загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня

МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ IN VITRO

Діагностика алергії по аналізах крові - сучасний напрямок в алергології. На відміну від шкірних проб і провокаційних тестів аналізи крові не призводять до розвитку алергічних реакцій у пацієнта, практично не мають протипоказань і рекомендуються при будь-якій формі алергії. Основними показаннями є:

- ранній дитячий вік;

- високий ступінь сенсибілізації пацієнтів;

- безперервно рецидивуючий перебіг захворювання без періодів ремісії ;

- неможливість скасування антигістамінних та інших препаратів;

- полівалентна сенсибілізація, коли відсутня можливість проведення тестування in vivo відразу з усіма передбачуваними алергенами в обмежені терміни обстеження;

- різко змінена реактивність шкіри;

- хибнопозитивний або помилково негативний результат при шкірному тестуванні;

- уртикарний дермографізм.

Основними перевагами методів специфічної діагностики in vitro є:

- безпека для хворого;

- висока стандартність і відтворюваність;

- можливість кількісного (цифрового) обліку;

- можливість автоматизації;

- можливість проведення дослідження в разі, коли пацієнт знаходиться від алерголога на великому відстані і доставлена ??лише сироватка хворого;

- мала кількість крові для дослідження.

Сучасні методи, застосовувані для in vitro-діагностики алергічних захворювань, представлені в табл. 1.

Таблиця 1

Сучасні методи, застосовувані для in vitro-діагностики алергічних захворювань



Методи визначення рівня загального IgE в сироватці кро-ви

Концентрація IgE в сироватці крові здорових людей представлена ??в табл. 2.

При алергічних реакціях негайного типу, як правило, відзначається підвищення загального рівня IgE в сироватці крові, однак у ряді випадків цей показник може відповідати нормі. Проте, встановлено, що у грудних дітей з високим рівнем IgE ризик розвитку алергії підвищений. Атопічний захворюваннями страждають 95% дітей з високим рівнем IgE. Приблизно у 70% дорослих, хворих екзогенної бронхіальну астму та алергічний риніт, рівень IgE перевищує норму на два стандартних відхилення. Особливо високий (більше 1000 МО / мл) рівень IgE відзначений при дифузному нейродерміті і атопічних захворюваннях органів дихання.

Таблиця 2

Концентрація IgE в сироватці крові здорових людей



високочутливі методи імунологічних досліджень, що дозволяють визначати навіть низькі концентрації IgE (менше 50 МО / мл) є:

1. Імуноферментний аналіз (ІФА). Для кількісного визначення рівня загального IgE застосовують твердофазний ІФА (рис. 6), при якому антитіла до IgE сорбовані на твердому носії, наприклад, в лунках планшет з полістиролу. Утворився при введенні досліджуваної сироватки комплекс виявляють додаванням відповідних їм антитіл, кон'югованих з ферментом-міткою (пероксидазою хрону, бета-галактозидазою і чи лужною фосфатазою).



Рис. 6.

Принцип постановки ІФА для визначення IgE



Після з'єднання антигену з меченной ферментом імунною сироваткою в суміш додають субстрат / хромоген. Субстрат рас-щепляется ферментом і змінюється колір продукту реакції; інтенсивність забарвлення прямо пропорційна кількості зв'язалися молекул антигену і мічених антитіл. При позитивному результаті змінюється колір хромогену. Щоразу після додавання чергового компонента з лунок видаляють не пов'язана реагенти шляхом промивання. Облік інтенсивності реакцій досвідчених і контрольних проб проводять на планшетному спектрофотометрі (ІФА-рідері) за величиною поглинання світла з певною довжиною хвилі (для хромогену ТМБ (тетраметілбензідін) вона складає 450 нм).

2. Хемілюмінесцентний («сендвіч») аналіз із застосуванням парамагнітної мітки.

До сироватці крові пацієнта додають анти-IgE-АТ, мічені люмінесцентної міткою (ефіром акридину). Після відмивання НЕ-зв'язалися антитіл додають анти-IgE-антитіла, ковалентно пов'язані з парамагнітними частинками. Для обліку необхідно спеці-ально вимірювальний пристрій, яке включає фотометр і електрод з магнітом. Магніт захоплює парамагнітні частинки, пов'язані з IgE-кон'югатами, в результаті електрохімічної реакції відбувається люмінесценція мітки, яка вимірюється фотометрически. Прикладами таких пристроїв є системи ACS: 180 (Ciba Corning Diagnostics Corp.), NPD (Calgon Vestal Laboratories), Clorox (Clorox Company). Метод є високочутливим і дозволяє визначати концентрацію загального рівня IgE в діапазоні 1,5-3000 кЕ / л.

3. Радіоімунний аналіз (РІА) - метод, заснований на мечение одного з компонентів імунологічної реакції (антигену або антитіла) радіоактивним ізотопом I125. Для кількісного визначенні-ня рівня загального IgE застосовують непрямий або конкурентний твердофазний РІА (на твердій фазі иммобилизировать захоплюючі антитіла проти IgE людини). В останньому випадку в систему одночасно вносять сироватку пацієнта і певну кількість IgE, міченого I125. У результаті реакції відбувається зв'язування даного компонента, назад пропорційне змістом IgE в сироватці пацієнта. Результати оцінюють за допомогою гамма-лічильника з радіоактивності утворюються імунних комплексів.

Оскільки РИА вимагає дорогого устаткування і реактивів, а також умов для роботи з радіоактивними ізотопами, він мало використовується в даний час.

Методи, що використовуються в сучасній практиці для визначен-ня аллергенспецифических IgE в сироватці крові

високочутливим і специфічним методами визначення аллергенспецифических IgE-антитіл є РАСТ, МАСТ, іммуноблотінга, твердофазний ІФА, мікроеррей.

РАСТ (радіоаллергосорбентний тест) - метод визначення специфічних IgE-антитіл у сироватці крові пацієнта до алергену, попередньо сорбированная на пористому носії (рис. 7).

В сироватку хворого вноситься нерозчинний полімер - аллер-генний кон'югат, який сорбує на собі специфічні по відношенню до використовуваного алергену антитіла. Далі додають антіглобуліновой сироватку (проти IgE), мічену радіоактивним ізотопом. Після відмивання незв'язаних реагентів, результати оцінюють за допомогою гамма-лічильників за рівнем радіоактивності утворюються імунних комплексів у зіставленні з контролем і стандартною кри-вої.

Визначення специфічних IgE за допомогою РАСТ показано при високому ризику анафілактичних реакцій, ураженні шкіри і проведенні лікування, що впливає на результати шкірних проб.

В даний час широкого поширення набули РАСТ третього покоління, які характеризуються великою чутливістю і специфічністю, автоматизацією, використанням флюорохромних, ферментних міток або хемілюмінесцен-ції.



Рис. 7.

Принцип постановки РАСТ (по L. Wide)



Визначення аллергенспецифических IgE в РАСТ з применени-ем флюоресцентной мітки

До алергену, сорбированная на целлюлозном носії, додають сироватку крові пацієнта.
трусы женские хлопок
Потім додаються мічені ферментом (?-Галактозидазою) анти-IgE-АТ, які зв'язуються з утворився кон'югатом. Після відмивання незв'язаних антитіл додають субстрат (4-метілімбелліферіл-?-D-галактозид), у разі ферментації якого утворюються флуоресцентні речовини, концентрація яких виявляється за допомогою рідера (FluoroCount).

Як приклад методу, заснованого на ефекті хемілюмінес-ценціі, можна навести МАСТ.

MACT (множинний аллергосорбентний тест) - метод визначення аллергенспецифических IgE, аналогічний за принципом постановки РАСТ, де алерген сорбирован на целюлозних нитках, а як індикатор реакції використовуються фотореагент, світіння яких реєструється на плівці Polaroid, на люмінометра, на фотометрі (рис. 8). Метод дозволяє швидше отримати результати дослідження, дає можливість визначати необхідні параметри навіть у одного хворого, не чекаючи накопичення проб для використання цілого набору.



Рис. 8.

Пристрій для постановки МАСТ

:

1 - MAST-панель в зборі; 2 - кришка, 3 - целюлозні нитки з адсорбованим алергеном; 4 - корпус

Псевдоіммуноблот - метод, що дозволяє одночасно виявляти специфічні IgE-антитіла до спектру алергенів (до кожного з них) в сироватці або іншому матеріалі. Псевдоіммуноблот заснований на твердофазном ІФА, але на відміну від останнього має більшу специфічністю (але меншою чутливістю), швидкістю виконання, мінімальним обсягом крові (менше 0,5 мл), можливо-стю одночасного тестування з великим числом алергенів (близько 20 в кожній панелі) . Крім того, зараз застосовується про-граммно високоточна обробка результатів.

Сучасні тест-системи побудовані за принципом дворівневого визначення аллергостатуса: на першому рівні проводиться стандартне аллергообследованіе, що дозволяє визначити групу алергенів, до якої є чутливість. Після цього можливе проведення розширеного (більш точного і складного) визначення чувствитель-ності до конкретного алергену.

Класичний імуноблот застосовують у разі наявності чітких вказівок на причинний алерген (дані анамнезу, елімінаційна тесту тощо) і негативних результатів тестування на специфічний IgE з охарактеризованими компонентами цього ал-лергена. У таких випадках з грубого екстракту алергену отримують блотом і проводять аналіз сироватки хворого на наявність IgE, специфічних до мінорним (Не охарактеризованих) компонентам алергену.

Мікроеррей (microarrey) є порівняно новим (разрабо-тан в 1990-х рр..) І вельми перспективним напрямком в прикладної молекулярної біології. В даний час найбільшого поширення странение отримала технологія мікроеррея, заснована на ДНК-Олігонуклеотиди, однак розвивається і мікроеррей із застосуванням моноклональних антитіл і рекомбінантних антигенів. Зокрема, подібна технологія застосовується для діагностики та оптимізації лікування алергій (рис. 9).



Рис. 9.

Схема проведення мікроеррея для діагностики алергії



Дослідження проводиться в кілька етапів:

1. Приготування мікрочіпа: рекомбінантні алергени розкопуються на поверхню активованого предметного скла (обсяг краплі - нанолітри, кількість антигену - десятки пикограмм). Одне скло містить 12 осередків. Кожна комірка містить десятки (сотні) різних алергенів і калибровочную криву (зростаючі кількості IgE) в триплетах. Таким чином, одночасно можна обстежувати до 12 пацієнтів.

2-3. Хід тіста:

а) розкопування сироваток пацієнтів (15 мкл);

б) інкубація (IgE пацієнта з'єднуються з алергенами);

в) додавання моноклональних антитіл проти IgE, мічених флуорохромом;

г) сканування мікрочіпа;

д) типова сканограмма мікрочіпа:

- перші три ряди=калібрувальна крива (інтенсивність світіння пропорційна кількості фіксованих IgE);

- далі - профіль сенсибілізації пацієнта (специфічність і кількість IgE в сироватці пацієнта).

Тести активації клітин алергенами (CAST) є сучасними методами діагностики ГНТ медиаторного типу, що не обу-словленная IgE (рис. 10).



Рис. 10.

Принцип постановки CAST / FAST

:

1 - стимуляція базофілів (IgE-залежна, за допомогою алергену; за допомогою анти-FceRI-антитіл; IgE-незалежна, за допомогою харчових добавок, нестероїдних протизапальних засобів (аспірин), лікарських препаратів); 2 - ідентифікація базофілів. Проводиться тільки для FAST, звичайно за допомогою мечі-них антитіл проти IgE або рецепторів до Хемокіни CCR3; 3 - облік реакції. CAST враховують за допомогою кількісного визначення лейкотрієнів (тифу). FAST - шляхом визначення відсотка активованих базофілів (експрессірующіх CD63) за допомогою цитофлуориметрії

Раніше подібну реактивність виявляли в тестах пошкодження лейкоцитів і стимуляції виділення гістаміну базофілами, однак вони занадто трудомісткі, погано відтворюються і не піддаються стандартизації. СAST / FAST ставиться в кілька стадій:

1. Виділення лейкоцитів крові:

а) до стабілізованою крові додають декстран для осадження еритроцитів;

б) надосадок центрифугируют для осадження лейкоцитів (видалення декстрану і тромбоцитів);

в) осад лейкоцитів ресуспендіруют в буферному розчині, що містить ІЛ3.

2. Стимуляція лейкоцитів:

а) з анти-FceRI-антитілами (позитивний контроль);

б) фізіологічним розчином (негативний контроль);

в) алергеном (ами) в різних концентраціях.

3. Супернатанти відбирають і негайно визначають зміст лейкотрієнів за допомогою твердофазного ІФА. Для кількісного визначення необхідно використовувати декілька розведень стандартів для побудови калібрувальної кривої.

  4. Інтерпретація тесту. Для харчових алергенів нижній (пороговий) рівень (cut off) зазвичай дорівнює 400 пг / мл; для харчових добавок, лікарських алергенів, аероаллергенов - близько 40 пг / мл.

  FAST відрізняється від CAST способом обліку активованих базофілів: виявлення і підрахунок відсотка клітин, що експресують CD63 і пов'язані IgE (рис. 11). Цікавлять нас клітини повинні мати свя-занние на поверхні IgE, тобто пов'язувати анти-IgE-антитіла, мічені FITC, і сильно світитися зеленим. Активовані гладкі клітини, крім цього, експресують CD63, пов'язують анти-CD63-антитіла, мічені РЕ, і світяться червоним. Таким чином, тест позитивний, якщо значний (> 5-15%) відсоток клітин (точки на графіку) виявляється у другому квадраті. В даний час існують комерційні набори для постановки комбінованих тестів (CAST і FAST в одній пробірці).

  Слід зазначити, що CAST / FAST виявляє виділення лейкотрієни-нов лейкоцитами як у зв'язку, так і без наявності алерген-специфічних IgE. Основні показання для застосування CAST / FAST: підозра на ГНТ по медіаторну типу і відсутність специфічних IgE; наявність гіперчутливості до харчових добавок і лікарських алергенів; діагностика аспириновой астми та подібних станів.
 CAST / FAST не рекомендуються як тести для первинного алергологічного обстеження (вони складніше, дорожче і поступаються стандартних тестів виявлення специфічних IgE (UniCAP і т. д.)).

 а б

  Рис. 11.

 Облік FAST

:

  а - негативний контроль; б - позитивний контроль. Позначення: PE - фікоеритрин (червоне свічення); FITC - флуоресцеїн (зелене свічення); Q1-4 - квадранти на графіку розподілу клітин (Q1 - сильне червоне свічення, слабке зелене; Q2 - сильне червоне і сильне зелене; Q3 - слабке червоне і слабке зелене; Q4 - слабке червоне і сильне зелене свічення)



  Методи, спрямовані на дослідження проаллергіческіх цитокінів і медіаторів імунного запалення.

  Визначення медіаторів та цитокінів в системному кровотоці (зазвичай методом твердофазного ІФА):

  1. Виявлення гістаміну утруднено вкрай високою швидкістю його інактивації (хвилини), тому для виявлення його наявності в системній циркуляції (анафілактичний шок) частіше застосовують визна-поділ метил-гістаміну в сечі (високий рівень зберігається кілька годин після зникнення проявів системної анафілаксії).

  2. Визначення триптази в сироватці крові. Тріптаза міститься в гранулах тучних клітин і тривало (кілька годин) зберігається в циркуляції.

  3. Визначення цитокінового статусу периферичної крові (ІЛ4, ІФН?, ІФН? / ІЛ4) дає вкрай загальне уявлення про харак-тере типу реагування імунної системи в момент проведення тесту. Було популярно в 80-і рр.. минулого століття. Пізніше - в 90-і рр.. модель Th1/Th2 поступилася місцем дослідженню ролі Т-регуляторів при алергії.

  4. Визначення вмісту клітин, що секретують ті чи інші цитокіни. В даний час є можливість визначення цих параметрів для аллергенспецифических клітин (технологія тетрамеров). Частіше для зазначених цілей застосовують проточну ци-тофлуоріметрію і еліспот.

  Визначення цитокінів і медіаторів в тканинах (дозволяє з'ясувати природу запалення, його інтенсивність, переважаючі ланки патогенезу):

  1. Визначення NO у видихуваному повітрі: простий неінвазивний тест, що дозволяє відстежувати інтенсивність запального процесу в дихальних шляхах (контроль лікування бронхіальної астми).

  2. Визначення медіаторів та цитокінів в змивах, ексудатах і другом отделяемом пошкоджених тканин.

  3. Визначення клітин, що синтезують цитокіни та медіатори на зрізах з біопсій пошкоджених тканин.

  4. Кількісне визначення мРНК цитокінів і медіаторів в змивах, соскобах і біопсійного матеріалі.

  Необхідно відзначити, що методи визначення цитокінів при алергічних процесах використовуються, в основному, для наукових цілей.

  Тести, що мають історичне значення

  Тест Шеллі / Шварца - дегрануляція базофілів / огрядних клітин у присутності специфічного алергену. Тест широко використовувався при лабораторній діагностиці алергічних захворювань ГНТ I типу.

  Непрямий базофільний тест (тест Шеллі). Цей тест заснований на вивченні морфологічних змін базофілів в результаті взаємодії сироватки хворого і специфічного алергену. Барвник нейтральний червоний вибірково забарвлює гранули базофілів в цегляно-червоний колір, що дозволяє відрізняти їх від інших клітин. Реакцію спостерігають під мікроскопом з імерсійною системою. Незмінені базофіли мають округлу форму; гранули, забарвлені фарбою, розташовуються усередині клітини. Позитивна реакція проявляється в деформації клітин, освіті псевдоподий, посиленому русі гранул і в рідкісних випадках - виходом гранул з клітки з розривом її. У кожному препараті налічують 40 базофілів, обчислюють відсоток морфологічно змінених клітин і в досвіді, і в контролі.

  Умовно виділяють 3 ступені реакції: слабку (відсоток змінених базофілів в досвіді перевищує такий в контролі на 10%), помірну (на 15%), різко позитивну (на 20% і більше). У всіх випадках маються на увазі результати контролю з найвищою НЕ-специфічною реакцією базофілів.

  Прямий базофільний тест (тест Шеллі). Даний тест заснований на вивченні морфологічних змін базофілів периферичної крові пацієнта з алергічним захворюванням при взаємодії зі специфічним алергеном. Оцінка реакції проводиться аналогічно оцінці при непрямому базофільними тесті.

  Реакція ушкодження гранулоцитів (РПГ), показник пошкодження нейтрофілів (ППН), реакція викиду з лейкоцитів калію, ферментів і т. д. Існує велика кількість методик в рамках зазначеного підходу. Наприклад, виділені лейкоцити инкубируются з розчином алергену протягом певного часу, після чого пошкодження нейтрофілів реєструється:

  - Морфологічно: по зміні морфології, шляхом фарбування трипановим синім, бромистим етидієм і т. д. (фарбуються пошкоджені / мертві клітини);

  - Фотометрически: приріст концентрації іонів калію визначають на полум'яному фотометрі, викид мієлопероксидази - по ферментації субстрату-хромогену і зміни кольору розчину - на планшетному фотометрі.

  Реакція вивільнення гістаміну з базофілів периферичної крові людини заснована на обліку вивільнення гістаміну після обробки базофільних клітин специфічними алергенами. Стимуляторами вивільнення гістаміну з клітин є алергени, анти-IgE, С5а. Ряд цитокінів - ІЛ-3, ІЛ-5, КСФ-ГМ - підсилюють вивільнення гістаміну базофілами. Тест використовувався з метою виявлення ступеня сенсибілізації організму in vitro при кропивниці, атопічному дерматиті і в експериментальних дослідженнях.

  Тести, не рекомендується для застосування та / або інтерпретації:

  1. Визначення IgG, в т. ч. IgG4 (за винятком випадків, коли це має значення).

  2. Кинезиология (метрія) - контакт (демонстрація) хворого з алергеном і одночасне вимірювання відносної м'язової сили. У разі виявлення причинного алергену сила зменшується. При виявленні специфічного антидоту - відновлюється.

  3. VEGA (електродермометрія, тест Фолля) - вимірювання опору шкіри (тканин) між акупунктурними точками при од-новременним контакті (демонстрації) з алергеном. Існують комерційні апарати і тест-системи.

  4. Аурікулокардіальний рефлекс - вимірювання параметрів кровонаповнення / пульсу і т. д. в момент контакту з алергією-ном.

  5. Тест провокації-нейтралізації: постановка шкірних або інших проб з поступовим збільшенням концентрації алергену до досягнення вираженої реакції. Таким чином знаходять роздільну концентрацію. Далі ставлять проби, поступово зменшуючи концентрацію алергену, до зникнення реакції. Ця концентрація може застосовуватися для специфічної десенсибілізації.

