загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Методи діагностики заразних хвороб

Бактеріологічне дослідження застосовується для виявлення патогенних бактерій в матеріалі від хворих тварин або їх трупів, виявлення мікробів в об'єктах зовнішнього середовища, кормах, м'ясі і т.д.

Досліджуваний матеріал по можливості збирають в асептичних умовах у стерильний посуд (від трупів не пізніше 2-3 годин після смерті тварин, у ряді випадків доцільний вимушений забій 1-2-х з групи хворих тварин) і доставляють найближчим часом в НЕ консервованому, консервованому (30%-им водним розчином гліцерину або вазеліновим маслом, 0,5%-им розчином фенолу), замороженому (допускається при туберкульозі та ін) вигляді з супровідним документом в лабораторію (в ньому зазначені дата взяття, характер і джерело матеріалу, основні клінічні ознаки хвороби і патологоанатомічні зміни, мета дослідження).

Бактеріологічні дослідження включає: бактеріоскопію мазків досліджуваного матеріалу, виділення чистої культури бактерій з наступним вивченням морфологічних, культуральних, біохімічних, антигенних і патогенних властивостей бактерій.

Мікроскопія дозволяє виявити в матеріалі мікробів, вивчити їх морфологію (форму, розмір, взаємне розташування клітин, структурні компоненти: капсули, суперечки, джгутики, включення) і тинкторіальні властивості. Для цього з патологічного матеріалу готують мазки-відбитки з органів, тканин або препарати-мазки з іншого досліджуваного матеріалу, висушують на повітрі, фіксують (частіше фламбирования або хімічним способом) і забарвлюють тим чи іншим методом залежно від спрямованості дослідження. Забарвлення мікробів проводять простим (один барвник) і складним методами (основний і додатковий барвник, допоміжні реактиви). Складні методи (Грама, Ціль-Нільсена, Романовського-Гімза, Гінса та ін) дозволяють відрізнити одну групу мікробів від іншої, виявити окремі елементи мікробної клітини (спори, капсули).

Для виявлення деяких бактерій (напр., збудника туберкульозу) патологічний матеріал попередньо обробляють одним з методів збагачення, підвищуючи в ньому концентрацію бактерій і позбавляючись від сторонніх мікробів.

При виявленні бактерій використовують і люмінесцентну мікроскопію. Для визначення рухливості мікробів використовують мікроскопію молодий (12-24 ч.) живої культури за допомогою препаратів «роздавлена ??або висяча крапля», а також на основі зростання бактерій в напіврідкому МПА.

Виділення культури бактерій проводять шляхом посіву матеріалу на відповідні (залежно від поживних потреб збудника) поживні середовища. Посів на щільні живильні середовища в бактеріологічних чашках проводять шляхом розтирання шпателем декількох крапель матеріалу по поверхні середовища. При дослідженні паренхіматозних органів убитих або загиблих тварин обпалюють або фламбіруйте шматочок органу, потім надрізають його стерильними ножицями і за допомогою пінцета проводять надрізаної поверхнею по живильному середовищі в чашці. У рідку середу посів матеріалу роблять пастерівської піпеткою. З метою отримання зростання ізольованих колоній (при їх пересеве отримують чисту культуру бактерій) мікробів частіше використовують дробовий посів або пересівши (метод Дрігальского) на кілька чашок з щільним середовищем. Чисту культуру отримують також висіваючи патматеріал на елективні середовища, зараженням лабораторних тварин і прогріванням містить спори матеріалу у водяній бані при 800 С 30 хв.

Засіяні чашки і пробірки інкубують в термостаті при оптимальній для зростання кожного виду бактерій температурі (частіше 370 С) протягом зазвичай 1-2 діб (деяких випадках до 30-60 діб, наприклад збудник туберкульозу).

Для ідентифікації виділених бактерій вивчають тільки чисті культури. Ідентифікацію проводять всебічним вивченням їх культуральних, морфологічних, біохімічних, серологічних і патогенних властивостей.

