Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаІмунологія та алергологія
« Попередня
Адельман Д.. Імунологія, 1993 - перейти до змісту підручника

Імунологічні методи діагностики інфекційних захворювань

Х. Кесарвала, Дж. Кішіяма

I. Імунна відповідь при інфекційних захворюваннях. Імунна відповідь - це реакція на чужорідний антиген, яка призводить до накопичення та активації клітин, що у його видаленні. Перебіг і результат будь-якої інфекції залежать від сили імунної відповіді на антигени збудника.

А. Механічні бар'єри - шкіра, слизові, миготливий епітелій дихальних шляхів і шлунково-кишкового тракту - перешкоджають попаданню мікробів в кров.

Б. Макрофаги перешкоджають дисемінації інфекції. У захисті від інфекції беруть участь як макрофаги, наприклад купферовские клітини, альвеолярні і перитонеальні макрофаги, так і циркулюючі моноцити. Макрофаги захоплюють і знищують мікроби, розщеплюють антигени і представляють його T-хелперам.

В. Антитіла, як і макрофаги, запобігають дисемінацію інфекції.

1. IgM складають основну частину антитіл, що виробляються при первинному імунній відповіді. IgM мають високу здатність до зв'язування і активації комплементу, аглютинації і опсонізації мікробів.

2. IgA присутні в сироватці, лімфі, сльозі, грудному молоці, на слизових і в їх секрети, наприклад в слині. Ці антитіла беруть участь у захисті від мікробів, що потрапляють на слизові.

3. IgG становлять близько 80% імуноглобулінів сироватки і є основними антитілами, які забезпечують захист від бактерій, грибів і вірусів.

Г. Лімфоцити. Існують три популяції лімфоцитів: B-, T-і NK-лімфоцити. B-лімфоцити потрапляють в кров і периферичні органи імунної системи з кісткового мозку і диференціюються в плазматичні клітини, які продукують антитіла. T-лімфоцити також відбуваються з кісткового мозку, але дозрівають в тимусі. T-лімфоцити діляться на кілька субпопуляцій, які розрізняються за функціями та поверхневих антигенів (див. гл. 1, п. II.А). У руйнуванні заражених клітин беруть участь принаймні 2 типу лімфоцитів. Це цитотоксические T-лімфоцити - лімфоцити CD8, функція яких обмежена HLA, і NK-лімфоцити, функція яких не обмежена HLA і які здатні руйнувати інфіковані клітини на ранніх стадіях інфекційного процесу, до появи цитотоксичних T-лімфоцитів. Існують 2 механізму, за допомогою яких лімфоцити знищують мікроорганізми: руйнування інфікованих клітин при безпосередньому контакті і вироблення цитокінів, що активують макрофаги. Хворі з недостатністю клітинного імунітету схильні до таких захворювань, як туберкульоз, кір, дисемінований кандидоз, інфекція, викликана вірусом varicella-zoster, навіть при нормальному гуморального імунітету.

Д. Комплемент - це система сироваткових білків, які руйнують клітини і беруть участь у запаленні і регуляції імунної відповіді. Завдяки здатності опсонізовані мікроорганізми, зв'язуючись з їх поверхнею безпосередньо або через антитіла, комплемент підсилює фагоцитарну активність макрофагів і нейтрофілів.

Е. Інтерферони - група цитокінів, які відіграють важливу роль в імунітеті, в тому числі противірусному. Відомі 3 типи інтерферонів: інтерферон альфа (виробляється лейкоцитами), інтерферон бета (виробляється фібробластами) та інтерферон гамма (виробляється активованими T-лімфоцитами).

II. Загальні принципи иммунодиагностики інфекційних захворювань

А. Анамнез. При оцінці результатів серологічних досліджень враховують такі дані.

1. Анамнез захворювання.

2. Відомості про перенесені захворювання.

3. Відомості про вакцинацію (терміни проведення та види вакцин).

4. Відомості про поїздки.

5. Місце проживання і контакт з несприятливими факторами навколишнього середовища.

6. Відомості про контакти з джерелами інфекції.

7. Відомості про контакти з тваринами.

8. Час року.

Б. Проби для дослідження. Для посіву та визначення антигенів збудника можна використовувати різні тканини і біологічні рідини. Для визначення антитіл до збудника зазвичай використовують сироватку, спинномозкову рідину і синовіальну рідину. Щоб виявити наростання титру антитіл до якого-небудь збудника, проби сироватки забирають в період розпалу і в період одужання. При виявленні антитіл в СМЖ виключають ураження ЦНС.

III. Імунологічні методи, застосовувані для діагностики інфекційних захворювань, наведено в табл. 22.1.

А. РИА - високочутливий метод, заснований на реакції антиген-антитіло, один з компонентів якої несе радіоактивну мітку. Метод дозволяє виявляти як антигени, так і антитіла і визначати їх концентрацію в досліджуваній пробі.

Б. Імунофлюоресцентний аналіз також застосовують для виявлення як антигенів, так і антитіл. Цей метод заснований на використанні реагентів, мічених флюоресцентним барвником. Антитіла найчастіше мітять флюоресцеина ізотіоцианатом. Мічені антитіла зв'язуються з антигеном, утворюючи комплекси, які можна виявити за допомогою флюоресцентной мікроскопії. Існують три модифікації иммунофлюоресцентного аналізу.

1. Метод прямої імунофлюоресценції застосовують для виявлення антигенів. Він заснований на безпосередньому зв'язуванні антигену, сорбованої на твердій підкладці, з міченими антитілами. Реакцію оцінюють за допомогою флуоресцентного мікроскопа.

2. Метод непрямої імунофлюоресценції дозволяє виявити антитіла до відомого антигену. Антиген, сорбованих на твердій підкладці, зв'язується з немічених антитілами. Комплекси антиген-антитіло виявляються за допомогою мічених антитіл до імуноглобулінів.

3. Метод конкурентної імунофлюоресценції заснований на зв'язуванні стандартного міченого і присутнього в досліджуваній пробі немічених антигенів з антитілами, сорбованих на твердій підкладці. Оскільки мічений і немічених антигени конкурують за зв'язування з антитілами, за кількістю пов'язаного міченого антигену можна визначити концентрацію антигену в досліджуваній пробі.

В. Методи, засновані на реакції преципітації. При взаємодії розчинних антигенів з антитілами утворюються високомолекулярні комплекси антиген-антитіло, які випадають у вигляді осаду в розчині або відкладаються у вигляді смуг преципітації в гелі. Використання очищених антигенів дозволяє визначити концентрацію антитіл в досліджуваній пробі.

1. Преципитация в розчині. При додаванні антигену в зростаючій концентрації до одного і того ж кількості антитіл випадає різна кількість преципітату. Можна побудувати графік - криву преципітації, - який відображає залежність між концентрацією антигену і кількістю преципітату: при надлишку антитіл кількість преципітату зростає із збільшенням концентрації антигену, в зоні еквівалентності (кількість антигену приблизно дорівнює кількості місць зв'язування на антитіла) утворюється максимальна кількість преципітату, при надлишку антигену кількість преципітату зменшується зі збільшенням концентрації антигену.

2. Іммунодіффузія - найбільш поширений з усіх методів, заснованих на реакції преципітації (див. гл. 20, пп. I.Б-В).

А. Проста радіальна іммунодіффузія. Суть методу полягає в наступному: 1) у тонкому шарі гелю, що містить антитіла до певної концентрації, вирізують лунки; 2) антиген, поміщений в ці лунки, дифундує в гель; 3) навколо лунок утворюються кільця преципітації, діаметр яких пропорційний концентрації антигену. Метод зазвичай застосовується для визначення концентрації імуноглобулінів.

Б. Подвійна радіальна іммунодіффузія. Суть методу полягає в наступному: 1) у тонкому шарі гелю вирізують лунки для антигену і антитіл; 2) антиген і антитіла дифундують назустріч один одному, утворюючи лінії преципітації на деякій відстані від лунок. По відстані від лунки з антигеном до лінії преципітації можна визначити концентрацію антигену.

3. Електрофорез

а. Іммуноелектрофорез являє собою поєднання двох методів - иммунодиффузии і зонального електрофорезу. Іммуноелектрофорез застосовується в основному для дослідження сироваткових білків. Суть методу полягає в наступному: 1) у лунку, вирізану в тонкому шарі гелю, поміщають досліджувану сироватку; 2) проводять електрофоретичної поділ білків сироватки; 3) в гелі вирізають борозенку, паралельну напрямку міграції білків при електрофорезі, і заповнюють її сумішшю антитіл до сироватковим білкам; 4) розділені при електрофорезі білки (антигени) і антитіла дифундують назустріч один одному. У місцях зв'язування антитіл з антигенами утворюються дуги преципітації (див. гл. 20, п. I.А).

