загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Лабораторна діагностика сифілісу

Видимість блідих трепонем в біологічному матеріалі.

А) Темнопольна мікроскопія.

Найбільш переконливим доказом трепонемной природи захворювання є пряма візуалізація трепонем. При первинному сифілісі на бліду трепонем досліджують відділення ерозивно-виразкових папулезних елементів в області статевих органів, порожнини рота, в пунктаті з регіонарних лімфатичних вузлів. При вторинному сифілісі використовується матеріал з різних уражень шкіри і слизових оболонок. Для діагностики вродженого сифілісу може бути використана амніотична рідина. При мікроскопічному дослідженні блідітрепонеми мають вигляд тонкої спіралі з 8 -12 рівномірними завитками. У темному полі зору можна спостерігати поступальний обертання трепонеми навколо осі, ротаційне і згинальні. Важливою ознакою є злам в середній частині ("пригладжений праскою"), що відрізняє збудника сифілісу від інших трепонем. При негативних результатах мікроскопічне дослідження повторюють або до виявлення блідої трепонеми, або до підтвердження діагнозу результатами серологічного дослідження. Виявлення специфічних мікроорганізмів з характерною морфологією, рухливістю і антигенної специфічністю дозволяє поставити діагноз сифілісу при первинному, вторинному, ранньому природженому, рецидивний сифіліс навіть без урахування результатів серологічних тестів. Слід враховувати, що відсутність мікроорганізмів ще не виключає діагноз сифілісу. Відсутність трепонем в типових осередках ураження може бути обумовлена ??тривалістю існування вогнища, попередніми лікуванням пацієнта або поганою технікою взяття зразка або перегляду матеріалу. За відсутності збудників в осередку ураження слід виключити можливість інших захворювань (герпес, м'який шанкр).

Б) Полімеразна ланцюгова реакція.

Застосовується для визначення специфічних послідовностей ДНК. Метод полягає в багаторазовому збільшенні (ампліфікації) кількості ДНК диагностируемого мікроорганізму. Розробка варіантів ПЛР для діагностики сифілісу обумовлюється недостатністю стандартних тестів при ранньому серонегативном, природженому сифілісі і нейросифилисе. Виявлення T. pallidum за допомогою ПЛР значно полегшується вираженим генетичним консерватизмом і практичною відсутністю рекомбінацій навіть між підвидами. Великою перевагою ПЛР є можливість автоматизації реакції шляхом заданого циклічного температурного режиму. Застосування ПЛР може мати велике значення при діагностиці вродженого сифілісу (пасивний трансплацентарний перенесення антитіл не впливає на результати тесту), нейросифилиса (чутливість існуючих тестів близько 50%), первинного серонегативного (в даний час одним з критеріїв є пряме мікроскопічне виявлення трепонем), а також при діагностиці сифілісу у ВІЛ-інфікованих.

2. Нертрепонемние тести.

Нетрепонемних тести визначають антитіла класу IgG і IgM до ліпідів (фосфоліпідів), ліпопротеїдів, що вивільняються з ушкоджених клітин господаря, внаслідок сифілітичної інфекції та липидам, що входять до складу мембрани блідої трепонеми. Антіліпідное антитіла можуть з'являтися не тільки внаслідок сифілісу чи інших трепанематозов, але і у відповідь на деякі гострі та хронічні захворювання, при яких спостерігається руйнування тканин. Антіліпідное антитіла (реагіни) утворюються через 7-14 днів після утворення шанкра або через 4-5 тижнів після інфікування. В основному нетрепонемні тести застосовуються в двох випадках:

- нетрепонемних тести, у зв'язку з дешевизною, доступністю простотою і швидким терміном виконання, застосовуються для скринінгу сифілісу як відбіркові реакції.

- По зміні кількісних нетрепонемних тестів судять про ступінь ефективності лікування сифілісу і встановлюють його излеченность. Тому нетрепонемні тести застосовуються в комбінації з Трепонемні тестами для установки діагнозу сифілісу і проводяться до початку лікування, в процесі лікування і після закінчення лікування в певні часові інтервали.

