загрузка...
Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
« Попередня Наступна »

Криоконсервування еритроцитів

Загальні відомості

Цілісна кров при позитивних температурах ( +2 ... +6 ° С) може зберігатися протягом обмеженого періоду часу. При використанні розчину Глюгіцир втрата функціональної активності клітинами крові відбувається до кінця третього тижня зберігання в результаті виснаження вмісту ферментів і коферментів, відповідальних за підтримку метаболічних процесів. А за умови додавання метаболітів вуглеводно-фосфорного обміну строк збереження повноцінних еритроцитів подовжується до 30-35 днів. При цьому в міру збільшення терміну зберігання погіршуються морфофункціональні властивості еритроцитів. Тому був розроблений метод зберігання еритроцитів при ультранизьких температурах, що дозволяє зберігати клітини крові в біологічно повноцінному стані протягом багатьох років. Для запобігання загибелі або пошкодження клітин при заморожуванні до них у певних співвідношеннях додаються спеціальні хімічні агенти, так звані кріопротектори, або кріофілактікі, а сам метод отримав назву кріоконсервування.

Кріопротектор залежно від механізму огороджуючого дії на клітини ділять на дві групи:

ендоцеллюлярние (тобто проникаючі всередину клітини);

екзоцеллюлярние (тобто не проникаючі всередину клітини).

Кріопротектор першої групи є гліцерин. В силу того, що він швидко проникає в еритроцити, його широко застосовують для кріоконсервування еритроцитів. Механізм його захисної дії ще остаточно не вивчений, але вже зараз можна говорити про те, що гліцерин впливає на процеси як внутрішньоклітинної, так і позаклітинної кристалізації, віддаляючи і сповільнюючи її наступ в міру зниження температури. Він також надає структурирующее вплив на внутрішньоклітинну воду.

У гліцерину є один істотний недолік - він є гіперосмолярним речовиною по відношенню до плазми крові. Через це еритроцити, заморожені з ним, не можна відразу після відтавання переливати хворому або поміщати в будь-яку изотоническую середу, оскільки гліцер-нізірованних еритроцити починають притягувати на себе воду з плазми, швидко збільшуються в об'ємі, втрачають стійкість і руйнуються, тобто має місце так званий осмотичний шок, або осмотичний гемоліз. Тому кріоконсервовані в гліцерині еритроцити перед трансфузией хворому піддаються спеціальній обробці - відмиванню.

Методи заморожування еритроцитів

У клінічній практиці для консервування еритроцитів крові людини використовують два основні методи заморожування:

швидке - зі швидкістю охолодження кілька градусів в секунду,

повільне - зі швидкістю зниження температури кілька градусовв хвилину.

Є ще й третій метод заморожування - це так зване ультрашвидке заморожування. При цьому методі швидкість охолодження досягає 100 ° в секунду. Але він не отримав застосування в клінічній практиці через те, що досить великі обсяги крові (250-500 мл) заморожувати таким чином просто неможливо.

Тому більш детально зупинимося на основних методах заморожування еритроцитів.

Швидке заморожування еритроцитів

В даний час заморожування, зберігання і відмивання еритроцитів перед їх введенням хворому здійснюється у відділеннях довгострокового зберігання крові (банках крові), що розташовують для цього відповідною апаратурою і штатами.

Першим етапом є заготівля крові. Кров від донорів заготовляють у флакони ємністю 250 і 500 мл або в пластикові контейнери, що містять консервант. Як правило, заморожування піддається кров з терміном зберігання 2-3 дні. Кров пізніших строків зберігання, а також свіжу кров заморожувати не бажано.

Другим етапом є поділ рідкої і клітинної частин крові. Плазму відсмоктують і використовують для переливання або приготування препаратів крові. Еритроцити ж змішують з кріоконсервантом у співвідношенні 1:1. Зазвичай використовується консервант наступного складу: Маніт - 40 г; хлорид натрію - 7 г; Nа2НРО? 12Н2Про - 0,3 г; гліцерин (отн. пл. 1,248) - 300 мл; вода бідистильована до 1000 мл. Третій етап - змішування еритроцитів з кріофілакті-ком. Воно проводиться шляхом повільного додавання його у флакон або пластикатних контейнер з еритроцитами при постійному помішуванні. Це необхідно для поступового і рівномірного змішування гліцерину з еритроцитами. Додавання ж еритроцитів у кріоконсервант категорично не допускається, оскільки це веде до розвитку гемолізу.