Б. Зустрічний електрофорез. Суть методу полягає в наступному: 1) досліджувані антигени і суміш антитіл поміщають в лунки, розташовані на протилежних кінцях пластини з гелем; 2) уздовж лінії, що з'єднує лунки, пропускають постійний електричний струм; 3) в електричному полі антитіла і антигени швидко переміщаються по напрямку один до одного; 4) у місці зв'язування антигенів з антитілами утворюються лінії преципітації. Зустрічний електрофорез застосовують у тих випадках, коли антигени і антитіла володіють різною електрофоретичної рухливістю. Цей метод дозволяє швидко визначити антигени або антитіла в досліджуваній пробі і застосовується в експрес-діагностиці інфекційних захворювань.

Г. Методи, засновані на реакції аглютинації, досить чутливі і застосовуються для виявлення антигенів на поверхні клітин або частинок і напівкількісного визначення антитіл до цих антигенів. Суть методів полягає в наступному: при зв'язуванні клітин або частинок, покритих антигеном, з антитілами утворюються великі агрегати. Для визначення титру антитіл до поверхневих антигенів клітин або до антигенів, сорбованих на поверхні частинок, змішують відоме кількість клітин або частинок, покритих антигеном, з різними разведениями досліджуваної проби, наприклад сироватки.

1. Реакція прямої аглютинації застосовується для виявлення поверхневих антигенів мікробів або клітин крові та антитіл до цих антигенів. Суть методу полягає в наступному: серійні розведення досліджуваної проби (наприклад, сироватки) змішують з клітинами, за титр антитіл беруть величину, зворотну максимальному розведенню сироватки, яке викликає аглютинацію. Цей метод більш чутливий, ніж методи, засновані на преципітації, оскільки при рівній концентрації антигену обсяг агглютіната більше обсягу преципітату. Реакція аглютинації не залежить від температури, якщо тільки не обумовлена ??холодовим аглютиніни, які більш ефективні при температурі нижче 37 ° C.

2. Реакція непрямої аглютинації заснована на аглютинації еритроцитів, інших клітин або частинок (наприклад, латексу або бентоніту), покритих антигеном. Для визначення титру антитіл серійні розведення сироватки у фізіологічному розчині змішують з відомою кількістю покритих антигеном клітин або частинок. Реакція непрямої аглютинації - чутливий метод, що дозволяє визначати розчинні антигени в низьких концентраціях.

Д. Реакція зв'язування комплементу. Суть методу полягає в наступному: 1) антиген змішують з антитілами, 2) до утворився комплексам антиген-антитіло додають відому кількість комплементу, який зв'язується з цими комплексами; 3) кількість незв'язаного комплементу оцінюють у реакції гемолізу з еритроцитами барана.

Е. Твердофазний ІФА - надійний, економічний і високочутливий метод. Він заснований на використанні стандартних препаратів очищених антигенів або антитіл, ковалентно пов'язаних з ферментом. Ці препарати зберігають та імунологічні властивості, і ферментативну активність, яку можна виміряти при додаванні субстрату даного ферменту (див. гл. 20, п. I.Е).

Ж. Інші методи

1. Визначення рівня C-реактивного білка. C-реактивний білок - білок гострої фази запалення, що відноситься до бета-глобулінів. C-реактивний білок, як і інші білки гострої фази запалення, з'являється в сироватці незабаром після пошкодження тканин і початку запалення. Підвищення рівня C-реактивного білка спостерігається при гострих бактеріальних і вірусних інфекціях, інфаркті міокарда, злоякісних новоутвореннях і аутоімунних захворюваннях (див. гл. 15, п. II.Б).

2. Визначення титру холодових аглютинінів. Холодові аглютиніни - це IgM, які викликають максимальну аглютинацію еритроцитів при 4 ° C. Холодові аглютиніни з'являються при деяких захворюваннях, наприклад при мікоплазменної пневмонії, рідше при грипі, аденовірусної інфекції та інших гострих респіраторних захворюваннях, а також при сонної хвороби. Діагностично значущим вважається виявлення холодових аглютинінів в титрі 1:32 або чотириразове підвищення їх титру протягом 7-14 діб.

3. Визначення титру агглютинирующих антитіл. Агглютинирующие антитіла до збудника з'являються в сироватці при багатьох інфекційних захворюваннях: сальмонельозі, паратифі, бруцельозі, туляремії, рикетсіози та інших. Титр цих антитіл можна визначити в реакції аглютинації інактивованих бактерій при додаванні різних розведень сироватки. Сироватку для дослідження зазвичай збирають двічі: у період розпалу і в період одужання (через 10-21 діб). Діагностично значущим вважають чотириразове підвищення титру антитіл.

4. Реакція Нейфельд - набухання клітинної стінки бактерій під дією антитіл до типоспецифічними капсульної полісахаридів, видиме при світловій мікроскопії. Цю реакцію можна спостерігати при додаванні антитіл, спрямованих проти полісахаридів клітинної стінки Haemophilus influenzae, Streptococcus pneumoniae і Neisseria meningitidis (серотипів A і C), до цих бактерій. Реакція Нейфельд застосовується для дослідження сироватки і СМЖ.

  5. Реакція з лізатів амебоцитів мечехвоста (Limulus polyphemus) застосовується для діагностики інфекцій, насамперед сепсису та менінгіту, викликаних грамнегативними бактеріями. Метод заснований на тому, що при додаванні бактеріальних ендотоксинів рідкий лизат амебоцитів мечоносці перетворюється на гель.

  IV. Шкірні проби, засновані на алергічних реакціях уповільненого типу, - найбільш простий і доступний спосіб оцінки клітинного імунітету.

  А. Антигени для проведення шкірних проб. Шкірні проби зазвичай проводять з очищеним туберкуліном, тріхофітоном, дерматофітіном 0, правцевим анатоксином, антигенами вірусу епідемічного паротиту та Coccidioides immitis (див. гл. 18, п. III.Ж і табл. 22.2).

  Б. Захворювання і стани, які супроводжуються пригніченням клітинного імунітету і, отже, алергічних реакцій уповільненого типу, перераховані нижче.

  1. Первинні та вторинні імунодефіцити.

  2. Гострі вірусні інфекції, у тому числі епідемічний паротит, краснуха, кір, інфекція, викликана вірусом varicella-zoster, грип, інфекційний мононуклеоз.

  3. Грибкові інфекції, наприклад кокцідіоідоз, криптококоз, аспергільоз.

  4. Бактеріальні інфекції, у тому числі туберкульоз, бактеріальні менінгіт і пневмонія.

  5. Злоякісні новоутворення.

  6. Імунізація живими вірусними вакцинами.

  7. Лікування кортикостероїдами і імунодепресантами.

  8. Аутоімунні захворювання.

  9. Великі операції.

  10. Виснаження.

  В. Техніка проведення шкірних проб

  1. Ділянка шкіри для ін'єкції обробляють антисептиком.

  2. Внутрішньошкірно вводять 0,1 мл розчину антигену. Для цього використовують туберкуліновий шприц об'ємом 1 мл і голку 27 G довжиною 12 мм.

  3. Місце ін'єкції обводять незмивною олівцем.

  4. Через 24-72 год (в залежності від використовуваного антигену) вимірюють два розміри еритеми і папули, розраховують середній і записують результат шкірної проби в міліметрах.

  Г. Реакція на внутрішньошкірне введення антигену і терміни її розвитку залежать від виду антигену (див. табл. 22.2).

  V. Діагностика вірусних інфекцій. В даний час широко застосовуються 4 способи діагностики вірусних інфекцій: 1) виділення вірусу в культурі клітин (найбільш точний спосіб); 2) виявлення цитоплазматичних, внутрішньоядерних включень і гігантських багатоядерних клітин в забарвлених мазках; 3) виявлення не менше ніж чотириразового зростання титру антитіл до вірусу на різних стадіях захворювання; 4) виявлення вірусу або його антигенів в тканинах і біологічних рідинах за допомогою експрес-тестів.

  А. Матеріалом для виділення вірусу в культурі клітин можуть служити мазки зі слизової глотки і носоглотки, харкотиння, сеча, кал, кров, СМЖ, ексудат, біоптат. При взятті проб дотримуються правил асептики, пробу поміщають в стерильний контейнер і транспортують в лабораторію. При підозрі на особливо небезпечні інфекції дотримуються додаткові запобіжні заходи і використовують спеціальне обладнання. Виділення збудника в цьому випадку проводять в спеціалізованих лабораторіях.

  Б. Зіскрібок з дна везикули

  1. Роблять надріз скальпелем по периферії везикули.

  2. Піднімають відшарувалися епідерміс і видаляють рідину за допомогою тампона.

  3. Скальпелем роблять зішкріб з дна везикули. При цьому слід уникати кровотечі.

  4. Отриманий матеріал переносять на 2 чистих предметних скла і роблять 2 мазка діаметром 5-10 мм.

  5. Мазки висушують на повітрі і фіксують спиртом.

  6. Фіксовані мазки фарбують за Гімзою або обробляють антитілами, міченими флюоресцентним барвником.

  7. Для отримання надійних результатів зішкріб виробляють тричі.

