Головна
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові , генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаВетеринарія
« Попередня Наступна »
Пропоноване довідковий посібник є результатом роботи колективу авторів. Довідник лікаря ветеринарної медицини, 2006 - перейти до змісту підручника

Методи імуноферментного аналізу в діагностиці хвороб тварин

Імуноферментний аналіз (ІФА) - належить до групи імунохімічних методів біохімічного дослідження. Метод заснований на специфічному взаємодії антитіла (Ат) з антигеном (Аг) - специфічні компоненти реакції. У різних варіантах постановки методу АГ або АТ, позначається так званої ферментної міткою. Остання являє собою очищений фермент високої активності, приєднаний за допомогою фізико-хімічної взаємодії до молекули ат або аг. Фермент використовується для візуалізації імунного взаємодії. На останньому етапі постановки реакції додається субстрат, на який впливає фермент з утворенням специфічного продукту. Ще однією принциповою умовою постановки методу є відділення, що утворюється імунного комплексу від інших складових реакційного середовища. Це досягається, як правило, адсорбцією одного зі специфічних компонентів реакції на якомусь носії (найчастіше на матеріалі з якого виготовлена ??ємність, в якій ставиться реакція). Потім за допомогою відмивання від заважають компонентів в реакційній середовищі залишається тільки шуканий імунний комплекс, з ферментної міткою до якого додається субстрат.

Теоретично метод грунтується на одному із фундаментальних законів хімії - законі дії мас. Стосовно до даного методу використовується приватний висновок із закону - кількість міченого антигену, пов'язані з антитілами буде обернено пропорційно кількості визначуваного антигену:



[Аг-Ат]

Аг + Ат=Аг-Ат; К=??????, де

[Аг] * [Ат]



К-константа рівноваги оборотної реакції,

[Аг] - концентрація антигену;

[Ат] - концентрація антитіла;

[Аг-Ат] - концентрація комплексу антиген-антитіло.



У стані рівноваги відношення пов'язаного антигену (В) до вільного (F) визначається співвідношенням:



В / F=[Аг * Ат] / [Агісх] - [ Агсв], де



[Агісх] - вихідна концентрація антигену;

[Агсв] - кількість антигену, пов'язаного у вигляді комплексу Аг * Ат.



Мічений антиген поводиться так само, як і немічених, і відношення концентрації пов'язаного антигену і вільного описується тим же рівнянням.

Звідси випливає, що якщо концентрація немічених антигену Аг (визначеного агента) буде збільшена при постійній концентрації міченого антигену (Аг), то перший пов'язує більше число антитіл. У результаті концентрація пов'язаного міченого антигену (Агх Ат) знизиться і ставлення пов'язаного міченого антигену до вільного (Вх / fх) буде зменшуватися із збільшенням в інкубаційної суміші немічених (визначається) антигену.
Тому ставлення Вх / Fx є кількісною характеристикою визначається антигену.

Метод ІФА є історичним продовженням радиоиммунологического методу (РІА) широко використовуваного для визначення концентрації гормонів і до теперішнього часу. Методи ІФА були розроблені на початку 70-х років ХХ століття. Метод імуноферментного аналізу мав ряд переваг перед методом радиоиммунологического аналізу.

1. У ньому не використовувалися радіоактивні ізотопи. Відсутність радіаційної небезпеки значно спрощує умови проведення реакції.

2. Мічені сполуки, що використовуються в ІФА більш стійкі і постійні (в РІА вони стійкість залежить від періоду напіврозпаду ізотопів.)

3. Можливість швидкого визначення результатів ферментативної реакції за допомогою звичайних загальнодоступних приладів (фотометров). Можливість навіть візуальної оцінки реакції.

4. ІФА легко піддається автоматизації.

Чутливість і специфічність ІФА визначається якістю імунної сироватки. Необхідно використовувати тільки високоавідні і високо специфічні антитіла. В даний час якісний імуноферментний діагностикум має виготовлятися на основі моноклональних Ат.