Недоліки нетрепонемних тестів:

1) Хибнонегативні результати - при дослідженні нерозведених зразків сироватки, що містять велику кількість антитіл, за рахунок так званого феномена Прозона. Це явище може спостерігатися на ранніх стадіях сифілісу і у пацієнтів з супутньою ВІЛ-інфекцією.

2) Недостатня чутливість для діагностики пізній стадії сифілісу

3) Псевдопозитивні результати (біологічні хибнопозитивні реакції) при наявності інших гострих або хронічних захворювань.

А) Тест швидких плазмових реагинов (RPR).

RPR (Rapid Plasma Reagins) - тест швидких плазмових реагинов і його автоматизована модифікація - автоматизований реагиновий тест (ART, Automated Reagin Test). Ці тести можуть зчитуватися візуально через наявність забарвлених речовин в приготованому антигене. Тест RPR був розроблений для польових умов і зараз це найбільш поширений нетрепонемних тест. Він проводиться на пластикових планшетка з вкарбуємо кружечками. При постановці кількісної або якісної модифікацій реакції стандартні кількості нерозведеною сироватки або її серійних розведень змішуються з антигеном, змістом частинки вугілля. Планшету з антигеном і сироваткою обертають при 1000 об / хв протягом 8 хв. Антиген не прикріпляються до цих часток, але за наявності в сироватці антикардіоліпінові антитіл відбувається флоккуляции комплексів антиген-антитіло, частки вугілля як би потрапляють у пастку в утворену мережу і коагулюють. Результати тесту читаються у вологому місці при яскравому тесті негайно після проведення реакції. У тесті використовується непрогріта сироватка.

Б) VDRL-тест.

VDRL (за назвою лабораторії-розробника - Venereal Disease Research Laboratory). У даному тесті свіжоприготований антиген і інактивована сироватка змішуються у скляній лунці механічним обертанням. Якщо в сироватці присутні антитіла до Кардіоліпінові антигену, утворюються агрегати у вигляді коротких стержневідной структур, які виявляються мікроскопічно. Використовується кількісна модифікація VDRL до розведень сироватки 1:64. VDRL є єдиним тестом, рекомендованим для дослідження спинномозкової рідини.

В) Реакція зв'язування комплементу (РСК, реакція Вассермана).

Реакція Вассермана заснована на феномені зв'язування комплементу. У постановці реакції використовують як специфічні антигени з блідих трепонем, так і неспецифічні антигени (кардіоліпіновий - екстракт з м'яза бичачого серця). Ступінь позитивності реакції Вассермана оцінюють числом плюсів: + + + + (різко позитивна) + + + (позитивна) + + (слабоположітельная) + (сумнівна) - (негативна) Реакція Вассермана обов'язково застосовується в комплексі з двома осадовими реакціями (Кана і Закс- Вітебського). Імунологічна сутність цих реакцій не відрізняється від РВ, але для них готують більш концентровані антигени, які при взаємодії з реагинами сироватки дають видимий осад, оцінюваний якісно (+ + + +, + + +, + +, +, -). Діагноз первинного серонегативного сифілісу ставлять тільки при негативних стандартних серологічних реакціях. Реакція Вассермана (РВ) стає позитивною у 100% хворих у вторинному сіропозитивному періоді сифілісу. При третинному активному сифілісі - у 65-70% пацієнтів. При пізніх формах сифілісу внутрішніх органів і нервової системи - у 50-80% хворих. У хворих раннім вродженим сифілісом серологічні реакції позитивні майже в 100% випадків. При пізньому вродженому сифілісі - в 75-80% випадків.

3. Трепонемні тести.

Як і при нетрепонемних тестах при проведенні трепонемним тестів використовується імунологічна реакція антиген-антитіла. Але як антигенів застосовуються трепонемні антигени - або інтактні трепонеми, або очищені і ультраозвученние трепонеми, або рекомбінантні антигени. Для проведення та виявлення результатів реакції антиген-антитіла використовують більш складні і дорогі методи.

Трепонемні тести є підтверджуючими сифіліс тестами, проте в невеликому відсотку при їх проведенні можуть зустрічатися хибнопозитивні результати. Трепонемні тести застосовуються тільки для діагностики сифілісу і не використовуються для проведення контролю излеченности.