  В. Продукцію антитіл до вірусних антигенів можна оцінити за допомогою реакції нейтралізації, реакції гальмування гемаглютинації, реакції зв'язування комплементу і твердофазного ІФА. Проби крові (2-10 мл) забирають на ранній стадії захворювання і через 2-3 тижнів. У стерильних умовах отримують сироватку, поміщають її в стерильну пробірку і до відправки в лабораторію зберігають у холодильнику або заморожують (-20 ° C). Діагностично значущим вважається чотириразове підвищення титру антитіл в ході захворювання.

  1. Реакція зв'язування комплементу (див. гл. 22, п. III.Д).

  2. Реакція нейтралізації - високоспецифічний метод, заснований на зв'язуванні вірусу антитілами і його нейтралізації. Метод дозволяє визначити рівень противірусних антитіл і здатність досліджуваної сироватки нейтралізувати віруси. Суть методу полягає в наступному: 1) виробляють серійні розведення досліджуваної сироватки; 2) різні розведення сироватки змішують з відомою кількістю вірусу; 3) сироватку додають до культури клітин, сприйнятливою до даного вірусу, 4) нейтрализующую активність сироватки оцінюють щодо зниження здатності вірусів інфікувати культуру клітин.

  3. Реакція гальмування гемаглютинації - високоспецифічний і чутливий метод, що дозволяє визначити навіть незначну кількість противірусних антитіл в біологічних рідинах. Цей метод заснований на здатності деяких вірусів сорбироваться на еритроцитах, зокрема на людських еритроцитах групи 0 і курячих еритроцитах, і викликати гемаглютинацію. Якщо досліджувана біологічна рідина містить противірусні антитіла, при її додаванні до вірусів буде спостерігатися гальмування гемаглютинації. Чим вищий вміст противірусних антитіл в досліджуваній рідині, тим сильніше пригнічується гемагглютинация.

  Г. Для експрес-діагностики вірусних інфекцій застосовують серологічні методи, засновані на застосуванні стандартних противірусних антитіл. Ці методи перераховані нижче.

  1. РІА.

  2. Імунофлюоресцентний аналіз.

  3. Твердофазних ІФА.

  Д. Інфекційний мононуклеоз викликає вірус Епштейна-Барр. Захворювання зазвичай виникає в дитячому і молодому віці. До характерних проявів інфекційного мононуклеозу відносяться лихоманка, біль у горлі, збільшення лімфовузлів, спленомегалія, лімфоцитоз. Оскільки подібна клінічна картина спостерігається також при цитомегаловірусної інфекції, бруцельозі, туляремії, гострому токсоплазмозі і на ранніх стадіях краснухи, для діагностики інфекційного мононуклеозу використовують серологічні методи.

  1. Гетерофільні антитіла - IgM, які взаємодіють з антигенами тварин неспоріднених видів, наприклад барана або бика. Ці антитіла виявляються приблизно у 90% хворих на інфекційний мононуклеоз. Гетерофільні антитіла в низькому титрі можуть бути присутніми і у здорових людей.

  а. Проба Пауля-Буннелля - стандартний метод лабораторної діагностики інфекційного мононуклеозу. Він полягає у виявленні гетерофільних антитіл до еритроцитів барана за допомогою реакції гемаглютинації. Гетерофільні антитіла при інфекційному мононуклеозі відрізняються від гетерофільних антитіл, присутніх в сироватці здорових і хворих сироваткової хворобою, по здатності абсорбуватися тканиною нирок морської свинки і еритроцитами бика (див. табл. 22.3). Діагностично значущим вважається титр 1:128-1:256. Гетерофільні антитіла зазвичай виявляють через 3-4 тижнів після початку захворювання. Реакція Пауля-Буннелля буває позитивною при лейкозі, вірусних гепатитах, цитомегаловірусної інфекції, лімфомі Беркітта, ревматоїдному артриті і після введення імунних сироваток. Титр антитіл не відображає тяжкості захворювання, однак при вимірюванні в динаміці дозволяє стежити за перебігом захворювання.

  б. Експрес-тест на Гетерофільні антитіла (Моно-Тест, Уемпоул Леборетріс). Гетерофільні антитіла в цьому дослідженні виявляються при аглютинації стабілізованих формаліном еритроцитів коня. Абсорбцію тканиною нирок морської свинки і еритроцитами бика не проводять.

  2. Спеціальні серологічні методи. Інфекційний мононуклеоз не завжди супроводжується появою гетерофільних антитіл. Вони, зокрема, відсутні у дітей. У цьому випадку застосовують такі серологічні методи.

  а. Антитіла до капсидному антигену вірусу Епштейна-Барр виявляють методом імунофлюоресценції. На ранній стадії захворювання в сироватці хворого з'являються IgM до капсидного антигену. Їх титр стає максимальним через 2 тижні після початку захворювання і знижується протягом 2-3 міс. Присутність IgM до капсидного антигену вірусу Епштейна-Барр свідчить про недавнє зараженні, а IgG - про раніше перенесене захворювання.

  б. Антитіла до ранніх антигенів вірусу Епштейна-Барр виявляються методом непрямої імунофлюоресценції. Титр цих антитіл стає максимальним через 2-3 тижнів після початку захворювання.

  в. Антитіла до ядерного антигену вірусу Епштейна-Барр виявляються методом непрямої імунофлюоресценції із застосуванням комплементу і мічених антитіл до нього. Антитіла до ядерного антигену з'являються приблизно через 4 тижні після початку захворювання і зберігаються протягом усього життя.

  Е. Вірусні гепатити - системні інфекційні захворювання, які проявляються переважним ураженням печінки. Їх викликають віруси гепатитів A, B, C, D, E, вірус Епштейна-Барр, цитомегаловірус, вірус varicella-zoster, аденовіруси.

  1. Вірус гепатиту A - РНК-вірус розміром 27 нм. Найбільш достовірний лабораторний ознака захворювання - виявлення IgM до вірусу гепатиту A за допомогою РІА або твердофазного ІФА. Рідше використовується модифікація методу гемаглютинації, заснована на аглютинації еритроцитів при додаванні до них вірусу і сироватки (джерело комплементу і противірусних антитіл). Діагностично значущим вважається чотириразове підвищення титру противірусних антитіл протягом 4 тижнів. Виявлення вірусів в калі проводять за допомогою електронної мікроскопії проб, оброблених противірусними антитілами.

  2. Вірус гепатиту B містить двухцепочечную ДНК, оточену нуклеокапсидом розміром 27 нм, до складу якого входить HBcAg, і зовнішньою оболонкою, яка містить HBsAg. HBsAg виявляється в крові за 6 тижнів до появи симптомів захворювання і може виявлятися тривалий час як при їх наявності, так і в їх відсутність (при хронічному гепатиті і носійстві). На ранніх стадіях захворювання цей антиген виявляється у 90-95% хворих. Антитіла до HBsAg з'являються в сироватці через 2-26 тижнів після зникнення HBsAg, виявлення цих антитіл свідчить про одужання і розвитку імунітету. Антитіла до HBcAg з'являються в крові в гострій стадії захворювання. Навіть одноразове виявлення цих антитіл в сироватці з високою ймовірністю вказує на гострий гепатит, викликаний вірусом гепатиту B. У осіб, в сироватці яких після одужання тривалий час зберігається HBsAg, часто виявляються і антитіла до HBcAg. Третій антиген вірусу гепатиту B - HBeAg - з'являється зазвичай слідом за HBsAg в кінці інкубаційного періоду або на ранній стадії захворювання. Поява в сироватці HBeAg свідчить про гострий, а виявлення цього антигену протягом тривалого часу - про хронічному гепатиті, викликаному вірусом гепатиту B. Після зникнення HBeAg в сироватці з'являються антитіла до нього. Присутність цих антитіл в сироватці свідчить про одужання, а при тривалому виявленні HBsAg - про носійство вірусу гепатиту B. Ризик зараження від хворого, в сироватці якого одночасно виявляються HBsAg і HBeAg, в 10 разів вище, ніж від хворого, в сироватці якого одночасно виявляються HBsAg і антитіла до HBeAg, а HBeAg відсутня. Виявлення в сироватці хворого і HBsAg, і HBeAg свідчить про високий ризик зараження при контакті з цим хворим. Комплексне визначення антигенів вірусу гепатиту B і антитіл до них дозволяє поставити діагноз, визначити стадію захворювання, оцінити ризик зараження і імунну відповідь.

  3. Вірус гепатиту C відноситься до РНК вірусів. Зараження вірусом гепатиту C - основна причина посттрансфузійного гепатиту ні-A ні-B (70-90%). З 1990 р. стало можливим визначення антитіл до вірусу гепатиту C. Їх зазвичай вдається виявити не раніше ніж через 3 міс після початку захворювання, коли починає знижуватися активність АсАТ і АлАТ. Оскільки антитіла до вірусу гепатиту C не виконують захисну функцію, їх поява не відображає розвитку імунітету. Слід ще раз підкреслити, що відсутність антитіл до вірусу гепатиту C не виключає захворювання.