Принципово слід розділяти методи ІФА на види: конкурентний ІФА та неконкурентний ІФА. У першому випадку в реакційну суміш вносять заздалегідь відому кількість міченого Аг або Ат, які у відповідність до закону дії мас конкурують за специфічну взаємодію з Аг або Ат, що знаходяться в досліджуваному матеріалі. При неконкурентном методі відбувається відділення продукту специфічної імунної реакції - комплексу Аг-Ат і проведення подальшої специфічної реакції з поміченим Ат до цього комплексу. Конкурентний варіант ІФА використовується більшою мірою для визначення концентрацій речовин, а неконкурентний метод - це метод напівкількісного визначення речовин і розрахунок концентрації в даному випадку проводиться за титром або в умовних одиницях виміру. Неконкурентний варіант ІФА використовується для виявлення складних Аг або Ат, з безліччю антигенних детермінант, таких збудники інфекційних захворювань, або антитіла до збудників інфекційних та паразитарних захворювань.

Так же метод ІФА з техніки постановки реакції поділяють на гомогенний ІФА (EMJT) в якому утворився при взаємодії імунний комплекс не відділяється від інших компонентів реакції та твердофазний (ELISA) - в цьому випадку Аг або Ат иммобилизировать на твердому носії (пробірці, стінці полістеролловой лунці і т.д.).

Методом ІФА може бути визначено будь-яка речовина, яка набирає специфічне імунно-хімічну взаємодію і на яке або на утворився імунний комплекс в організмі продуцента імунних тел розвивається імунітет.


ІФА у ветеринарній практиці використовують у таких напрямках.

1. Діагностика інфекційних та паразитарних захворювань. Вона може грунтуватися на визначенні концентрації Ат до збудників захворювань у сироватці крові або на визначенні в органах і тканинах Аг (тобто безпосередньо збудника). Виробниками з різних країн випускається великий спектр діагностикумів для діагностики різних захворювань великої рогатої худоби, птиці, свиней та ін видів тварин. Найбільш поширеними в нашій країні діагностикумами для ІФА є діагностикуми виробництва: ФДМ «ВНІІЖЗ» (Росія) - набори для діагностики інфекційних захворювань птахів (ІБК, БГ, ИББ, мікоплазмозу птахів, сальмонельозу, ССЯ-76 та ін); Sinbiotic (CША) - так само набори для діагностики інфекційних захворювань птахів; AideX (США) - набори для діагностики інфекційних захворювань великої рогатої худоби, свиней і птахів (в тому числі - для діагностики лейкозу великої рогатої худоби, класичної чуми свиней, РРС); НВФ «Нарвак» - набори для діагностики інфекційних захворювань кішок (панлейкеміі), - собак (чума собак, інфекційний гепатит та ін), - великої рогатої худоби (вірусної діареї, ІРТ і ін), - свиней (КЧС, РРС, парвовирусной інфекції та ін ), - птахів.

2. Гормонодіагностіка - визначення концентрації гормонів для діагностики ендокринних захворювань, глибоких порушень обміну речовин і порушень репродуктивної функції. Розроблено методи визначення гормонів, як білкової природи, так і стероїдної. При цьому визначаються як основні форми гормонів, так і проміжні їх метаболіти. Найбільш часто у ветеринарній практиці визначаються концентрація прогестерону, тестостерону, естрадіолу і його метаболітів, трійод-і тетрайодтіроніна.

3. Визначення залишкових кількостей лікарських препаратів і токсичних сполук у тваринницькій продукції. Розроблено методи визначення антибіотиків і мікотоксинів.