На четвертому етапі еритроцити, змішані з Кріофени-лактики, поміщаються в спеціальні контейнери. Вони являють собою ємності з дюралюмінію об'ємом 250 мл. Їх особливістю є наявність гофрованих стінок. Така форма дозволяє збільшити поверхню зіткнення з навколишнім середовищем, а це в свою чергу дозволяє прискорити тепловідвід при заморожуванні і збільшити приплив тепла при відтаванні еритроцитів. Одна доза заморожених еритроцитів за об'ємом складає 125 мл.

Для герметизації контейнерів застосовуються спеціальні тефлонові ковпачки. Використання цього матеріалу виправдано тим, що він є інертним у хімічному відношенні, а так само тим, що при охолодженні його обсяг зменшується більшою мірою, ніж у дюралюмінію, і тим самим досягається повна герметизація контейнера. Це абсолютно необхідно, тому що якщо в негерметичний контейнер потрапить рідкий азот, то при розморожуванні різке збільшення обсягу газу в контейнері призведе просто-напросто до його вибуху.

Після змішування еритроцитів з огороджувальних розчином необхідно почекати не менше 15 хв і тільки після цього переходити до заморожування. Цей час потрібний для повного проникнення гліцерину в еритроцити. Якщо це буде менше необхідного, то більшість еритроцитів загине при заморожуванні-відтаванні. Однаково небажано і збільшення часу вичікування, оскільки це підвищує ймовірність прояву токсичних ефектів гліцерину відносно еритроцитів, які виникають при кімнатній температурі. В результаті цього більшість еритроцитів може бути пошкоджено або гемолізовані ще до початку процесу заморожування.

Герметизовані контейнери маркуються - на них пишеться номер, П.І.Б. донора, група крові за системою АВ0 і резус-фактору. Після цього даний контейнер реєструється у спеціальному журналі - всі дані з етикетки на флаконі крові, яка заморожується, переписуються в нього. Також в цьому журналі вказується дата заморожування.

П'ятий етап - власне заморожування. Цей процес здійснюється в спеціальній ємності, наповненою рідким азотом. При проведенні заморожування ємність постійно похитується. Весь процес охолодження від +20 ... +25 до -196 ° С займає близько 2 хв. Після закінчення заморожування ємність відкривається і контейнери з допомогою спеціальних щипців швидко переміщаються в посудину Дьюара, також містить рідкий азот. Ємність цієї судини складає 5 л. Після завершення заморожування всієї партії посудину Дьюара підносять до сховища біопродуктів і поміщають в нього контейнери з еритроцитами. Над кожним сховищем мається схема розташування контейнерів і в вільну комірку (куди поміщається контейнер) вписується олівцем його реєстраційний номер.

Процес розморожування відбувається наступним чином. Коли виникає необхідність у розморожуванні контейнера, його спеціальними щипцями витягують з осередку сховища біопродуктів, поміщають в посудину Дьюара з рідким азотом і підносять до ємності для розморожування. Вона являє собою металеву посудину, забезпечений елементами для нагрівання води та терморегулятором, який відключає елементи при досягненні температури +45 ° С. Ця ємність також забезпечена пристроєм для її постійного похитування. Відігрівання контейнерів від -196 до +4 ° С здійснюється за 23-25 ??с. Досягати вищої температури при відтаванні небажано через можливість наростання ступеня гемолізу.

Відмивання еритроцитів (дегліцерінізація)

Як вже говорилося вище, еритроцити, консервовані з гліцерином, не можна відразу ж після відтавання переливати в судинне русло. Попередньо необхідно провести їх дегліцерінізацію. Цей процес зводиться до відмивання відталих еритроцитів гіперонкотичних розчинами з понижающейся концентрацією. В результаті домагаються зниження рівня гліцерину в клітинах до 0,3-0,45%, що робить безпечним введення таких еритроцитів в судинне русло реципієнта.

Існує кілька методів проведення процесу відмивання еритроцитів:

оборотна цітоагломерація;

безперервне центрифугування на фракціонатора або сепараторах крові;

серійне центрифугування.

Найбільш часто в практиці використовується метод серійного центрифугування.

Технічно цей процес здійснюється наступним чином:

1. після відтавання еритроцити з контейнера відразу ж переміщують або в пластикатних контейнер, або в скляний флакон ємністю 500 мл;

2. в посудину додають 250 мл гіперосмолярних розчинів хлориду натрію або маніту (ці речовини не проникають у клітину на відміну від гліцерину);

3. посудину з цією сумішшю центрифугируют 15 хв при 1500 об. / хв або 10 хв при 2000 об. / хв при температурі +4 ° С;

4. надосадова рідина з посудини обережно відсмоктується;

5. до решти еритроцитам додається 400 мл другого відмивати розчину, який менш осмолярен, а центрифугування триває в колишньому режимі;

6. вдруге відсмоктується надосадова рідина;

7. до еритроцитів додається третій відмивати розчин, тонічность якого незначно перевищує фізіологічну, і центрифугування повторюється в колишньому режимі;

8. втретє відсмоктується надосадова рідина;

9. до решти еритроцитам додають який-небудь з плазмозамінних розчинів у співвідношенні 1:1.