  4. Вірус гепатиту D складається з дефектною РНК і HDAg, оточених зовнішньою оболонкою, яка містить HBsAg. Вірус гепатиту D реплицируется тільки в присутності вірусу гепатиту B і виявляється головним чином у наркоманів, гомосексуалістів і хворих на гемофілію. Цей вірус частіше, ніж інші збудники вірусного гепатиту, буває причиною блискавичного гепатиту і цирозу печінки. Серодиагностика гепатиту D заснована на застосуванні антитіл до HDAg. Гепатит D виключають при рецидив жовтяниці після перенесеного гепатиту B.

  5. Вірус гепатиту E. Механізм передачі фекально-оральний. У багатьох країнах спостерігаються спалахи гепатиту E, викликаного вживанням зараженої води. Набори для виявлення антитіл до вірусу гепатиту E можна придбати в Центрі з контролю захворюваності.

  Ж. ВІЛ. Для діагностики ВІЛ-інфекції використовується твердофазний ІФА та імуноблотинг (див. гл. 19, п. I.Г.1).

  VI. Діагностика бактеріальних інфекцій

  А. Микоплазменная інфекція. Раніше вважалося, що мікоплазми займають проміжне положення між бактеріями і вірусами: від вірусів вони відрізняються здатністю рости в безклітинних середовищі, а від бактерій - відсутністю клітинної стінки. В даний час їх прийнято відносити до бактерій. Найбільш поширений збудник микоплазменной інфекції - Mycoplasma pneumoniae - викликає пневмонію у дітей та осіб молодого віку. Mycoplasma hominis і Ureaplasma urealyticum викликають інфекції сечових шляхів і статевих органів. Мікоплазми можна виявити в посівах, для його зростання необхідно 2-4 тижнів. Нижче наведені серологічні методи діагностики мікоплазменної інфекції.

  1. Визначення холодових аглютинінів. Якщо при пневмонії титр холодових аглютинінів не менше 1:32 або спостерігається не менше ніж чотирикратне його підвищення до кінця захворювання, можна вважати, що вона викликана Mycoplasma pneumoniae. Відсутність холодових аглютинінів не виключає діагнозу мікоплазменної пневмонії.

  2. Реакція зв'язування комплементу - метод, частіше за інших застосовуваний для виявлення антитіл до мікоплазмам. Діагностично значущим вважається не менш ніж чотириразове зростання титру антитіл. Високий титр антитіл до мікоплазмам (1:256 і вище) свідчить про нещодавно перенесеної інфекції. Антитіла в низькому титрі можуть виявлятися в сироватці через кілька років після перенесеної інфекції.

  3. Твердофазних ІФА доступний більшості лабораторій. Цей метод більш простий, ніж реакція зв'язування комплементу, тому в даний час застосовується набагато частіше.

  Б. Стрептококова інфекція. В даний час випускаються готові набори для виявлення антитіл до стрептококовим антигенів - стрептолізин O, дезоксирибонуклеазу і іншим. При гострій стрептококової інфекції діагностична цінність серологічних методів невелика. Однак оскільки підвищення титру антитіл вказує на недавно перенесену стрептококову інфекцію, ці методи застосовуються в діагностиці ревматизму і гострого гломерулонефриту. Випускаються готові набори для експрес-діагностики ангіни, викликаної Streptococcus pyogenes. До складу наборів входять реагенти, що дозволяють швидко виділити групоспецифічні антигени з виділень із зіву, і антитіла до цих антигенів, сорбованих на частинках латексу. При порівнянні результатів, отриманих за допомогою одного з таких наборів (Калчеретт Груп A Стреп ID Тест, Маріон Сайентіфік), з результатами дворазового посіву мазків із зіву показана його висока чутливість (77-95%) і специфічність (88-100%). Набори для експрес-діагностики прості у використанні і дозволяють швидко поставити діагноз, завдяки чому вони знайшли широке застосування в діагностиці стрептококової інфекції. Надійність різних діагностичних наборів неоднакова.

  В. Сибірська виразка. Збудник сибірської виразки - Bacillus anthracis - велика грамположительная спороутворююча паличка. Людина заражається сибіркою при контакті з хворою твариною. У 95% випадків Bacillus anthracis викликає шкірну форму сибірки. Для визначення антитіл до збудника застосовуються імуноблотинг і твердофазних ІФА. Поставити діагноз дозволяє зростання титру антитіл.

  Г. Бруцельоз - гостре або хронічне захворювання, що викликається різними видами бруцел. Діагноз ставлять при виділенні збудника в посівах крові, кісткового мозку та інших тканин. Розроблено серологічні методи діагностики бруцельозу, засновані на реакції зв'язування комплементу, РИА і твердофазном ІФА, непрямій пробі Кумбса і реакції Райта. Реакція Райта заснована на аглютинації інактивованих бруцелл досліджуваної сироваткою. Це стандартний метод діагностики бруцельозу, однак він не дозволяє виявити антитіла до Brucella melitensis.

  Д. Лістеріоз. Збудник лістеріозу - Listeria monocytogenes - дрібні грампозитивні палички. Лістеріоз може протікати з переважним ураженням ЦНС, очей, лімфовузлів, ШКТ, ендокарда, шкіри. Ризик лістеріозу особливо високий у вагітних і новонароджених. Діагноз ставиться при виділенні збудника. Надійні серологічні методи діагностики лістеріозу в даний час відсутні.

  Е. Туляремия. Збудник - дрібні грамнегативні бактерії Francisella tularensis. Зараження звичайно відбувається при контакті з тканинами або біологічними рідинами інфікованих тварин, наприклад кроликів, або при укусі членистоногих, які є переносниками інфекції. Розрізняють декілька клінічних форм туляремії: виразково-бубонна, легеневу, тифоїдна, очі-бубонна, абдоминальную, ангінозний. Виділити збудника в посівах зазвичай не вдається. Розроблено надійні серологічні методи діагностики туляремії, засновані на реакції аглютинації бактерій сироваткою хворих. Агглютинирующие антитіла з'являються в сироватці через 10-14 діб після зараження. Виявлення антитіл в титрі 1:40 і вище вказує на інфекцію, більш ніж чотирикратне зростання титру антитіл в процесі захворювання остаточно підтверджує діагноз. Титр антитіл стає максимальним (1:1280 і вище) між 4-й і 8-й тижнями хвороби. Можливі слабкі перехресні реакції з антигенами бруцел, однак титр антитіл до цих антигенів значно нижче. Серед інших методів діагностики туляремії слід зазначити твердофазний ІФА і реакцію бласттрансформації лімфоцитів.

  Ж. Інфекції, викликані Yersinia spp. Yersinia enterocolitica викликає иерсиниоз, що виявляється ентероколітом, мезаденітом. Уражається переважно дистальний відділ клубової кишки, тому иерсиниоз доводиться диференціювати з гострим апендицитом. Yersinia pestis - збудник чуми. Виділяють кілька клінічних форм чуми - бубонна, легеневу, септіцеміческую. Крім них іноді виділяють чуму, що протікає з менінгітом, і чуму, що протікає з фарингітом. Діагноз цих захворювань грунтується на виділенні збудника в посівах калу, випоту з черевної порожнини, СМЖ, крові, мокротиння і матеріалу, отриманого при біопсії мезентеріальних лімфовузлів. Серодиагностика часто дає хибнопозитивні результати і проводиться лише в спеціалізованих лабораторіях.

  З. Менінгококова інфекція. Діагноз грунтується головним чином на результатах посіву. Чутливість методів, заснованих на виявленні антигенів збудника, невелика. Вони часто дають хибнопозитивні і помилково негативні результати.

  І. Сальмонельозні інфекції. Діагноз заснований на виділенні збудника в посівах крові, сечі і калу. Серологічні методи діагностики, наприклад виявлення агглютинирующих антитіл, не набули широкого поширення, оскільки часто дають хибнопозитивні і помилково негативні результати, особливо на тлі антимікробної терапії.

  К. Холера. Діагноз заснований на результатах посіву. Серологічні методи діагностики застосовуються рідко і використовуються лише для підтвердження діагнозу. Найбільш доступні і прості з них засновані на визначенні антитіл до O-антигену Vibrio cholerae в реакціях аглютинації і лізису Vibrio cholerae.

  1. Реакція аглютинації. У 90% хворих відзначається більш ніж чотириразове підвищення титру антитіл до O-антигену збудника.

  2. Реакція лізису Vibrio cholerae. Антитіла до O-антигену Vibrio cholerae у присутності комплементу викликають лізис мікроорганізмів. У 90-95% хворих на холеру, діагноз якої підтверджений результатами посіву, за допомогою реакції лізису Vibrio cholerae виявляється не менше ніж чотириразове підвищення титру антитіл до O-антигену.

  Л. Кашлюк. Реакція аглютинації збудника коклюшу сироваткою хворого зазвичай застосовується при епідеміологічних дослідженнях. Для діагностики захворювання цей метод, як правило, не використовується. У деяких лабораторіях застосовується твердофазний ІФА. У майбутньому, можливо, він отримає більш широке поширення.

  М. Хвороба легіонерів. Збудник - Legionella pneumophila - грам паличка. Хвороба легіонерів проявляється лихоманкою, нездужанням, втратою апетиту, сухим кашлем. При рентгенографії грудної клітини виявляється велике ураження легень. Спорадичні випадки рідкісні, зазвичай відзначаються спалахи захворювання. Діагноз заснований на результатах посіву і серологічних досліджень (реакція непрямої імунофлюоресценції). Характерні підвищення титру антитіл більш 1:256 або його чотириразове підвищення в процесі захворювання. Антитіла до збудника зазвичай з'являються на 1-му тижні захворювання.

  Н. Туберкульоз. Mycobacterium tuberculosis - нерухомі грампозитивні палички, які добре видно під мікроскопом при забарвленні за Цілем-Нільсеном. При туберкульозі уражаються легені, серце, кістки, шкіра, ЦНС. Можлива дисемінована інфекція. Діагноз заснований на виявленні збудника в мазках, пофарбованих за Цілем-Нільсеном. Вирощування мікроорганізмів на середовищах займає 3-6 тижнів. Серодиагностика туберкульозу трудомістка і зазвичай не проводиться.

  О. Хламідійна інфекція. Хламідії - внутрішньоклітинні паразити, що містять як ДНК, так і РНК. Для людини патогенні 3 види хламідій - Chlamydia trachomatis, Chlamydia pneumoniae і Chlamydia psittaci. Chlamydia trachomatis викликає венеричну лімфогранулему, передається статевим шляхом, кон'юнктивіт із включеннями і трахому. Крім того, Chlamydia trachomatis - одна з найчастіших причин уретриту, цервицита і сальпінгіту. У дітей молодше 3 міс цей збудник викликає кон'юнктивіт із включеннями і пневмонію. Chlamydia psittaci викликає орнітоз, переносниками якого служать деякі види птахів, наприклад папуги. Chlamydia pneumoniae викликає пневмонію та інші інфекції дихальних шляхів у дітей та осіб молодого віку. Діагноз хламідійної інфекції зазвичай ставлять за результатами виділення збудника в культурі клітин. Серед серологічних методів використовуються реакція зв'язування комплементу і метод прямої імунофлюоресценції. Однак серодіагностика ненадійна, оскільки рівень антитіл до збудника коливається в широких межах. Діагноз венеричною лімфогранулеми заснований на виділенні збудника з біоптатів лімфовузлів і прямої кишки. Раніше в діагностиці венеричною лімфогранулеми застосовувалася проба Фрея - шкірна проба з інактивованих збудників, що викликають алергічну реакцію сповільненого типу. Однак цей метод ненадійний і пов'язаний з високим ризиком зараження вірусами гепатитів B і C та ВІЛ, оскільки збудника виділяють з тканин хворих венеричною лімфогранульома. Захворювання можна запідозрити, якщо титр антитіл до збудника перевищує 1:16. Діагноз орнітоз ставлять на підставі даних анамнезу. Зростання титру антитіл до збудника, виявлене в реакції зв'язування комплементу, підтверджує діагноз.

  П. Рикетсіози. Переносниками риккетсиозов служать членистоногі. У діагностиці використовуються твердофазний ІФА, реакція латекс-аглютинації, реакція зв'язування комплементу, реакція гальмування гемаглютинації. Реакцію Вейля-Фелікса (аглютинація деяких штамів Proteus vulgaris сироваткою хворих) в даний час не застосовують через великої кількості хибнопозитивних і хибнонегативних результатів.

  Р. Сифіліс. Імунна відповідь на Treponema pallidum призводить до синтезу антитіл, спрямованих проти неспецифічних і специфічних для збудника антигенів.

  1. Метод прямої імунофлюоресценції застосовується для виявлення збудника в мазках з уражених ділянок зовнішніх статевих органів, заднього проходу, шкіри та слизової рота. Метод прямої імунофлюоресценції більш чутливий, ніж мікроскопія в темному полі. У відсутність матеріалу для проведення реакції прямої імунофлюоресценції застосовують нетрепонемні і трепонемні реакції для виявлення антитіл до різних антигенів збудника.

  2. Нетрепонемні реакції являють собою реакції зв'язування комплементу і преципітації. З їх допомогою виявляють антитіла до ліпопротеїдів трепонем. Оскільки ліпопротеїди трепонем подібні з ліпопротеїдами тканин тварин і людини, результати нетрепонемних реакцій часто бувають псевдопозитивними. Остаточно підтверджують діагноз сифілісу тільки позитивні трепонемні реакції.

  а. VDRL - найбільш поширена нетрепонемних реакція. Метод заснований на реакції мікропреципітації кардіоліпінового антигену прогрітій сироваткою або СМЖ хворого. Якщо VDRL позитивна при розведенні сироватки 1:8, для визначення титру антитіл ставлять реакцію з серійними разведениями сироватки. VDRL стає позитивною через 1-3 тижнів після появи твердого шанкра. Титр антитіл, що виявляються за допомогою VDRL, при первинному сифілісі може бути як високим, так і низьким, іноді вони зовсім не виявляються. При вторинному сифілісі їх титр, як правило, високий. Діагностично значущим вважається не менш ніж чотириразове підвищення титру антитіл. На більш пізніх стадіях захворювання антитіла в сироватці не виявляються або виявляються в низькому титрі. Хибно позитивні результати можливі під час вагітності, при аутоімунних, інфекційних захворюваннях і у наркоманів. При постановці VDRL з СМЖ кардіоліпіновий антиген розводять 10% розчином хлориду натрію. В іншому дослідження проводиться так само, як з сироваткою. На відміну від дослідження сироватки, результати дослідження СМЖ рідко бувають псевдопозитивними. При підозрі на вроджений сифіліс VDRL ставлять кілька разів: якщо антитіла до Кардіоліпінові антигену материнські, їх титр поступово знижується, при вродженому сифілісі він зростає.

  б. Реакція преципітації плазми з кардіоліпіновим антигеном більш чутлива, ніж VDRL, але менш специфічна. При позитивному результаті цієї реакції ставлять VDRL або трепонемні реакції. Кількісна оцінка результатів реакції преципітації плазми з кардіоліпіновим антигеном дозволяє оцінювати ефективність лікування сифілісу.

  3. Трепонемні реакції

  а. Реакція іммобілізації трепонем. Метод заснований на здатності антитіл викликати іммобілізацію живих трепонем у присутності комплементу. Реакція оцінюється за допомогою мікроскопії в темному полі. Незважаючи на високу вартість і великі витрати часу, вона відноситься до найбільш специфічним трепонемним реакцій. Однак чутливість методу невисока - приблизно у 70% хворих первинним сифілісом і 30% хворих вторинним сифілісом його результати бувають негативними. Крім того, цей метод не дозволяє відрізнити збудника сифілісу від збудників інших захворювань, що викликаються трепонемами: фрамбезії, беджель і пінти.

  б. Реакція імунофлюоресценції-абсорбції. Перед постановкою реакції досліджувану сироватку обробляють спеціальним сорбентом для видалення неспецифічних для Treponema pallidum антитіл. До інактивованим трепонема додають оброблену сироватку, а потім антитіла до імуноглобулінів, мічені флюоресцеина ізотіоцианатом.

  1) Реакцію оцінюють кількісно за інтенсивністю флюоресценції: «-» - негативна, «+ / -» - сумнівна, «+» - слабо позитивна, «+ +» - помірно позитивна, «+ + +» - позитивна, «+ + + + »- різко позитивна. При сифілісі та інших захворюваннях, викликаних трепонемами (беджель, фрамбезії і пінті), реакція, як правило, позитивна. У більшості лабораторій реакцію імунофлюоресценції-абсорбції проводять з усіма сироватками, які дали позитивну реакцію при постановці VDRL.

  2) Реакція імунофлюоресценції-абсорбції - найбільш інформативний серологической метод діагностики сифілісу на всіх стадіях. Діагноз первинного сифілісу за допомогою цього методу вдається поставити в 86%, вторинного - у 100%, раннього латентного - в 99%, пізнього латентного - в 96%, третинного - в 97% випадків. Проте реакція імунофлюоресценції-абсорбції не підходить для спостереження за хворими на сифіліс, оскільки вона залишається позитивною через кілька років після одужання, а іноді і протягом усього життя. Реакція імунофлюоресценції-абсорбції рідко буває хибнопозитивної. Сумнівні результати можливі у вагітних, літніх, хворих ВКВ та іншими коллагенозами і у наркоманів. Якщо реакція преципітації плазми з кардіоліпіновим антигеном позитивна, а реакція імунофлюоресценції-абсорбції слабо позитивна, останню повторюють щомісяця. Діагностично значущим вважається чотириразове підвищення титру антитіл до Treponema pallidum. Реакція імунофлюоресценції-абсорбції, як і реакція іммобілізації трепонем, не дозволяє відрізнити збудника сифілісу від інших трепонем.

  в. Реакція непрямої гемаглютинації технічно простіше, ніж реакція імунофлюоресценції-абсорбції. Реакцію непрямої гемаглютинації, як і інші трепонемні реакції, використовують для підтвердження результатів нетрепонемних тестів.

  м. Тест Рейтера - реакція зв'язування комплементу антитілами до антигену непатогенної трепонеми Рейтера - в даний час не застосовується.

  С. Лаймская хвороба вперше описана в 1975 р. серед жителів м. Лайма, штат Коннектикут, США. Збудник - Borrelia burgdorferi, переносники інфекції - кліщі. Характерні ознаки захворювання - хронічна мігруюча еритема та артрит, іноді відзначається ураження ЦНС і серця. Серодіагностики проводять за допомогою твердофазного ІФА та методу непрямої імунофлюоресценції, для підтвердження діагнозу застосовують імуноблотинг. Слід зазначити, що оцінка результатів серологічних досліджень утруднена. Так, наявність антитіл достовірно свідчить лише про перенесеної інфекції, а в гострій стадії захворювання і на тлі антимікробної терапії антитіла можуть не виявлятися.

  Т. Зворотні тифи. Збудниками цих захворювань є кілька видів боррелий - спіралеподібних мікроорганізмів, окрашивающихся аніліновими барвниками. Переносниками епідемічного поворотного тифу служать воші, а ендемічного поворотного тифу - кліщі. Лабораторна діагностика зворотних тифів заснована на виявленні збудників у товстій краплі або мазку крові, пофарбованому по Райту або Гімзою. Для епідемічного поворотного тифу характерні наступні серологічні ознаки: присутність агглютинирующих антитіл до штаму Proteus OX-K в титрі 1:40 і вище (у 90% хворих), позитивна реакція зв'язування комплементу (у 50% хворих), реакція лізису боррелий сироваткою у розведенні не менше 1:100 (у 50-60% хворих). Для ендемічного поворотного тифу перераховані лабораторні ознаки менш характерні.

  У. Лептоспіроз передається людині від тварин. Захворювання може протікати як в легкій, так і у важкій формі, для якої характерна висока лихоманка. Важка форма лептоспірозу може закінчитися смертю. В якості стандартного методу діагностики лептоспірозу зазвичай використовується реакція аглютинації лептоспір сироваткою хворого. Це високочутливий і специфічний метод діагностики, однак для його виконання необхідні живі мікроорганізми, що належать до певних серотипам лептоспір. Агглютинирующие антитіла починають з'являтися через 6-12 діб після зараження, через 3-4 тижнів їх титр стає максимальним. Для діагностики лептоспірозу, крім того, застосовують твердофазний ІФА і реакцію непрямої гемаглютинації. Останній метод дозволяє відрізнити поточну інфекцію від недавно перенесеної.

  VII. Діагностика грибкових інфекцій. Діагноз грибкових інфекцій заснований на виділенні збудника в посівах крові або біоптатів тканин. Грибкові інфекції часто виникають при імунодефіцитах, серологічні реакції при яких нерідко бувають негативними. Слід враховувати, що антитіла до збудників грибкових інфекцій часто виявляються і у здорових, що проживають в районах з широким розповсюдженням грибів. Для діагностики деяких грибкових інфекцій застосовуються шкірні проби, засновані на алергічних реакціях уповільненого типу. Антиген зазвичай вводять у дозі 0,1 мл внутрішньошкірно у внутрішню поверхню передпліччя (див. табл. 22.2). Реакцію оцінюють через 48-72 год по діаметру еритеми і папули в місці ін'єкції. Шкірні проби стають позитивними через 2-10 тижнів після зараження, серологічні реакції - в більш ранні терміни.

  А. Аспергиллез. Aspergillus spp. - Повсюдно поширені гриби, що викликають інфекцію з різноманітними проявами. Діагноз зазвичай ставлять на підставі результатів посіву біоптатів уражених органів. Серодиагностика аспергиллеза заснована на методах иммунодиффузии і твердофазного ІФА. Діагноз алергічного бронхолегеневого аспергиллеза ставлять при виявленні антитіл до збудника і позитивної шкірної пробі з Aspergillus fumigatus, заснованої на алергічної реакції негайного типу.

  Б. Північноамериканський бластомікоз. Це захворювання поширене у північно-західних, південно-східних, південних і центральних штатах США, особливо в басейнах річок Міссісіпі та Огайо. Інфекція проявляється ураженням шкіри або внутрішніх органів. Для діагностики північноамериканського бластомікоз застосовуються методи иммунодиффузии, реакція зв'язування комплементу, РИА і твердофазних ІФА. Однак через велику кількість хибнопозитивних і хибнонегативних результатів ці методи не дозволяють з точністю поставити або виключити діагноз. Антитіла до збудника північноамериканського бластомікоз перехресно реагують із збудниками кокцідіоідоза, гістоплазмозу і паракокцидіоїдоз.

  В. Кандидоз. Серодиагностика ненадійна і зазвичай не проводиться.

  Г. Кокцідіоідоз підозрюють при ураженні легень, головного мозку або дисемінований інфекції у жителів районів з широким розповсюдженням збудника інфекції або осіб, що відвідали ці райони (наприклад, південно-західну частину США). На початковому етапі обстеження застосовують шкірну пробу з антигенами збудника, яка стає позитивною через 2-3 тижнів після появи симптомів захворювання і може залишатися позитивною протягом багатьох років. При генералізованої інфекції шкірні проби часто бувають негативними. Реакція зв'язування комплементу і методи, засновані на реакціях преципітації і аглютинації, дозволяють виявити антитіла до різних антигенів збудника. Ці методи доповнюють один одного, в поєднанні їх чутливість перевищує 90%.

  1. Реакція преципітації дозволяє виявити IgM, які з'являються на ранніх стадіях інфекції і при її загостренні.

  2. Реакція зв'язування комплементу дозволяє виявити IgG, які з'являються на пізніх стадіях захворювання і можуть бути присутніми в сироватці через багато років після перенесеного кокцідіоідоза. Одночасне виявлення IgG в титрі від 1:2 до 1:8 за допомогою реакції зв'язування комплементу і методів иммунодиффузии свідчить про гостру або недавно перенесеної інфекції. Виявлення IgG в титрі 1:16 і більше характерно для генералізованої інфекції. Титр антитіл визначають повторно через 3 тижні. При безсимптомно протікає легеневій формі кокцідіоідоза або легеневій формі, що супроводжується утворенням каверн, антитіла можуть не виявлятися. Серологічні реакції бувають також негативними при дослідженні СМР хворих кокцідіоідозним менінгітом.

  3. Методи иммунодиффузии по чутливості і специфічності порівняти з реакцією зв'язування комплементу.

  4. Реакція латекс-аглютинації високочутлива, але менш специфічна і застосовується на початкових етапах обстеження.

  Д. криптококоз - захворювання з групи глибоких мікозів, що виявляється поразкою ЦНС, легенів або генералізованої інфекцією. Найбільш характерний прояв криптококкоза - менінгоенцефаліт. Особливо високий ризик цієї інфекції при імунодефіциті. Антитіла до збудника в сироватці не визначають, оскільки вони виявляються лише у третини хворих з криптококовий менінгіт і іноді присутні в сироватці здорових. Діагноз ставлять при виявленні Cryptococcus neoformans у посівах і мазках, контрастували тушшю, а також при виявленні криптококових антигенів в біологічних рідинах, насамперед СМЖ. Високочутлива і специфічна реакція латекс-аглютинації з антитілами до полісахаридних антигенів капсули Cryptococcus neoformans. Вона дає хибнопозитивні результати лише в присутності ревматоїдного фактора.

  Е. Гістоплазмоз. Ця інфекція особливо поширена в центральній частині США. Захворювання може протікати з переважним ураженням легень або у вигляді генералізованої інфекції, дається взнаки передусім на менінгіт і гепатоспленомегалією. Діагноз заснований на результатах посіву. Для нього зазвичай використовують біоптати ураженого органу. Серологічні методи (реакція зв'язування комплементу і методи иммунодиффузии) підтверджують діагноз: значущим вважається не менш ніж чотириразове підвищення титру антитіл або високий титр при одноразовому дослідженні сироватки. Однак результати серологічних досліджень треба оцінювати тільки в сукупності з клінічною картиною, оскільки реакція зв'язування комплементу часто буває хибнопозитивної. Останнє пояснюється тим, що антитіла до гістоплазми перехресно реагують із збудниками аспергиллеза і північноамериканського бластомікоз. У районах поширення гістоплазм антитіла до них виявляються і в сироватці здорових. При гістоплазмозі у хворих на ВІЛ-інфекцією антитіла до збудника часто відсутні.

  Ж. паракокцидіоїдоз - захворювання, поширене в Латинській Америці. Протікає хронічно, характеризується ураженням легень, шкіри, слизових і збільшенням лімфовузлів. Для діагностики захворювання застосовують реакцію зв'язування комплементу, методи иммунодиффузии і твердофазних ІФА. Ці методи інформативні і доступні більшості лабораторій.