А) Реакція імунофлюоресценції (РІФ).

Принцип РИФ заснований на виявленні флуоресцентних антитіл, так як мічені флюорохромом антитіла не втрачають здатності з'єднуватися з відповідним антигеном і тим самим обумовлюють світіння препаратів в синьо-фіолетових променях ртутно-кварцової лампи. Відмінною рисою РИФ, порівняно зі стандартними серологічними реакціями, є більш висока чутливість (РІФ буває позитивною вже в первинному серонегативного періоді сифілісу) при високій специфічності. Відзначено цінність РИФ при виявленні хворих з прихованими і пізніми формами сифілісу при негативних результатах ІБТ. Реакція ставиться в декількох модифікаціях і найбільш цінною є РИФ-200, основним призначенням якої вважається не рання серодіагностика сифілісу, а розпізнавання неспецифічних результатів комплексу серологічних реакцій і серодіагностика прихованого сифілісу. Однак РИФ-200 не володіє абсолютною специфічністю, тому питання про наявність або відсутність заболенія має вирішуватися на сукупності клінічних та інших серологічних даних.

РИФ при вторинному сифілісі позитивна в 100% випадків. При третинному активному сифілісі РИФ позитивна у 92-100% пацієнтів. При пізніх формах сифілісу внутрішніх органів і нейросифилиса РИФ позитивна у 94-100% хворих. У хворих раннім і пізнім уродженим сифілісом РИФ позитивна в 100% випадків.

РИФ дуже повільно негатівіруются в процесі противосифилитической терапії. Внаслідок цього вона непридатна для контролю за ходом лікування.

Б) Реакція пасивної гемаглютинації (РПГА).

Гемагглютінаціонний тест для визначення специфічних антитіл до Treponema pallidum. У РПГА використовуються антигени з трепонем, тому він найбільш специфічний. Чутливість і специфічність еквівалентна РИФ-абс. РПГА дозволяє визначити наявність антитіл в зразках, які не реагують в реагінових тестах. Позитивний зразок, виявлений при скринінгу, можна кількісно оцінити при використанні реагентів TPHA-nosticon.

В) Імуноферментний аналіз (ІФА).

В основі методу ІФА лежить наступний принцип: на твердофазном носії (у вітчизняних тест-системах і в більшості тест-систем зарубіжного виробництва як носій використовується поверхню лунок полістиролових планшета) фіксується антиген збудника інфекції, антитіла до якому необхідно виявити. Антиген, іммобілізований на поверхні твердого носія, прийнято називати імуносорбент. Як правило, до складу набору тест-системи входить вже готовий імуносорбент.

У ході інкубації імуносорбенту з випробуваної сироваткою при наявності в ній антитіл до даного антигену відбувається їх зв'язування в комплекс "антиген-антитіло". Після видалення несвязавшихся імуноглобулінів слід інкубація з міченими ферментом антитілами до імуноглобулінів людини (кон'югатом), в ході якої на поверхні носія відбувається приєднання до наявних комплексам "антиген-антитіло" антитіл, мічених ферментом (в якості ферменту найчастіше використовується пероксидаза хрону). Після видалення незв'язаних кон'югату в ході інкубації з розчином субстрату відбувається взаємодія ферменту з субстратом, в результаті чого розвивається кольорова реакція, інтенсивність якої залежить від кількості пов'язаних сироваткових антитіл (у разі використання пероксидазного кон'югату як субстрат застосовують перекис водню в поєднанні з ортофенілендіамін (ОФД) , 5-аміносаліцилової кислотою (5-АСК) або тетраметілбензідіном (ТМБ)). Результат реакції оцінюється спектрофотометрически з виведенням цифрових даних, що виключає суб'єктивність оцінки. Деякі імуноферментні тест-системи допускають візуальну оцінку результатів, що може бути корисно при відсутності відповідного обладнання.

В даний час Міністерством охорони здоров'я Росії рекомендовані до застосування в медичній практиці 10 імуноферментних тест-систем для діагностики сифілісу вітчизняного виробництва:

1. "РекомбіБест антіпаллідум", ЗАТ "Вектор-Бест", п. Кольцово, Новосибірська обл.;

2. "РекомбіБест антіпаллідум - сумарні антитіла", ЗАТ "Вектор-Бест", п. Кольцово, Новосибірська обл.;

3. "ІФА-АНТИ-LUIS", НВО "Діагностичні системи", м. Нижній Новгород;

4. Тест-система імуноферментна для виявлення антитіл до збудника сифілісу (Treponema pallidum) на основі рекомбінантних білків, БТК "Біосервіс", м. Москва;

5. "ЛюісСкрін", ЗАТ "Ниармедик" і АЗОТ "Діаклон", м. Москва;

6. "Еколаб-антіпаллідум-скрін", ТОО "Еколаб", м Електрогорськ, Московська обл.;

7. "ІФА-анти-трепонема", ЗАТ "Вектор-Майстар", п. Кольцово, Новосибірська обл.;

8. "АТ-Треп.-ІФТС", ДП "Алерген", м. Ставрополь;

9. "Сиф-Ат-№ № 1,2", ТОО НДІ "Аквапаст", м. Санкт-Петербург;

10. "ІФАанті-СИФ", НПК "Препарат", м. Нижній Новгород.

Г) иммуноблотинга.

  Одним із сучасних методів діагностики сифілісу є іммуноблотінга (Western blot) для визначення IgG або IgM. При проведенні иммуноблотинга T. pallidum піддаються електрофорезу в градієнті концентрації додецилсульфата натрію, в результаті чого відбувається поділ білкових іммунодетермінант на нітроцелюлозі. Потім проводиться обробка розділених "точок" (blots) досліджуваної сироваткою і антитілами до IgG або IgM, міченими ферментами або радіоактивними речовинами. IgG - іммуноблотінга по чутливості і специфічності подібний РИФ з абсорбцією. Застосування анти-IgM специфічного кон'югату при проведенні иммуноблотинга може служити діагностичним тестом для вродженого сифілісу, більш чутливим в порівнянні з РИФ з абсорбцією.

  Д) Реакція іммобілізації блідих трепонем (ІБТ).

  РИБТ є діагностично цінною і визнана самим специфічним тестом на сифіліс. Проте її застосування обмежується через дорожнечу досліджень і складності проведення реакції. Постановка РІТ має особливе значення при діагностиці прихованого сифілісу, розпізнаванні уражень внутрішніх органів і нервової системи, при обстеженнях вагітних з підозрою на сифіліс. Суть реакції полягає у втраті рухливості блідими трепонемами у присутності иммобилизинов випробуваної сироватки та активного комплементу. Иммобилизинов з'являються в сироватці крові хворих пізніше, ніж інші антитіла, і РИБТ стає позитивною пізніше стандартних серореакций і РІФ. Оцінка результатів реакції проводиться за відсотком іммобілізації блідих трепонем:

  ? до 20% - негативна;

  ? 21 - 30% - сумнівна;

  ? 31 - 50% - слабоположітельная;

  ? 51 -100% - позитивна.

  У первинному періоді сифілісу РИБТ у більшості хворих негативна або слабоположітельная. При вторинному свіжому сифілісі РІТ дає позитивний результат більш ніж у половини хворих, однак, відсоток іммобілізації трепонем невисокий (40-60%). У вторинному рецидивному періоді сифілісу РІТ буває позитивною у 85-90% хворих при вираженому ступені іммобілізації (80-100%). При третинному сифілісі, при специфічних ураженнях внутрішніх органів, нервової системи, коли РВ часто негативна, РИБТ дає позитивні результати в 98-100% спостережень (з високим відсотком іммобілізації). У зв'язку з повільною Негативація в процесі противосифилитической терапії, РИБТ непридатна для контролю за ходом лікування. При ранньому природженому сифілісі РИБТ позитивна у 90-98% дітей, при пізньому вродженому сифілісі - майже у 100% хворих. Діагноз прихованого сіро-позитивного сифілісу ставиться тільки за позитивними серореакцій крові з обов'язковим підтвердженням їх ІБТ. 
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Лабораторна діагностика сифілісу"
  1.  СИФІЛІС
      Це хронічне системне інфекційне захворювання має найбільш тяжкі наслідки для організму не тільки самого пацієнта, але і його потомства. Препаратами вибору для лікування сифілісу є антибіотики групи пеніциліну. ПЕРВИННИЙ СИФІЛІС Вибір антимікробних препаратів Препарати вибору: бензатин бензилпеніцилін - по 2,4 млн ОД в / м 1 раз на 7 днів, на курс 2 ін'єкцій (при
  2.  Тема № 13 Сифіліс. ВІЛ-інфекція
      Мета - закріпити теоретичні знання з питань етіології, патогенезу, епідеміології, клініки і лікування сифілісу Сифіліс - антропофільнимі хронічні інфекційне венеричне захворювання, циклічний перебіг якого характеризується чергуванням періодів активних клінічних проявів і латентними. Назва хвороби «сифіліс» походить від імені пастуха Syphilus, міфологічного
  3.  Лабораторна діагностика сифілісу
      Для встановлення діагнозу сифілісу необхідною умовою є лабораторне підтвердження, що включає виявлення збудника і проведення серологічних реакцій. Для бактеріологічного дослідження на бліду трепонем береться тканинна рідина (серум), яку отримують методом подразнення ерозій або виразок в первинному періоді, мокли і ерозивних папул, ерозій слизових оболонок у вторинному
  4.  Реферат. Сифіліс, 2010
      Вступ: що таке сифіліс? Загальні принципи діагностики сифілісу. Лабораторна діагностика сифілісу. Як інтерпретувати тести на
  5.  Ревматоїдний артрит. ХВОРОБА БЕХТЕРЕВА
      Ревматологія як самостійна науково-практична дисципліна формувалася майже 80 років тому у зв'язку з необходімостио більш поглибленого вивчення хвороб цього профілю, викликаної їх широким розповсюдженням і стійкою непрацездатністю. У поняття "ревматичні хвороби" включають ревматизм, дифузні захворювання сполучної тканини, такі як системний червоний вовчак, системна
  6.  Цироз печінки
      Вперше термін цирози печінки був запропонований Т. Н. Laenec (1819), який застосував його в своїй класичній монографії, що містить опис патологічної картини і деяких клінічних особливостей хвороби. Відповідно до визначення ВООЗ (1978), під цирозом печінки слід розуміти дифузний процес, що характеризується фіброзом і перебудовою нормальної архітектоніки печінки, що приводить до
  7.  ЗАПАЛЬНІ ЗАХВОРЮВАННЯ ВЕРХНЬОГО ВІДДІЛУ ЖІНОЧИХ СТАТЕВИХ ОРГАНІВ.
      Гострий сальпінгоофорит (на першому місці за частотою). Інфекційний процес переходить на яєчник під час овуляції, коли після виходу яйцеклітини оголена ранова поверхню, тобто вхідні ворота для інфекції. Клініка: біль різного характеру і ступеня вираженості внизу живота, процес, як правило, двосторонній. Симптоми інтоксикації (лихоманка, озноб, слабкість, нездужання і т.д.).
  8.  Реферат на тему: АКУШЕРСЬКІ ДОСЛІДЖЕННЯ МЕТОДИ ОБСТЕЖЕННЯ ВАГІТНИХ І ПОРОДІЛЬ
      Мета заняття: вивчити і практично освоїти методи діагностики вагітності, обстеження вагітних, різні методи визначення терміну вагітності та пологів. Студент повинен знати: ознаки вагітності (сумнівні, ймовірні, достовірні), зміна величини матки в залежності від терміну вагітності, розміри великого таза, чотири прийоми зовнішнього акушерського дослідження, поняття "малий
  9.  Міокардити
      запальні захворювання серцевого м'яза інфекційної природи (інфекційно-токсичної), алергічної та інфекційно-алергічної природи. Етіологія: Виділяють інфекційні (інфекційно-токсичні) міокардити, пов'язані з вірусної, бактеріальної інфекцією, гнійно-септичними захворюваннями. Міокардити цієї групи можуть виникати при дифтерії, скарлатині, черевному тифі, туберкульозі.
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...