Приготування однієї дози еритроцитів методом серійного центрифугування вимагає використання 1150 мл розчинів. Ресуспендування еритроцитів можна проводити на розчинах ЦОЛІПК-8в, гемодез, реополіглюкін, альбумине чи інших.

На флакон з суспензією кріоконсервованих еритроцитів наклеюється етикетка, на якій крім обов'язкових даних про донора, групу крові за системою АВ0 і резус-приналежності вказується термін зберігання еритроцитів, після якого переливання їх реципієнту вкрай не бажано.

Термін зберігання розморожених еритроцитів при температурі +4 ± 2 ° С коливається від 1 до 3 тижнів, але більшість авторів рекомендує використовувати їх протягом трьох перших діб.

Заморожування еритроцитів при помірно низьких температурах

Як вже говорилося раніше, для повільного заморожування еритроцитів використовують холодильники різної конструкції з різним обсягом замораживающей камери. Вони повинні задовольняти вимогу з підтримання температурного режиму в межах -40 ... -80 ° С. Для заморожування еритроцитів в холодильнику використовують пластикові контейнери ємністю 500 мл. Дана методика дозволяє довести кінцевий вміст гліцерину у розчині до 40%. Тому при додаванні огороджуючого розчину потрібно відома обережність з метою попередження осмотической травматизації еритроцитів. Кріоконсервант і еритроцити при змішуванні повинні бути кімнатної температури. Час вичікування (еквілібраціонний період) перед приміщенням контейнера в холодильник при використанні даної методики збільшується до 30 хв. Після цього контейнер в горизонтальному положенні поміщається в морозильну камеру.

Розморожування еритроцитів, заморожених за даною методикою здійснюється у водяній бані при температурі +37 ° С при постійному похитуванні. Весь процес відтавання триває 6-8 хв.

Враховуючи те, що концентрація гліцерину в суміші більш ніж в 2,5 рази перевищує таку при заморожуванні еритроцитів в рідкому азоті, процес дегліцерінізаціі носить більш складний характер.

Спочатку в контейнер додають 12% розчин хлориду натрію, а після центрифугування і відсмоктування надоса-дочной рідини відмивання проводиться ще тричі 1,6% розчинами хлориду натрію з додаванням буфера. Відмиті таким чином еритроцити ресуспендіруют в рівному обсязі плазмозамінної розчину.

Заморожування еритроцитів при помірно низьких температурах має ряд істотних переваг перед швидким заморожуванням. По-перше, кріоконсервовані таким чином еритроцити дешевше. По-друге, дана методика простіша у технічному плані. По-третє, вона безпечна.

Еритроцити, заморожені при помірно низьких температурах і в рідкому азоті, після дегліцерінізаціі зберігаються і використовуються однаково.

Застосування кріоконсервованих еритроцитів в клініці

Показання до призначення розморожених еритроцитів аналогічні таким при призначенні нативной ерітровзвесі або нативних відмитих еритроцитів. Але при цьому треба враховувати цілий ряд переваг, якими володіє суспензія розморожених еритроцитів. Першим і основним перевагою є те, що в процесі кріоконсервування і дегліцерінізаціі з суспензії еритроцитів видаляються всі інші клітинні елементи крові, вазоактивні речовини, калій і антикоагулянти, що входять до складу гемоконсерванту. Крім того, в відмитої ерітровзвесі залишаються найбільш стійкі еритроцити, тому що старі і нестійкі еритроцити повністю видаляються на етапах підготовки до трансфузии.

  Другим важливим перевагою є те, що з суспензії розморожених еритроцитів у процесі відмивання практично повністю видаляються віруси гепатиту В, а також ні А ні В. Причому, чим більше кратність відмивання, тим менше ймовірність зараження реципієнта цією інфекцією при переливанні йому розмороженої ерітровзвесі.

  Третя перевага полягає в тому, що розморожені еритроцити практично позбавлені аллергизирующих властивостей, так як основні иммунизируется фактори видаляються в процесі відмивання.

  Протипоказання для переливання кріоконсервованих еритроцитів ті ж, що і для нативних.