  З. Споротрихоз. Захворювання найчастіше проявляється ураженням шкіри, підшкірної клітковини (з утворенням абсцедирующих вузлів), кісток, суглобів, збільшенням лімфовузлів і пневмонією. Збудник живе в грунті і на деяких видах рослин. Зараження звичайно відбувається через пошкоджену шкіру. Діагноз заснований на виявленні збудника в посіві синовіальної рідини і біоптату уражених ділянок шкіри та інших тканин. Серологічні методи діагностики не отримали широкого розповсюдження.

  VIII. Діагностика паразитарних захворювань. Серодиагностика паразитарних захворювань малоинформативна, оскільки не дозволяє відрізнити гостру інфекцію від раніше перенесеної. Серологічне дослідження допомагає поставити діагноз лише при деяких гельмінтозах. При підозрі на паразитарне захворювання рекомендується консультація у Відділі паразитології Центру з контролю захворюваності.

  А. Діагностика протозойних інфекцій

  1. Амебіаз - інфекція, викликана Entamoeba histolytica. Механізм зараження фекально-оральний. Зараження відбувається при вживанні забруднених їжі і води. Прояви захворювання можуть бути різними - від безсимптомної інфекції до важкої поразки кишечника, абсцесу печінки та головного мозку. У діагностиці амебіазу застосовують метод непрямої імунофлюоресценції, реакцію непрямої гемаглютинації, подвійну радіальну іммунодіффузія, твердофазний ІФА. Високий титр антитіл в реакції непрямої гемаглютинації характерний для важких випадків інфекції та амебних абсцесів печінки. При безсимптомній інфекції та легких формах захворювання чутливість серологічних методів невисока.

  2. Бабезиоз. Це захворювання викликають найпростіші роду Babesia, що паразитують в еритроцитах. Переносники інфекції - кліщі. Бабезиозе зазвичай хворіють тварини, зрідка відзначаються випадки зараження людей. У людини захворювання характеризується лихоманкою, нездужанням і анемією. Надійні серологічні методи діагностики бабезиоза поки не розроблені. Діагноз ставлять при виявленні збудника в мазках крові.

  3. Сонна хвороба. Збудники - Trypanosoma gambiense і Trypanosoma rhodesiense, переносник інфекції - муха це-це. Захворювання зазвичай починається з загальних симптомів, на пізніх стадіях розвивається менінгоенцефаліт. У період розпалу захворювання діагноз ставлять при виявленні паразита в мазках крові та кісткового мозку. Нещодавно розроблені серологічні методи діагностики захворювання, засновані на методі непрямої імунофлюоресценції і твердофазном ІФА.

  4. Хвороба Чагаса - гостре або хронічне захворювання, викликане Trypanosoma cruzi. Людині передається при укусі клопів сімейства Reduviidae. Основні прояви хвороби - лихоманка, нездужання, збільшення лімфовузлів, ахалазія кардії, збільшення розмірів стравоходу, мегаколон, гепатоспленомегалія і дилатаційна кардіоміопатія. У діагностиці хвороби Чагаса використовуються реакції преципітації, зв'язування комплементу та непрямої гемаглютинації, метод імунофлюоресценції, РИА і твердофазних ІФА. Застосування моноклональних антитіл дозволило знизити число хибнопозитивних результатів, обумовлених перехресними реакціями із збудниками лейшманіозу.

  5. Лейшманіоз. Збудники - внутрішньоклітинні паразити роду Leishmania, переносниками яких служать москіти. Лейшмании паразитують в макрофагах шкіри і внутрішніх органів. Розрізняють 3 клінічні форми захворювання: шкірну, висцеральную та шкірно-слизову. Шкірна проба з антигеном збудника дозволяє поставити діагноз при будь-якій формі захворювання. Шкірні проби стають позитивними не пізніше ніж через 3 міс після початку лейшманіозу. У діагностиці лейшманіозу, крім того, використовуються методи иммунодиффузии, імунофлюоресценції і реакція непрямої гемаглютинації. Діагноз шкірного та шкірно-слизового лейшманіозу ставлять при виявленні збудника в біоптаті шкіри і при позитивній шкірній пробі з антигеном лейшманий.

  6. Малярію викликають найпростіші роду Plasmodium: Plasmodium falciparum, Plasmodium vivax, Plasmodium malariae і Plasmodium ovale. Переносники інфекції - комарі роду Anopheles. Діагноз ставлять при виявленні збудника в товстій краплі або мазку крові хворих. Найбільш інформативний серологічний метод діагностики малярії - метод непрямої імунофлюоресценції. Виявлення антитіл в титрі 1:64 і більше вказує на нещодавнє зараження малярією. Однак у більшості клінічних лабораторій цей метод поки не використовується. При проведенні масових досліджень застосовують реакцію непрямої гемаглютинації. Позитивним вважається титр антитіл 1:16 і більше. За допомогою реакції непрямої гемаглютинації можна визначити вид збудника малярії.

  7. Пневмоцистна пневмонія. Збудник - Pneumocystis carinii. Хворіють зазвичай новонароджені, хворі з первинними і вторинними імунодефіцитами, в тому числі зумовленими імуносупресивної терапією. Діагноз заснований на мікроскопії матеріалу, отриманого за допомогою пункційної коникотомии, бронхоальвеолярного лаважу або відкритої біопсії легені. Забарвлення мазків проводять за методом Гоморі. Серодиагностика не застосовується.

  8. Токсоплазмоз. Збудник - Toxoplasma gondii. Зараження відбувається через фекалії кішок і при вживанні сирого м'яса. Інфекція нерідко протікає безсимптомно, але може проявлятися лихоманкою, спленомегалією, збільшенням лімфовузлів. У хворих з імунодефіцитами токсоплазмоз проявляється важкими міокардитом, пневмонією, енцефалітом, менінгітом або менінгоенцефалітом. Гостра інфекція під час вагітності може призвести до уродженому токсоплазмозу. Діагноз токсоплазмозу зазвичай ставлять за результатами серологічного дослідження. Найчастіше використовуються метод непрямої імунофлюоресценції і реакція непрямої гемаглютинації. Діагностично значущим вважається не менш ніж чотириразове підвищення титру антитіл. Для виявлення IgM до збудника застосовуються методи прямої і непрямої імунофлюоресценції і твердофазних ІФА. Антитіла до збудника з'являються через 1-2 тижнів після початку захворювання, їх титр зростає протягом приблизно 6 тижнів (до 1:600 ??і вище), потім знижується протягом 6-8 міс. IgG до токсоплазм можуть зберігатися протягом усього життя.

  а. Метод непрямої імунофлюоресценції - найбільш поширений метод діагностики токсоплазмозу, що дозволяє виявити IgG і IgM до Toxoplasma gondii. Титр антитіл, що виявляються за допомогою цього методу, відповідає титру антитіл, що виявляються в реакції Сейбіна-Фельдмана. Діагностично значущим вважається титр 1:64 і вище.

  б. Реакція Сейбіна-Фельдмана. Суть методу полягає в наступному. Ядро і цитоплазма клітин Toxoplasma gondii, не покритих антитілами, у присутності метиленового синього фарбуються в темно-синій колір. Клітини збудника, оброблені сироваткою, що містить антитіла до нього, не фарбуються цим барвником. Діагностично значущим вважається не менш ніж чотириразове підвищення титру антитіл. У період розпалу інфекції титр антитіл, виявлених в реакції Сейбіна-Фельдмана, зазвичай досягає 1:1000 і більше. Цю реакцію в даний час майже не застосовують, оскільки вона проводиться з живими збудниками. Воліють використовувати метод непрямої імунофлюоресценції.

  в. Реакція непрямої гемаглютинації - простий, точний і недорогий серологічний метод, який часто застосовується для виявлення IgG до токсоплазм. У більшості лабораторій діагностично значущим вважається титр 1:256 і більше. Ця реакція може залишатися позитивною протягом декількох років.

  м. Реакція зв'язування комплементу застосовується рідко, оскільки її оцінка не стандартизована. Позитивним вважається титр антитіл не менше 1:4. У період розпалу захворювання він зазвичай підвищується до 1:32. Реакція зв'язування комплементу залишається позитивною протягом декількох місяців або років.

  Б. Серодиагностика нематодозів заснована на виявленні паразитів і їх яєць в калі. Токсокароз зустрічається в основному у дітей дошкільного віку, механізм зараження - фекально-оральний. Збудники токсокароза - Toxocara canis і Toxocara cati - найчастіша причина вісцеральної форми синдрому larva migrans. Личинки паразита з ШКТ потрапляють у кров і розносяться по організму. Характерні симптоми - лихоманка, блідість, кашель, задишка, сухі хрипи, гепатомегалія, які зазвичай супроводжуються еозинофілією, гіпергаммаглобулінеміей і підвищенням титру ізогемагглютінінов. Зрідка відзначаються епілептичні припадки. Оскільки яйця токсокар майже ніколи не виявляються в калі, діагноз токсокароза ставлять при виявленні в сироватці антитіл до паразита. Готові набори для твердофазного ІФА можна отримати в Центрі з контролю захворюваності.