При оцінці росту на рідких поживних середовищах визначають ступінь і характер помутніння середовища, характер осаду, наявність плівки і пристінкового кільця. При вивченні росту мікробів на твердих середовищах звертають увагу на характер росту (убогий, пишний, однорідний або неоднорідний), число колоній, їх величину, форму, структуру, колір, прозорість.

Біохімічна активність вивчають найчастіше на диференційно-діагностичних середовищах (Гисса, Кліглера, Ендо, Крістенсена та ін), визначаючи при цьому цукролітичні, протеолітичні і редуцирующие властивості.

Антигенну структуру мікробів вивчають за допомогою різних серологічних реакцій - РА, РН, РП, РСК та ін, що дозволяють виявити відмінності між близькородинними видами деяких бактерій, а також окремими штамами всередині виду.

Фаготіпірованіе, як метод ідентифікації мікробів, проводять за допомогою бактеріофагів.
трусы женские хлопок


Визначення патогенних властивостей бактерій проводять шляхом зараження лабораторних тварин культурами або фільтратом культури (при визначенні токсінообразованія).

Після вивчення властивостей бактерій зіставляють отримані дані з ознаками бактерій, наявними у відповідних інструкціях, ГОСТах з лабораторної діагностики інфекційних захворювань, определителе мікробів (Д.Берджі, 1994) і проводять їх родову і видову диференціацію. У сумнівних випадках проводять повторне дослідження матеріалу. Результати дослідження записують у журнал бактеріологічних експертиз, вказуючи який мікроб виділений з досліджуваного матеріалу.



Вірусологічні дослідження - комплекс методів дослідження, що дозволяє розпізнати етіологію вірусного захворювання і вивчити його збудника.

Характер і методика взяття проб при різних вірусних хворобах неоднакові. При взятті матеріалу для виділення вірусу слід виходити з плюралізму вірусів. Його відбирають з урахуванням патогенезу досліджуваної інфекції, якнайшвидше після появи чітких ознак хвороби або не пізніше 2-3 годин після смерті або забою (спостерігається феномен посмертної аутостерілізаціі і посмертних змін тканин) і швидко поміщають в умови низької температури. Матеріал відправляють у лабораторію в термосі з умовами підтримки низької температури, у скляних флаконах (пробірках) з притертими пробками, або консервованому вигляді 50%-ним растровому гліцерину.

Дослідження необхідно починати відразу після надходження матеріалу. Якщо з якихось причин (відсутність ембріонів птахів, тканинних культур) воно відкладається, надісланий матеріал необхідно помістити в низько - температурний морозильник при - 27 ... 40 ... 700С. Спочатку проводять дослідження, що дозволяють безпосередньо виявити вірус або його антигени в матеріалі - світлову, люмінесцентну (метод імунофлюоресценції), електронну мікроскопію і імуноферментний аналіз.

Світлова та люмінесцентна мікроскопія використовується для виявлення великих вірусів (в. віспи), виявлення внутрішньоклітинних включень (напр. Бабеша-Негрі при сказі), вивчення цитопатогенного дії вірусу на клітини (ЦПД), визначення типу нуклеїнової кислоти вірусу (метод флюорох-ромірованія). Для світлової мікроскопії препарати з патологічного матеріалу забарвлюють спеціальними методами: по Морозову, Маккіавеллі, Рома-Новскі-Гімзою - при виявленні віріонів; по Муромцеву, Манну, Туревич та ін - при виявленні включень. Для люмінесцентної мікроскопії при фарбуванні препаратів використовують флуорохроми (акридин помаранчевий та ін.) Електронна мікроскопія (використовують спеціально приготовані препарати) дозволяє виявляти вірусні частки в різних матеріалах, диференціювати їх за формою, розміром і ультраструктурі. Метод імунофлюоресценції проводять за допомогою імунних сироваток мічених флюорохромами з метою індикації, ідентифікації вірусів та вірусних агентів.

Імуноферментний аналіз (ІФА) застосовується в гістохімічному і твердофазном варіанті, де використовуються антитіла мічені ферментами (пероксидаза хрону, лужна фосфатаза та ін.) Гістохімічний варіант ІФА призначений для ідентифікації вірусу в патматеріалі або культурі клітин. Твердофазний варіант ІФА використовується як для визначення антигенів, так і визначення антитіл і їх титрів в цілях ретроспективної діагностики.

Для виділення вірусу використовують ембріони птахів, культури клітин, лабораторних і природно-сприйнятливих тварин. Підготовку вируссодержащего матеріалу для зараження чутливих об'єктів здійснюють двома методами: за допомогою обробки антибіотиками або шляхом стерилізуючого фільтрування. Потім матеріал піддають бактеріологічному контролю на наявність бактерій, грибів шляхом посіву на МПА, МПБ, МППБ, середу Сабуро і при негативних результатах використовують для зараження. При отриманні негативних результатів проводять не менше трьох пасажів на біологічних об'єктах того ж виду.

При виділенні у випробуваному матеріалі вірусного агента наступним етапом дослідження є ідентифікація вірусу (видова і группоспецифических) за допомогою серологічних методів. З цією метою використовують РН, РСК, РІД, РТГАд, РЗГА, РНГА, ІФА. Дані методи дозволяють виявити також і антитіла в сироватках перехворілих тварин. При цьому необхідно мати дві проби сироватки крові (парні сироватки), взяті на початку і в кінці хвороби (зазвичай через 14 днів). Зберігати сироватки необхідно в холодильнику при 40 С або в замороженому вигляді, суворо дотримуючись порядок нумерації проб та відповідності записів у журналі і на пробах.

В даний час в лабораторіях для ідентифікації збудника використовується полімеразна ланцюгова реакція (ПЛР), що дозволяє визначити нуклеотидну послідовність РНК або ДНК інфекційного агента.


Результати дослідження записують у журнал вірусологічних досліджень. Діагноз на інфекційну хворобу може бути поставлений при обліку епізоотологічних, клінічних та патологоанатомічних даних і результатів лабораторних досліджень.



Мікологічне дослідження - комплекс методів, що застосовуються для виявлення та ідентифікації грибів у досліджуваному матеріалі.

Мікологічне дослідження при діагностиці мікозів включає мікроскопію патологічного матеріалу для виявлення збудника в органах і тканинах хворої тварини, виділення чистої культури та її ідентифікацію. У неясних випадках перевіряють патогенність виділених культур біологічної пробою. Додатково використовують серологічний, алергічний, люмінесцентний методи діагностики. Гістологічне дослідження застосовують для діагностики глибоких мікозів, збудник яких не культивується на поживних середовищах (ріноспорідіоз).

Відбір патологічного матеріалу при дерматомікозах виробляють з периферії свіжих, уражених вогнищ (скоринки, волосся); при епізоотичному лімфангіті, споротрихозі, актиномикозе, актінобаціллезе матеріал витягують з НЕ вскрившіхся абсцесів, а також досліджують гранулематозні вогнища після попередньої дезінфекції їх; при вісцеральних мікозах досліджують гній, сечу, органи і тканини, зскрібки зі слизових оболонок. Патологічний матеріал поміщають у стерильні чашки Петрі (при дерматофітозів можна в чисті стерильні пакети). Для кращого виявлення елементів грибів з патологічного матеріалу готують препарати на предметному склі в краплі 10-20%-ного розчину їдкого натру з наступним додаванням 50%-ного водного розчину гліцерину. Мікроскопують незабарвлені препарати (рідше пофарбовані за Грамом, лактофуксіном, бавовняної синню, Романовським-Гімзою) при малому збільшенні, потім при х40. Кращі результати дослідження дає фазово-контрастна мікроскопія.

Первинну культуру збудників отримують посівом патологічного матеріалу на агар Сабуро, сусло-агар, кров'яний агар та ін (10-12 пробірок). При забрудненні сторонньої мікрофлорою можна застосувати передпосівний обробіток патологічного матеріалу (700 етиловим спиртом або 2-4%-ним розчином формаліну 3-6 хв.) Або додати антибіотики в живильне середовище. Оптимальний рН живильного середовища для патогенних грибів складає 6,0-7,2, температура культивування 26-300 С, для окремих представників 370 С. Посіви витримують до 30 діб, так як первинні культури частіше розвиваються повільно (напр. Tr. Verrucosum). Ідентифікацію культур проводять за культурально-морфологічними ознаками, ферментативної активності на спеціальних середовищах. При мікроскопії культур (безпосередньо в чашках або препаратах) виявляють міцеальние тяжі, склероції, плодові тіла, будова і характер розгалуження спорангієносцями, конидиеносцев, форму спорангіев, розташування конідій (ланцюжками або поодиноко), відношення до фарбування. Патогенність культур перевіряють зараженням білих мишей, морських свинок, кроликів через скаріфіцірованную шкіру, підшкірно, інтраперітоніально, внутрішньовенно, інгаляційним методом. Серологічні реакції (аглютинації, преципітації, РСК та ін), алергічні внутрішньошкірні проби застосовують у комплексі з іншими методами при діагностиці переважно кандидамикоза, гістоплазмозу, епізоотичного лімфангіта. Люмінесцентним методом виявляють у тварин мікроспорії.

Для мікологічного дослідження при діагностиці мікотоксикозів беруть середні проби з партій кормів, що викликали аліментарне отруєння тварин. Попередньо виключають інфекційні хвороби, отруєння отруйними рослинами і отрутохімікатами. Використовують органолептичний, мікологічний, токсико-біологічний і фізико-хімічний методи.

При органолептичному аналізі враховують вологість, колір, запах, іноді смак, а також видимі поразки корму грибами. Мікологічне дослідження включає: первинне виділення грибів з кормів, кількісний облік і диференціацію їх, виділення чистих культур грибів. Виділення токсичних варіантів грибів з досліджуваних зразків корму - вирішальний момент в діагностиці мікотоксикозів. Токсичність зразків корму і культур грибів визначають шкірною пробою на кроликах, найпростіших (інфузорій стілоніхіях) і згодовуванням лабораторним тваринам. Фізико-хімічний аналіз полягає в ізоляції, якісному і кількісному визначенні в кормах і культурах грибів афлатоксинов, мікотоксину (Т-2), зеараленону (Ф-2) шляхом тонкошарової хроматографії в поєднанні з люмінесцентної мікроскопії.
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Методи діагностики заразних хвороб"
  1.  ЗАПАЛЬНІ ЗАХВОРЮВАННЯ ВЕРХНЬОГО ВІДДІЛУ ЖІНОЧИХ СТАТЕВИХ ОРГАНІВ.
      Гострий сальпінгоофорит (на першому місці за частотою). Інфекційний процес переходить на яєчник під час овуляції, коли після виходу яйцеклітини оголена ранова поверхню, тобто вхідні ворота для інфекції. Клініка: біль різного характеру і ступеня вираженості внизу живота, процес, як правило, двосторонній. Симптоми інтоксикації (лихоманка, озноб, слабкість, нездужання і т.д.).
  2.  ОСНОВИ ТЕОРІЇ епізоотичного процесу
      Вивчення епізоотичного процесу інфекційних хвороб сільськогосподарських тварин за допомогою експериментів, як показала багаторічна практика, не дає бажаних результатів. У такій ситуації велику допомогу може надати розробка теоретичної концепція цього процесу і її інтерпретація стосовно реальної епізоотичної ситуації відповідної інфекції.
  3.  Вітряна віспа та оперізувальний герпес
      ^ Збудник - virus varicella - zoster (WZ). ^ Ризик у вагітних - 5% вагітних серонегативного. ^ Поширеність вродженої вітряної віспи - 1 випадок на 7500 новорожден-них. ^ Шлях передачі - повітряно-краплинний (висококонтагіозна інфекція). ^ Клініка у вагітної - ознаки вітряної віспи (або оперізувального Герпен-са). ^ Діагностика - клінічні дані для підтвердження
  4.  Краснуха
      ^ Збудник - вірус краснухи. ^ Ризик у вагітних - 20% вагітних сіро-негативні. ^ Шлях передачі - повітряно-крапельний. ^ Клініка у вагітної - легка вірусна інфекція (висип, артралгія, лімфаденопатія). ^ Діагностика - серология (виявлення IgM або значне підвищення титру IgG). ^ Вплив на плід-ризик розвитку синдрому вродженої краснухи становить: 90% -
  5.  Парвовирусная інфекція
      ^ Збудник - парвовирус В19 (ДНК-вірус, сімейство парвовирусов, рід ерітровірусов). ^ Ризик у вагітних - 40% вагітних сіро-негативні, ймовірність зараження при контакті з хворим становить 50%. ^ Шлях передачі - повітряно-краплинний, парентеральний, трансплацентар-ний. ^ Клініка у вагітної - безсимптомний перебіг (60%), лихоманка, лімфаденопатія, еритема, поліартрит,
  6.  . Шигельоз
      Річард Д. Пірсон, Річард Л. Гуеррант (Richard D. Pear son, Richard L. Guerrant) Визначення. Шигельоз називають гостру бактеріальну інфекцію кишечника, що спричинюється одним з чотирьох видів шигел. Спектр клінічних форм інфекції включає і легку, водянисту діарею, і важку дизентерію, для якої характерні переймоподібні болі в області живота, тенезми, лихоманка і ознаки загальної
  7.  ТУБЕРКУЛЬОЗ
      Томас М. Деніел (Thomas M. Daniel) Визначення. Туберкульоз - хронічна бактеріальна інфекція, що викликається Mycobacterium tuberculosis і характеризується утворенням гранульом в уражених тканинах і вираженої клітинно-опосередкованої гіперчутливістю. Хвороба, як правило, локалізується в легенях, проте в процес можуть залучатися і інші органи. За відсутності ефективного лікування
  8.  СИФІЛІС
      Кінг К. Холмс, Шейла А. Люкхарт (King К. Holmes, Shella A. Lukehart) Визначення. Сифіліс - хронічна системна інфекція, що викликається Treponema pallidum підвид pallidum. Передається статевим шляхом, інкубаційний період у середньому триває близько 3 тижнів і супроводжується розвитком первинного вогнища ураження, пов'язаного з регіонарним лімфаденітом. Вторинна бактеріеміческого стадія пов'язана з
  9.  Криптоспоридіоз ТА ІНШІ протозойних інфекцій
      Джеймс Дж.Плорд (James /. Florae) Криптоспоридіоз Визначення. Криптоспоридіоз - це кишкове захворювання хребетних тварин, що викликається найпростішими роду Cryptosporidium. Збудники мешкають на мікроворсінчатом краї кишкового епітелію, викликаючи клінічні форми інфекції від гострого самокупірующееся водянистого проносу до хронічних, важких, загрозливих життю гастроентеритів у осіб
  10.  Передмова
      Мільйони років тому на Землі з'явилися патогенні мікроорганізми і лише на рубежі XIX-XX ст. був досягнутий вирішальний перелом у боротьбі з хворобами, що викликаються цими мікроорганізмами. Але на порозі 2002 перед медициною постали нові проблеми: погіршення епідеміологічної обстановки по багатьом інфекціям, швидке старіння населення, збільшення людей з імунодефіцитами, що сприяє широкому
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...