4. Визначення мікотоксинів у кормах для тварин з метою визначення придатності до згодовування. ФДМ «НДІ ветеринарної санітарії» (Росія) розроблені і виробляються набори для визначення концентрації мікотоксинів (зерааленона, Дону, афлатоксинов та ін.) Ці набори широко використовуються у ветеринарних лабораторіях Республіки, настанови щодо їх застосування затверджені.
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
Інформація, релевантна " Методи імуноферментного аналізу в діагностиці хвороб тварин "
  1. ВАГІТНІСТЬ І ПОЛОГИ ПРИ СЕРЦЕВО-СУДИННИХ ЗАХВОРЮВАННЯХ, анемії, захворюваннях нирок, цукровому діабеті, вірусному Гіпатії, ТУБЕРКУЛЬОЗ
    методів радикальної або паліативної корекції дефектів розвитку серця і магістральних судин, питання точної діагностики та лікування вроджених вад серця стали активно вирішувати в останні десятиліття. Раніше вроджені вади серця ділили тільки на дві групи: "сині" і "не сині" пороки. В даний час відомо близько 50 форм вроджених вад серця та магістральних судин. Одні з них
  2. МЕДИЧНА ІМУНОЛОГІЯ
    методи виявлення. Номенклатура основних компонентів системи комплементу. Класичний і альтернативний шляхи активації комплементу. Роль комплементу в хемотаксисе, опсонізації мікробів, розвитку алергічних і імунопатологічних процесів. Методи кількісного та якісного визначення комплементу. Інтерферони. Класифікація інтерферонів, індуктори, механізм утворення і
  3. ДІАГНОСТИКА ІНФЕКЦІЙНИХ ХВОРОБ
    методи, за допомогою яких це досягається. Пряме мікроскопічне дослідження. Пряме мікроскопічне дослідження тканинних рідин, ексудатів і тканин є одночасно найпростішим і одним з найбільш інформативних лабораторних методів, застосовуваних в діагностиці інфекційних хвороб. У багатьох випадках це дослідження дозволяє провести точну, високоспецифічних ідентифікацію
  4. . ІНФЕКЦІЇ, ВИКЛИКАЮТЬСЯ Гемофилюс. КОКЛЮШ
    методу) і вони потім захворюють вдруге клінічно вираженою формою інфекції типу b. Хоча ці діти вважаються протягом декількох місяців «імунологи-чесання не реагують», у них в подальшому відзначається підвищений рівень антитіл проти ПРФ. Ці дані вказують на необхідність подальшого вивчення дітей, видужуючих від інвазивних форм інфекції Н. influenzae типу b, і ретельного
  5. ПРИНЦИПИ ВІРУСОЛОГІЇ
    методів рекомбінації ДНК зажадає перегляду цих класифікацій з точки зору ступеня генетичної близькості. Реплікація. Під реплікацією увазі процес впровадження вірусів в сприйнятливі до них клітини, відтворення їх генетичного матеріалу і білків, збірки і вивільнення здатного до інфікування потомства. Різноманітність вірусів, а саме їх структури і типу генетичного
  6. ГРИП
    методів в інфікованих клітинах виявляли грануляцію, вакуолізацію, набухання і освіта пікнотичної ядер, а потім некроз і десквамацію клітин . У деяких ділянках циліндричний епітелій замещался плоскими і метапластичні епітеліальними клітинами. Тяжкість захворювання корелювала з кількістю вірусу, що знаходиться в слизовому секреті. Це дозволяє припустити, що вираженість
  7. . Вірус простого герпесу
    метод, названий Експлантація). Вірус же знову впроваджується в сприйнятливі клітини - процес кокультівірованія. Вперше реплікація вірусів в нейронах була виявлена ??при реактивації in vitro. Це дозволяє припустити, що нейрон служить своєрідним депо латентно існуючого вірусу і в організмі. Потім вірусну ДНК виявили в нервовій тканині в той момент, коли активний вірус не міг бути
  8. цитомегаловірусом
    методів ДНК - ДНК-гібридизації для швидкого виявлення вірусу цитомегалії в сечі і препаратах лейкоцитарної плівки. При цьому чутливість і специфічність досліджень досягає 90%. В даний час ці методики використовують тільки в експериментах і вимагають для свого здійснення використання препаратів, мічених ^ Р. Створення нерадіоактивних стабільних препаратів зробить цей
  9. ВІРУСНИЙ гастроентерит
    метод твердофазного імуноферментного аналізу (ELISA), які, однак, ще не знайшли комерційного застосування. Інфекція, викликана вірусом Норфолк, остропротекающая і самокупірующееся. Лікування не потрібно. У рідкісних випадках тяжкої блювоти і проносу показана пероральна або внутрішньовенна регідратація. Оскільки після природного інфікування вірусом Норфолк сталого імунітету, як правило, не
  10. арбовірусная ІНФЕКЦІЇ
    методи інокуляції мишам еритроцитів хворого або флуоресцентних антитіл; бажано поєднання двох методів. Спеціального зберігання крові перед проведенням тесту з флюоресцирующими антитілами не потрібно, тому що антитіла зберігаються протягом декількох тижнів після зникнення клінічних ознак захворювання. Лікування симптоматичне. Прогноз сприятливий. Профілактика. Для
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека