загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Лабораторна діагностика

«Золотим стандартом» є виділення збудника. Слід пам'ятати, що матеріал необхідно досліджувати швидко, тому що бактерії схильні до швидкого аутолизу, зумовленого активністю внутрішньоклітинних ферментів. Матеріалом для дослідження є мокротиння, плевральний випіт та інші ексудати, спинномозкова рідина, кров, слиз з носа і зіву, відокремлюване очних виразок, виділення з вуха, сеча, шматочки органів (у разі смерті хворого). Сигнальний відповідь на пневмококової інфекцію може бути виданий при виявленні в мазках з мокротиння нейтрофілів і грампозитивних ланцетовідних диплококів (не менше 10 в полі зору). В іншому випадку вдаються до виділення збудника.

Перший етап дослідження. Патологічний матеріал піддають попередній бактеріоскопії (крім крові). Мокроту поміщають в стерильну чашку Петрі, відмивають, петлею захоплюють гнійно-слизовий грудочку, розтирають на предметному склі, висушують і фарбують за Грамом. У мазку виявляють грампозитивні ланцетовидной або овальної форми коки, оточені капсулою (капсулоутворення спостерігається тільки у пневмококів, виділених від хворих і заражених тварин). Виявлення капсул пневмококів можна проводити за методом Буррі-Гінса. Посів патологічного матеріалу роблять на 5-10% кров'яний або сироватковий агар і на середу збагачення (8-10% сироватковий бульйон). При підозрі на сепсис пневмококової природи 5-10 мл крові хворого засівають на 45-90 мл сироваткового бульйону. Спинно-мозкову рідину, якщо вона прозора, центрифугують і кілька крапель з осаду засівають на поживні середовища. Як середовище збагачення використовують напіврідкий сироватковий агар. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години. Кращим методом виділення чистої культури пневмококів є зараження білих мишей патологічним матеріалом. Мокроту, відмиту в чашці Петрі стерильним фізіологічним розчином, розтирають у стерильній ступці стерильним товкачем або битим склом при додаванні фізіологічного розчину відносно 1:2-1:5. Взвесь відстоюють, супернатант в кількості 0,5-1 мл вводять білим мишам внутрішньоочеревинно. При наявності в матеріалі пневмококів миші гинуть протягом 72 годин. У мазках з органів і крові виявляють типові пневмококи. Також проводять посів органів і крові на сироватковий бульйон і на чашки Петрі з кров'яним або сироватковим агаром.

Другий етап дослідження. Вивчають характер росту на живильних середовищах. На кров'яному агарі колонії пневмококів дрібні, круглі, з рівними

краями, ніжні, оточені зоною позеленіння середовища (що дуже нагадує зростання зеленящіх стрептококів). На сироватковому агарі колонії ніжні, напівпрозорі і прозорі. При бактеріоскопії мазків, забарвлених за Грамом. виявляють грампозитивні диплококи без капсул. Після бактеріоскопії колонії, підозрілі на пневмококи пересівати на скошений сироватковий або кров'яний агар або на сироватковий бульйон. При мікроскопії мазків з середи збагачення поряд з різною мікрофлорою можна виявити грампозитивні коки, що розташовуються парами або короткими ланцюжками. Матеріал з середи збагачення пересівати на щільні живильні середовища. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години.

Третій етап дослідження. Па скошеному кров'яному агарі пневмококи утворюють ніжний тонкий напівпрозорий наліт. На сироватковому бульйоні пневмококи викликають помутніння і легкий осад. У мазках з щільних поживних середовищ пневмококи можуть мати різний вигляд. Поряд з диплококами подовженої форми з загостреними зовнішніми кінцями, що нагадують полум'я свічки, зустрічають клітини правильної овальної і круглої форми. У бульонной культурі пневмококи часто розташовуються ланцюжками. Па підставі морфологічних і культуральних властивостей пневмококи важко відрізнити від зеленящіх стрептококів, тому для їх диференціювання запропонований набір спеціальних тестів:

- розчинність в жовчі (дезоксіхолатная проба);

- здатність розкладати інулін;

- чутливість до оптохіну;

- реакція аглютинації зі специфічними антипневмококовими сироватками;

- здатність розкладати глюкозу, мальтозу , сахарозу, лактозу, маніт, сорбіт і салицин.

Найбільш доступними методами, диференціюючими пневмококи від інших стрептококів є проба з оптохіном (пригнічує їх ріст); від зеленящіх стрептококів їх відрізняє здатність ферментувати інулін, а також чутливість до жовчі.

Дезоксіхолатная проба. Після попередньої бактеріоскопії в пробірку з 5 краплями стерильною бичачої жовчі вносять 10 крапель, виділеної чистої культури (краще бульонной). Контролем служить культура, внесена в пробірку з 5 краплями фізіологічного розчину. Через 30-60 хвилин інкубації при 37 ° С спостерігають повний лізис культури у вигляді просвітлення в пробірці з жовчю, у контрольній пробірці суміш залишається каламутною. Слід пам'ятати, що авірулентние культури пневмокока стійкі до жовчі.

Стійкість до жовчі також можна перевіряти посівом у 10% жовчний бульйон. У середу вносять досліджуваний матеріал, при цьому бульйон каламутніє. Після 24 годинної інкубації при 37 ° С на наявність пневмококів вкаже просвітлення бульйону в результаті лізису бактерій.

Також можна використовувати диски, просочені 20% розчином жовчі. Диски завадять на що виросла культуру в чашці і інкубують 1-2 години при 37 ° С. При наявності пневмококів колонії лизируются навколо диска на відстані 1 -2 мм.
трусы женские хлопок


Проба на інулін. Культуру пневмокока засівають на середу з інулін. Для цього до 100 мл прогрітій при 56 ° С протягом 30 хв бичачої сироватки додають 200 мл стерильної дистильованої води, 18 мл лакмусовим настоянки і 3 г інуліну, стерилізують текучою парою 30 хвилин. Посіви інкубують при 37 ° С 24 години. Пневмокок розкладає інулін, в результаті чого середу червоніє. Зеленящий стрептокок не викликає почервоніння середовища.

Проба з оптохіном. Випробувану культуру пневмокока засівають на сироватковий бульйон з оптохіном в розведенні 1:100000 або 1:200000. Пневмокок на такому середовищі не росте. Також можна визначити чутливість до оптохіну і посівом на 10% кров'яний агар, що містить оптохін в розведенні 1:50000. Контролем є посів культури на кров'яний агар. Пневмококи не ростуть на середовищі з оптохіном, на контрольному середовищі спостерігається зростання пневмококів. Можна використовувати диски, просочені 6 мкг оптохіна, які накладають після посіву на поверхню середовища. У пневмококів навколо диска утворюється зона затримки росту не менше 18 мм діаметром.

Проба на вірулентність. Добову культуру пневмокока, вирощену на сироватковому бульйоні розводять 1% стерильною пептонною водою (рН - 7,6) або слаболужним бульйоном до 1:10. Розведену культуру вводять внутрішньочеревно білим мишам вагою 16-20 гр в обсязі 0,5 мл і спостерігають протягом 72 годин. З органів загиблої миші роблять висів на живильні середовища і мікроскопіруют мазки-отпечаткі.К високовірулентних культурам відносять пневмококи, що викликають загибель мишей після введення культури в розведенні 1:10. Авірулентние культури не викликають загибелі мишей.

Серотіпірованіе пневмококів. 18-годинну культуру перевіряють в реакції мікроаглютинації по Себіна. На предметне скло наносять 4 краплі культури пневмокока. До 1 краплі додають краплю антіпневмококковой сироватки типу 1, до 2-ї - сироватку типу II, до 3-й - сироватку - 111, до 4-й - краплю нормальної сироватки. Суміші на склі перемішують петлею і розглядають під лупою або під мікроскопом при малому збільшенні. У позитивному випадку в однієї з перших трьох крапель спостерігається аглютинація. Тип пневмокока визначають у реакції аглютинації зі специфічними аглютинативна сироватками перших трьох фіксованих типів. Культури, що не агглютинируются зазначеними типами сироваток, відносять до Х-групі. Реакцію ставлять таким чином. Розливають 18 - годинну бульйонну культуру по 0,5 мл у пробірки. Потім вносять в рівному обсязі сироватки, розведені фізіологічним розчином у співвідношенні 1:5. Контролями служать 2 пробірки, одна з яких містить випробувану культуру в суміші з

нормальної кролячої сироваткою, а інша - тільки досліджувану культуру. Вміст пробірок ретельно струшують і ставлять на 2 години в термостат при температурі 37 ° С, після чого проводять попередній облік реакції. Остаточні результати відзначають після додаткового витримування при кімнатній температурі протягом 20 годин. Аглютинацію оцінюють на чотири плюса, якщо вміст пробірок повністю прояснюється, а агглютінаціонние культура являє собою щільну плівку, не розбивати при струшуванні; на три плюса якщо при повному просвітління вмісту пробірки агглютинируют культура легко розбивається на частини; на два плюси - якщо просвітління не настає, в каламутному вмісті пробірки добре видно неозброєним оком частинки агглютінірованних культури; при аглютинації на один плюс в пробірці виявляють дрібнозернисту суміш склеєних пневмококів. При негативній реакції, видимої оком, аглютинації не спостерігають;

вміст пробірок після струшування являє собою рівномірну каламуть.

Типування пневмококів Х-групи проводять за допомогою групових сироваток, що містять суміш типових агглютинирующих сироваток, взятих у рівних обсягах. Готують наступні групові сироватки шляхом змішування рівних об'ємів нерозведених типових діагностичних сироваток (Lund, I960):

А -1, II, IV, V, XVIII серовар;

В - VI, VIII, XIX серовар;

С - VII, XX. XXIV, XXXI, XL серовар;

D - IX, XI, XVI, XXXVI. XXXVII серовар;

Е - X, XXI. XXXIII, XXXIX серовар;

F - XII. XVII. XXII, XXXVII, XXXII, XLI серовар;

G - XIII, XXV. XXIX, XXXIV, XXXV, XXXVIII, XLII, XLVII серовар;

J - XLIII. XLIV, XLV, XLVI серовар.

Агглютинируют сироватку III типу використовують per se (без змішування з іншими типовими сироватками) через труднощі її отримання в досить високому титрі. Типування проводять у два прийоми: спочатку за допомогою групових сироваток, а потім з індивідуальними сироватками тієї групи, з якою була отримана позитивна реакція. Серотіпірованіе пневмококів застосовують переважно для епідеміологічних досліджень результатів специфічної серотерапії і серопрофилактики.

Мікроаглютинації пневмококів за методом Себіна можна отримати при змішуванні антіпневмококкових сироваток з ексудатом з черевної порожнини миші, зараженої мокротою хворого. Вже через чотири години після зараження в ексудаті виявляють чисту культуру пневмококів, що дає позитивну агглютинацию по Себіна.

Прискорені методи виявлення та типування пневмококів. 1. Метод Нойфельд або феномен набухання капсули пневмокока. По одному грудочки свежевиделенних мокротиння хворого наносять на три

покривних скла, до кожного з них додають краплю нерозведеною специфічної антіпневмококковой сироватки (1, II, III типів) і краплю синьки Леффлера.
Краплі ретельно змішують, покривають предметним склом з лункою, змащеній по краях вазеліном. Через дві хвилини розглядають висячі краплі під мікроскопом з імерсійною системою. При позитивному випадку видно різке збільшення капсул пневмококів. При негативному результаті капсули ледь заповітна. Реакція набухання специфічна і не дає позитивного результату з іншими капсульними бактеріями. Її не застосовую г для дослідження мокротиння від хворих, які лікувалися сульфаніламідами та антибіотиками, тому що в цьому випадку можуть виділятися безкапсульние пневмококи.

2. Метод преципітації. 5-10 мл мокротиння кип'ятять у водяній бані до отримання щільного згустку. Згусток розтирають і додають невелику кількість фізіологічного розчину, знову кип'ятять кілька хвилин для добування специфічного полісахариду з пневмококів. Взвесь центрифугируют, з отриманої прозорою рідиною і специфічними типовими сироватками в преціпітаціонних пробірках ставлять реакцію кольцепреціпітаціі. Поява кільця на кордоні дотику рідин вказує на позитивний результат.

3. Визначення капсул пневмококів за Бурі. На кінець предметного скла наносять краплю досліджуваного матеріалу і краплю туші. Суміш перемішують і роблять мазок, висушують на повітрі і, не фіксуючи, мікроскопіруют. Фон препарату - темно-димчастий, мікробні тіла та їх капсули не фарбується. Препарат, виготовлений за Бурі, можна зафіксувати сумішшю Никифорова, промити водою, забарвити фуксином Циля, розведеним 1:3 протягом 3-5 хвилин. На темному тлі мазка виділяються незабарвлені капсули, усередині яких знаходяться бактерії яскраво малинового кольору (метод Гінса).

Мотивуюча характеристика теми: пневмокок один з основних збудників бактеріальних пневмоній. У разі генералізації інфекції мікроорганізм може гематогенно дисемінований у внутрішні органи і викликати менінгіти, ендокардити, отити, суглобові ураження і т. д. Знання правил діагностики та лікування захворювань, викликаних цими мікроорганізмами, необхідно для студентів усіх факультетів.

Студент повинен знати: правила забору матеріалу при інфекціях, викликаних даними мікроорганізмами, препарати для лікування і профілактики захворювань.

Студент повинен вміти:

- фарбувати препарати за Грамом, Бурі-Гінсу і простим методом (фуксином);

- диференціювати мікроби за морфологічними ознаками при мікроскопії;

  - Проводити виділення чистої культури мікроорганізму і ідентифікувати його за морфологічними, культуральними, біохімічними та антигенними властивостями.

  Студент повинен мати навички:

  - Дотримання правил протиепідеміологічного режиму і техніки безпеки в бактеріологічній лабораторії;

  - Знезараження інфікованого матеріалу, антисептичної обробки рук, контамінованих досліджуваним матеріалом, культурами мікроорганізмів;

  - Стерилізації петлі прокаливанием;

  - Приготування мікроскопічних препаратів з чистих культур мікробів;

  - Мікроскопії з імерсійною системою;

  - Посіву досліджуваного матеріалу петлею, шпателем на щільні і рідкі поживні середовища;

  - Видачі результатів дослідження;

  - Читання і оцінки результатів мікробіологічних досліджень. Оснащення занять:

  1. Таблиці з лабораторної діагностики пневмококової інфекції.

  2. Бланки направлення на аналіз.

  3. Препарати для лікування пневмококової інфекції: пеніцилін, левоміцетин, рифампіцин, вінкоміцін, цефтріксон.

  4. Предметні скла для приготування мазків і набір фарб для фарбування по Граму і Бурі-Гінсу. Навчальна карта заняття;

  1. Вивчити схему лабораторної діагностики пневмококової інфекції по таблиці.

  2. Вивчити під мікроскопом мікропрепарати пневмококів, забарвлені по Граму і методу Бурі-Гінсу.

  3. Навчитися писати направлення на дослідження матеріалу від хворого.

  4. Заповнити бланк видачі відповіді.

  5. Розібрати діагностичні та лікувальні препарати, що застосовуються при пневмококової інфекції.

  6. Вивчити склад і правила застосування пневмококової вакцини. Питання для самопідготовки та самоконтролю:

  1. Яка морфологія пневмококів?

  2. Які їх культуральні та біохімічні властивості?

  3. Як можна створити капнофільние умови культивування пневмококів?

  4. Який матеріал береться при підозрі на захворювання, викликані пневмококами?

  5. Як проводиться бактеріоскопічне дослідження і які методи забарвлення використовують при підозрі на пневмококової інфекцію?

  6. Як проводять бактеріологічне дослідження?

  7. Як ставиться реакція "набухання капсули"?

  5. Як проводиться бактеріоскопічне дослідження і які методи забарвлення використовують при підозрі на пневмококової інфекцію?

  6. Як проводять бактеріологічне дослідження?

  7. Як ставиться реакція "набухання капсули"?

  8. Які препарати використовуються для лікування та профілактики пневмококової інфекції? 
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Лабораторна діагностика"
  1.  КЛІНІКА
      Основними симптомами хронічного коліту є: 1. Порушення стільця (нестійкі випорожнення, запори, проноси). 2. Здуття, бурчання, переливання в животі. 3. Болі (спастичного характеру, іноді тупі, ниючі, в нижній половині живота і в області фланки, рідше - в лівому підребер'ї); можливі тенезми, пов'язані з дисфункцією анального сфінктера. Розлад стільця обумовлено порушеннями
  2.  СИНДРОМ дисемінованоговнутрішньосудинного згортання КРОВІ
      ЕТІОЛОГІЯ Важкі форми гестозів, передчасне відшарування нормально розташованої плаценти, геморагічний шок, емболія навколоплідними водами, сепсис, захворювання серцево-судинної системи, нирок, печінки, резус-конфлікт, переливання несумісної крові, розвивається вагітність та ін Вище перераховані стану призводять до гіпоксії тканин і метаболічного ацидозу, що в свою чергу
  3.  ЗАПАЛЬНІ ЗАХВОРЮВАННЯ ВЕРХНЬОГО ВІДДІЛУ ЖІНОЧИХ СТАТЕВИХ ОРГАНІВ.
      Гострий сальпінгоофорит (на першому місці за частотою). Інфекційний процес переходить на яєчник під час овуляції, коли після виходу яйцеклітини оголена ранова поверхню, тобто вхідні ворота для інфекції. Клініка: біль різного характеру і ступеня вираженості внизу живота, процес, як правило, двосторонній. Симптоми інтоксикації (лихоманка, озноб, слабкість, нездужання і т.д.).
  4.  1. Пояснювальна записка
      При проміжної атестації оцінюється система знань, умінь і навичок у студентів. Оцінка знань, умінь і навичок проводиться на основі загальноприйнятих у вищій школі вимог з урахуванням специфіки викладання медичної мікробіології, вірусології та імунології, які навчаються за спеціальністю лікувальна справа. Студент повинен знати: 1) структуру і функції мікроорганізмів; 2)
  5.  Тема: Історія розвитку мікробіології
      Етапи розвитку мікробіології: евристичний, морфологічний, фізіологічний, імунологічний, молекулярно-генетичний. Винахід мікроскопа і відкриття мікроорганізмів (А.Левенгук та ін.) Відкриття перших патогенних мікроорганізмів - збудників фавуса і сибірської виразки. Пастерівський період у розвитку мікробіології (друга половина XIX століття). Роботи Л.Пастера і його школи. Їх значення
  6.  Тема: бактеріологія, мікології, протозоологов
      Систематика і номенклатура мікроорганізмів. Об'єкти вивчення мікробіології. Прокаріоти (бактерії), їх відмінність від мікробів еукаріотів (найпростіші, гриби) за структурою, хімічним складом, функції. Сучасні підходи до систематики мікроорганізмів. Таксономічні категорії: царство, відділ, сімейство, рід, вид. Внутрішньовидові категорії: біовар, серовар, фаговар, морфовар, культивар.
  7.  Вірусології
      Тема: Історія розвитку вчення про віруси Основні етапи розвитку вірусології. Відкриття Д.І. Ивановским вірусів, значення цього відкриття для біології та медицини. Визначення значення вірусів в патології людини і тварин. Обгрунтування методів культивування вірусів (в лабораторних тварин, курячих ембріонах, культурах клітин). Вивчення морфології з використанням електронного мікроскопа.
  8.  ПРИВАТНА МЕДИЧНА МІКРОБІОЛОГІЯ
      Визначення, цілі, завдання та методи приватної медичної мікробіології. Тема: Бактерії - збудники інфекційних хвороб 1.1. Грампозитивні коки Еволюція кокковой групи бактерій. Їх загальна характеристика. 1.1.1. Стафілококи. Таксономія. Біологічні властивості. Характеристика токсинів і ферментів патогенності. Патогенез стафілококових інфекцій, їх роль в госпітальних
  9.  Тема: патогенні гриби
      Патогенні гриби. Систематика. Екологія. Біологічні властивості. Резистентність. Фактори патогенності, токсини. Чутливість до антибіотиків. 2.1. Дріжджоподібні гриби роду Кандіда. Морфологічні та культуральні властивості. Патогенез для людини. Фактори, що сприяють виникненню кандидозу (дисбактеріоз та ін.) Лабораторна діагностика. Антимікробні препарати.
  10.  Тема: патогенних найпростіших
      Патогенні найпростіші. Систематика. Екологія. Біологічні властивості. 3.1. Плазмодії малярії. Морфологія. Цикли розвитку. Патогенез малярії, імунітет. Лабораторна діагностика. Антимікробні препарати. Профілактика. 3.2. Токсоплазми. Лямблії, лейшмании, тріпаносоми, трихомонади, амеби, балантидії. Морфологія і культивування. Патогенез. Лабораторна діагностика. Антимікробні
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...