що паразитують у кишечнику. Поширений повсюдно. Найбільший економічний збиток птахівництву заподіює Д. курей. Збудник Д. курей - D.
  6. И
    + + + Голкотерапія, акупунктура, чжень-цзю-терапія, метод лікування уколами за допомогою голок. Сутність І. полягає в рефлекторному впливі на функції органів з лікувальною метою різними за силою, характером і тривалості уколами. Кожна точка уколу пов'язана каналами (лініями) з певним органом. У тварин таких каналів 14 (рис. 1). Для І. користуються спеціальними голками (рис. 2).
  7. К
    + + + Каверна (від лат. Caverna - печера, порожнина), порожнина, що утворюється в органах після видалення некротичної маси. К. виникають (наприклад, при туберкульозі) в легенях. К. можуть бути закритими і відкритими при повідомленні їх з природним каналом. Див також Некроз. + + + Кавіози (Khawioses), гельмінтози прісноводних риб, що викликаються цестодами роду Khawia сімейства Garyophyllaeidae,
  8. Л
    + + + лабільність у фізіології (від лат. Labilis - ковзний, нестійкий), функціональна рухливість, здатність нервової і м'язової тканин тваринного організму відтворювати за 1 сек максимальне число імпульсів (число електричних коливань) у повній відповідності з ритмом діючих на неї подразників; швидкість протікання в тканини циклів збудження, яким супроводжується її
  9. М
    + + + магнезія біла, те ж, що магнію карбонат основний. + + + Магнезія палена, те ж, що магнію окис. магнію карбонат основний (Magnesii subcarbonas; ФГ), магнезія біла, в'яжучий і антацидний засіб. Білий легкий порошок без запаху. Практично не розчиняється у воді, що не містить вуглекислоти, розчинний у розведених мінеральних кислотах. Застосовують зовнішньо як присипку, всередину -
  10. Н
    + + + гній, цінне органічне добриво, що складається з екскрементів тварин, рідких відходів ферм і підстилкового матеріалу (солома, торф, тирса). Н. містить велику кількість мінеральних і органічних речовин, внесення яких в грунт підвищує її поживні властивості. Залежно від методу утримання тварин та системи збирання приміщення розрізняють Н. рідкий, напіврідкий і твердий. Рідкий
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...