  Переливання розморожених еритроцитів здійснюється через систему з фільтром з обов'язковим виконанням всіх проб на сумісність і триразовою біологічної проби. Після переливання суспензії з розморожених еритроцитів за хворими необхідно спостереження протягом 3 год для попередження розвитку можливих побічних реакцій (термометрія і загальний аналіз сечі). На думку більшості авторів, реакції при переливанні кріоконсервованих еритроцитів реєструються в кілька разів рідше, ніж при переливанні нативних еритроцитів. 
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Криоконсервування еритроцитів"
  1.  Акушерські кровотечі
      Кровотечі завжди були і, по всій видимості, будуть залишатися однією з основних проблем для практичного акушерства. У структурі материнської смертності акушерські кровотечі займають провідне місце в більшості країн світу. Акушерські кровотечі можуть виникати під час вагітності, в пологах, в послідовно і ранньому післяпологовому періодах. Під кровотечею при пологах через природні
  2.  Консервування крові
      це створення умов для тривалого підтримання крові поза організмом стерильною, із збереженням біологічних властивостей і функціональних здібностей клітин крові, а також нормального складу плазми. Сироватка=плазма - фібрин Сироватку можна переливати, але не з гемостатичну метою. Кров зберігається до 21 дня. Терміни зберігання крові встановлюються на підставі приживлюваності еритроцитів
  3.  Консервування крові
      Основні поняття Консервування крові - це комплекс впливів на неї, що мають своєю метою створення умов для тривалого зберігання крові поза організмом в стерильному стані з максимальним збереженням її біологічних властивостей (як формених елементів, так і рідкої частини крові). Для консервування крові використовуються два методи: консервування при позитивних температурах;
  4.  Додаток 5.3
      КВАЛІФІКАЦІЙНА ХАРАКТЕРИСТИКА ЛІКАРЯ-трансфузіолог (Затверджена Наказом МОЗ РФ N 172 від 29 травня 1997 р.) Відповідно до вимог фахом лікар-трансфузіолог повинен знати і вміти: 1. Загальні знання: - основи законодавства про охорону здоров'я та директивні документи, що визначають діяльність органів і установ охорони здоров'я Російської Федерації; - організація
  5.  ДЕФОРМІВНИЙ ОСТЕОАРТРОЗ. ПОДАГРА.
      ДЕФОРМІВНИЙ ОСТЕОАРТРОЗ (ДОА). У 1911 році в Лондоні на Міжнародному конгресі лікарів всі захворювання суглобів були розділені на дві групи: первинно-запальні та первинно-дегенеративні. Ревматоїдний артрит і хвороба Бехтерева відносяться до першої групи. Представником другої групи є деформуючого остеоартрозу (ДОА), що представляє собою: дегенеративно-дистрофічних захворювань
  6.  КЛІНІЧНА КАРТИНА
      Початок доброякісно протікає АГ, в більшості випадків непомітно для хворого. Перші підйоми артеріального тиску рідко супроводжуються характерною симптоматикою. Можливі, принаймні, два варіанти дебюту АГ: 1) розвиток АГ після прикордонної артеріальної гіпертензії та 2) становлення без попереднього прикордонного періоду. Часто підвищені цифри АТ є випадковою знахідкою.
  7.  ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТ
      Гломерулонефрит є основною проблемою сучасної клінічної нефрології, найчастішою причиною розвитку хронічної ниркової недостатності. За даними статистики, саме хворі на гломерулонефрит становлять основний контингент відділень хронічного гемодіалізу та трансплантації нирок. Термін "гломерулонефрит" вперше запропонував Klebs, який застосував його в "Керівництві по
  8.  СІСГЕМНАЯ ЧЕРВОНА ВІВЧАК
      Відповідно до сучасних уявлень системний червоний вовчак (ВКВ) є хронічне рецидивуюче полісиндромне захворювання переважно молодих жінок і дівчат, що розвивається на тлі генетично зумовленої недосконалості імунорегуляторних процесів, що призводить до неконтрольованої продукції антитіл до власних клітин і їх компонентів, з розвитком
  9.  СИСТЕМНА СКЛЕРОДЕРМІЯ
      - Прогресуюче полісиндромне захворювання з характерними змінами шкіри, опорно-рухового апарату, внутрішніх органів (легені, серце, травний тракт, нирки) і поширеними вазоспастична порушеннями по типу синдрому Рейно, в основі яких лежать ураження сполучної тканини з переважанням фіброзу і судинна патологія в формі облітеруючого ендартеріїту.
  10.  ЛІКУВАННЯ СТЕНОКАРДІЇ.
      Враховуючи, що в основі стенокардії лежить невідповідність між потребою серцевої м'язи в кисні і її доставкою по коронарним артеріях, лікування повинно бути спрямоване на: 1.По можливості більш повну елімінацію чинників ріска.2.Улучшеніе коронарного кровотоку і зміна метаболізму міокарда.3 . Корекцію порушень ліпідного обміну, мікроциркуляції і реологічних властивостей
загрузка...

© medbib.in.ua - Медична Бібліотека
загрузка...