Для зворотної транскрипції використовували 1 мкг тотальної клітинної РНК. Реакцію проводили в кінцевому обсязі 20 мкл в наступних умовах: 1 буфер для зворотної транскрипції, 0.01 М дітіотрейтол, 0.5 мМ кожного з чотирьох дезоксинуклеотидов-трифосфатов, 10 пмоль гексапраймера і 200 од. акт. зворотної транскриптази Superscript II RnaseH-("GibcoBRL", США). Спочатку суміш РНК і гексапраймера у відповідному обсязі прогрівали при 70оС протягом 10 хв. Потім охолоджували в крижаній бані і додавали залишилися компоненти. Реакційну суміш витримували при 25оС протягом 10 хв для подовження праймера і проводили основну реакцію зворотної транскрипції при 42оС протягом 1 ч. Реакційну суміш прогрівали при 70оС протягом 15 хв для інактивації ферменту і розводили бідістілірованной водою до кінцевого об'єму 100 мкл.
Отриману кДНК в кількостях підібраних експериментальним шляхом використовували в полуколичественной ПЛР зі специфічними праймерами. Умови проведення ПЛР описані в п. 5.3.
Інфекція, викликана вірусом гепатиту В ^ Збудник - вірус гепатиту В. ^ Поширеність - 1-2% вагітних. ^ Шлях передачі - статевий, парентеральний, вертикальний. ^ Клініка у вагітної - захворювання зазвичай легкого або середнього ступеня тяжкості (нудота, блювота, гепатоспленомегалія, жовтяниця, біль у правому підребер'ї), безсимптомний перебіг. ^ Діагностика - серология. ^ Вплив на плід - не володіє тератогенним
онкоген І неопластичними ЗАХВОРЮВАННЯ Поль Нейман (Paul Neiman) При розподілі ракові клітини передають дочірнім клітинам неопластичний фенотип. Але цієї причини отримало загальне поширення думка про те, що спадкування неопластичного фенотипу зумовлюється специфічними генами. Це припущення пояснює надзвичайний інтерес дослідників-онкологів до онкогенних вірусів. Незважаючи на порівняльну генетичну
Генетичний компонент вірусу - РНК або ДНК Клітини всіх живих організмів містять два види нуклеїнової кислоти - ДНК (двунітевая ДНК клітинного генома) і РНК (мРНК , тРНК, рРНК, відповідно матрична, транспортна та рибосомальная РНК). На початку 1940-х років стало більш-менш ясно, що віруси також містять нуклеїнові кислоти. Однак, на відміну від клітин, віріони вірусів містять тільки один вид нуклеїнової кислоти - або ДНК або
Еволюційні лінії в походженні вірусів При обговоренні питань про походження вірусів важливими представляються дві проблеми: Проблема появи первинних вірусних предків і етапів формування специфічних груп вірусів. Проблема походження сучасних вірусів, які виникли набагато пізніше перших вірусних прабатьків, і безперервно виникають в даний час. У контексті обговорюваних в даному навчальному посібнику
Реалізація генетичної інформації вірусів При здійсненні життєвого циклу РНК-геномні і ДНК-геномні віруси реалізують різні молекулярні механізми і стратегії. У зв'язку з цим особливості реплікації цих геномів і їх експресії будуть розглянуті окремо. 3.2.1 Генетичні стратегії РНК-геномних вірусів 3.2.1.1 Основні принципи і механізми реплікації РНК-геномів
Транскрипція Терміном транскрипція зазвичай позначають процеси синте за комплементарних геному РНК з інформаційними функція мі (іРНК) (рис. 6). Однак у (+) РНК геномних вірусів функції іРНК виконує сам геном, який відразу ж після инфицирова ня клітин починає використовувати рибосоми для синтезу вірус них білків. При цьому одним з перших утворюється фермент РНК, залежна РНК, полімераза,
Генна інженерія Генна інженерія Генна інженерія - розділ біотехнології, пов'язаний з цілеспрямованим конструюванням in vitro нових комбінацій генетичного матеріалу, здатного розмножуватися в клітці і синтезувати певний продукт. Генна інженерія вирішує наступні завдання: 1) отримання генів шляхом їх синтезу або виділення з клітин; 2) отримання рекомбінантних молекул ДНК; 3)
Загальні відомості А. Патогенез . У крові ВІЛ-інфікованих хворих поступово зменшується кількість лімфоцитів CD4 і співвідношення CD4/CD8. На ранніх етапах ВІЛ-інфекції на 1000-10 000 лімфоцитів CD4 доводиться тільки 1 заражений ВІЛ. У міру прогресування захворювання частка і абсолютне число інфікованих лімфоцитів CD4 зростає, що супроводжується збільшенням концентрації вірусної РНК в плазмі. Встановлено,
ТЕОРІЇ ПОХОДЖЕННЯ ВІЛ Питання про походження ВІЛ 1-го та 2-го типів є одним з ключових в сучасному розумінні проблеми СНІДу, оскільки його рішення значною мірою визначає напрями діагностики, лікування та профілактики даної патології. Отже, відомі наступні збудники СНІД: вірус імунодефіциту людини (ВІЛ) - LAV/HTLV-3 (HIV, ВІЛ-1), поширений в основному в Америці, Європі,
ДОКАЗИ ГЕНЕТИЧНОЇ РОЛІ нуклеїнових кислот Історія вивчення нуклеїнових кислот починається з 1869 р., коли швейцарський хімік Ф.Мішер виявив у клітинному ядрі особливі речовини, які мають властивості кислот. Він дав їм назву нуклеїнових кислот (від лат. Nukleus - ядро). Довгий час нуклеїнові кислоти не привертали уваги дослідників. І тільки після того як у дослідах англійської бактеріолога Ф.Гріффіта (1928) була продемонстрована