  6. Аналіз реакції крові: краплю крові змішують з розчинами алергенів / харчових продуктів і т. д. Через деякий час мікроскопічно вивчають зміни у дослідній краплі в порівнянні з контрольною.

  7. Іридодіагностика алергії.

  8. Діагностика алергії з порушення циркуляції різних містичних видів енергії людського тіла або духу. 
« Попередня
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "МЕТОДИ ДІАГНОСТИКИ IN VITRO"
  1.  Тема: бактеріологія, мікології, протозоологов
      Систематика і номенклатура мікроорганізмів. Об'єкти вивчення мікробіології. Прокаріоти (бактерії), їх відмінність від мікробів еукаріотів (найпростіші, гриби) за структурою, хімічним складом, функції. Сучасні підходи до систематики мікроорганізмів. Таксономічні категорії: царство, відділ, сімейство, рід, вид. Внутрішньовидові категорії: біовар, серовар, фаговар, морфовар, культивар.
  2.  . Нейрогуморальна регуляція і стан репродуктивної системи жіночого організму в період згасання її функції
      Статеве дозрівання і настання менопаузи представляють собою два критичних періоду в житті жінки. Перший з них характеризується активацією, другий - припиненням функції гонад. 169 Глава 1. Структура і функція репродуктивної системи у віковому аспекті Як формування, так і виключення циклічної функції гонад тягне за собою цілий ряд істотних змін в
  3.  Література
      Анашкина Г. А. Гормональні параметри овуляторного менструального циклу жінки в нормі і при деяких формах порушень репродуктивної функції: Автореф. дис. ... канд. мед. наук. - М., 1984. 2. Атлас скануючої електронної мікроскопії клітин, тканин і органів / За ред. О. В. Волкової, В. А. Шахламова, А. А. Миронова. - М.: Медицина, 1987. - С. 385-435. 3. Бабічев В. Н. Нейрогормональная
  4.  Синдром полікістозних яєчників
      Визначення поняття. СПКЯ являє собою клінічний симптомокомплекс, який об'єднує гетерогенні ознаки і симптоми, які свідчать про порушення з боку репродуктивного 389 Глава 4. Патологія репродуктивної системи в період зрілості ної, ендокринної та метаболічної функції організму жінки. Основними клінічними проявами його є оліго-або аменорея і безпліддя на
  5.  Лейоміома матки
      Визначення поняття. Лейоміома матки (ЛМ) - одна з найбільш часто зустрічаються доброякісних пухлин репродуктивної системи жінки. Пухлина має мезенхімального походження і утворюється з мезенхіми статевого горбка, навколишнього зачатки Мюллерова проток (рис. 4.8). Мезенхіма є попередником примітивного міобласти, індиферентних клітин строми ендометрію і різних клітинних
  6.  Генітальний ендометріоз
      Визначення поняття. Поняття ендометріоз включає наявність ендометріоподобние розростань, що розвиваються поза межами звичайної локалізації ендометрію - на вагінальної частини шийки матки, в товщі м'язового шару матки і на її поверхні, на яєчниках, тазовій очеревині, крижово-маткових зв'язках і т.п. У зв'язку з тим що анатомічно і морфологічно ці гетеротипії не завжди ідентичні слизової
  7.  Література
      Аблакулова В. С. Поліпи ендометрія / / Акуш. , гін. - 1987. - № 7. - С. 7-10. 2. Адамян Л. В., Кулаков В. І. ендометріоз. - М.: Медицина, 1998. -317 С. 3. Алієва Е. А., Пшеничникова Т. Я., Гаспаров А. С. Результати лапароскопії у пацієнток з синдромом полікістозних яєчників, які перенесли хірургічні методи лікування / / Акуш. , гін. - 1996. - № 7. - С. 63-66. 610 Література 4.
  8.  СУЧАСНА КОНЦЕПЦІЯ Нейроендокринної регуляції Менструального циклу
      Проблема репродуктивного здоров'я людини набуває в по-останню роки все більшого значення і стає проблемою медико-соціальної. При вирішенні питань регуляції народжуваності розглядаються дві абсолютно протилежні ситуації: з одного боку - значна частина населення планети потребує надійних і сучасних засобах контрацепції, з іншого - мільйонам подружніх пар вимагається
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...