  IX. Діагностика внутрішньоутробних інфекцій. До числа особливо небезпечних внутрішньоутробних інфекцій відносяться краснуха, інфекції, викликані цитомегаловірусом і вірусом простого герпесу, сифіліс та токсоплазмоз. Перебіг інфекції у новонародженого може бути різним - від безсимптомного до важкого, що супроводжується ураженням внутрішніх органів до моменту народження або в період новонародженості. Імунна відповідь плода на інфекцію проявляється підвищенням синтезу IgM, які можна виявити в пуповинній крові. Про внутрішньоутробної інфекції слід думати, якщо рівень IgM в пуповинної крові перевищує 20 мг%. Оскільки підвищення рівня IgM в пуповинної крові може бути обумовлено попаданням в неї материнської крові, рівень IgM визначають повторно після народження.

  А. Вроджена краснуха. Діагноз ставлять при виявленні мікроцефалії, катаракти, вроджених вад серця, гепатоспленомегалии та інших проявів вродженої краснухи у новонародженого, мати якого перенесла краснуху (в тому числі якщо серологічні дослідження не проводилися) в I триместрі вагітності. Нижче перераховані дослідження, що підтверджують діагноз.

  1. Виділення вірусу в культурі клітин. Для цього використовують виділення з носа і сечу новонародженого.

  2. Рівень IgM в пуповинної крові більше 20 мг%.

  3. Підвищення титру IgG до збудника в реакції гальмування гемаглютинації. Якщо IgG материнського походження, їх титр поступово знижується. При вродженої інфекції титр антитіл залишається підвищеним більше 6 міс.

  4. Виявлення в сироватці новонародженого IgM до вірусу краснухи. Зазвичай титр цих антитіл швидко знижується.

  Б. Вроджена цитомегаловірусна інфекція

  1. Найбільш надійний діагностична ознака - виділення вірусу в культурі клітин. Для цього використовують сечу або мазок із зіву новонародженого.

  2. Чотириразове зростання титру антитіл до цитомегаловірусу в сироватці новонародженого в порівнянні з сироваткою, отриманої з пуповинної крові, також підтверджує діагноз. Зниження титру антитіл свідчить про те, що вони мають материнське походження.

  3. В даний час розробляються серологічні методи виявлення цитомегаловірусу в пуповинної крові.

  В. Вроджена інфекція, викликана вірусом простого герпесу. Діагноз підтверджується при виділенні вірусу в культурі клітин (для цього використовують зішкріб з уражених ділянок шкіри) і чотириразовому підвищенні титру антитіл протягом захворювання. Зниження титру антитіл свідчить про те, що вони материнські.

  Г. Природжений сифіліс. Діагноз ставлять на підставі характерних клінічних ознак раннього вродженого сифілісу: сифілітичний риніт, сифілітична пухирчатка, анемія і гепатоспленомегалія - ??і результатів серологічних досліджень. Останні включають як нетрепонемні (VDRL), так і трепонемні (реакція імунофлюоресценції-абсорбції) тести. Позитивні результати цих тестів можуть бути обумовлені домішкою материнських антитіл. Якщо антитіла материнські, то їх титр в материнській крові звичайно вище, ніж у пуповинній. У відсутності симптомів лікування відкладають до повторного визначення антитіл за допомогою VDRL. Його проводять через 1 міс - не менше ніж чотириразове підвищення титру антитіл свідчить про природжений сифіліс. Розроблений недавно метод визначення IgM до Treponema pallidum в пуповинної крові не знайшов широкого застосування.

  1. Підвищення титру антитіл до Treponema pallidum в пуповинної крові (за результатами VDRL і реакції імунофлюоресценції-абсорбції) не дозволяє з точністю поставити діагноз вродженого сифілісу, а може лише свідчити про сифіліс у матері.

  2. Якщо результати VDRL і реакції імунофлюоресценції-абсорбції у матері є позитивними і вона не лікувалася або пройшла неповний курс лікування сифілісу, новонародженому проводять люмбальную пункцію і ставлять VDRL з СМЖ - при позитивному результаті проводять лікування нейросифилиса.

  3. При підозрі на вроджений сифіліс в відсутність його клінічних проявів VDRL проводять щомісяця протягом 3 міс. При чотириразовому підвищенні титру антитіл до Treponema pallidum починають лікування сифілісу.

  Д. Вроджений токсоплазмоз. Зараження плода зазвичай відбувається в III триместрі вагітності, в I триместрі ризик зараження мінімальний. Антитіла до збудника в сироватці новонародженого, виявлення за допомогою реакції Сейбіна-Фельдмана або методу непрямої імунофлюоресценції, можуть мати материнське походження. Слід враховувати, що материнські IgG виявляються в крові дитини протягом 6-12 міс. Діагноз вродженого токсоплазмозу ставлять на підставі клінічної картини і наступних серологічних показників.

  1. Рівень IgM до Toxoplasma gondii в пуповинної крові не менше 20 мг%.

  2. Постійно високий титр IgG, що визначаються за допомогою методу непрямої імунофлюоресценції.

  3. Підвищення титру IgM до 1:2 і більше в сироватці новонародженого. 
« Попередня
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Імунологічні методи діагностики інфекційних захворювань"
  1.  Адельман Д.. Імунологія, 1993
      Введення в імунологію. Основні уявлення про алергічні реакції негайного типу. Повітряні алергени і несприятливі фактори навколишнього середовища. Лікування алергічних захворювань. Алергічні захворювання носа та вуха. Захворювання очей. Бронхіальна астма. Хвороби легенів. Алергічні захворювання шкіри. Кропив'янка і набряк Квінке. Анафілактичні реакції. Алергія до отрут
  2.  Ревматоїдний артрит. ХВОРОБА БЕХТЕРЕВА
      Ревматологія як самостійна науково-практична дисципліна формувалася майже 80 років тому у зв'язку з необходімостио більш поглибленого вивчення хвороб цього профілю, викликаної їх широким розповсюдженням і стійкою непрацездатністю. У поняття "ревматичні хвороби" включають ревматизм, дифузні захворювання сполучної тканини, такі як системний червоний вовчак, системна
  3.  ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТ
      Гломерулонефрит є основною проблемою сучасної клінічної нефрології, найчастішою причиною розвитку хронічної ниркової недостатності. За даними статистики, саме хворі на гломерулонефрит становлять основний контингент відділень хронічного гемодіалізу та трансплантації нирок. Термін "гломерулонефрит" вперше запропонував Klebs, який застосував його в "Керівництві по
  4.  СІСГЕМНАЯ ЧЕРВОНА ВІВЧАК
      Відповідно до сучасних уявлень системний червоний вовчак (ВКВ) є хронічне рецидивуюче полісиндромне захворювання переважно молодих жінок і дівчат, що розвивається на тлі генетично зумовленої недосконалості імунорегуляторних процесів, що призводить до неконтрольованої продукції антитіл до власних клітин і їх компонентів, з розвитком
  5.  ПАТОГЕНЕЗ
      Шляхи проникнення мікроорганізмів у плевральну порожнину різні. Безпосереднє інфікування плеври з субплеврально розташованих легеневих вогнищ. Лімфогенне інфікування плеври може бути обумовлено ретроградним струмом тканинної рідини з глибини до поверхні легені. Гематогенний шлях має менше значення і відбувається через формування вогнищ у субплевральной шарі легкого. Пряме
  6.  ХРОНІЧНИЙ ПАНКРЕАТИТ
      Хронічний панкреатит - прогресуюче хронічне запальне захворювання підшлункової залози, що виявляється хронічним запально-дегенеративним процесом залозистої тканини, в результаті якого розвивається склероз органу з втратою його екзо-і ендокринної функції. ЕТІОЛОГІЯ І ПАТОГЕНЕЗ Хронічний панкреатит є поліетіологічним захворюванням. Гострий панкреатит може
  7.  Багатоплідної вагітності. ПАТОЛОГІЯ навколоплідних СЕРЕДОВИЩА (маловоддя, багатоводдя)
      Багатоплідної вагітності Багатоплідної називають вагітність двома або більшою кількістю плодів. При наявності вагітності двома плодами говорять про двійні, трьома - про трійню і т.д. Кожен з плодів при багатоплідній вагітності називається близнюком. Пологи двійнею зустрічаються один раз на 87 пологів, трійнею - один раз на 872 (6400) двійнят, четвернею - один раз на 873 (51200) трійнят і т.д. (Згідно
  8.  Плацентарна недостатність Гіпоксія плоду І асфіксія немовляти
      ХРОНІЧНА фетоплацентарної недостатності Фетоплацентарна недостатність (ФПН) складає в структурі причин перинатальної смертності більше 20%. Багаторічні спостереження багатьох авторів за розвитком дітей, народжених матерями з діагностованою ФПН, дозволили прийти до висновку, що вказана патологія зумовлює не тільки різке збільшення перинатальної смертності, а й численні
  9.  Гнійно-запальні післяпологові ЗАХВОРЮВАННЯ
      Післяпологові інфекційні захворювання - захворювання, які спостерігаються у породіль, безпосередньо пов'язані з вагітністю та пологами і обумовлені бактеріальною інфекцією. Інфекційні захворювання, виявлені в післяпологовому періоді, але патогенетично не зв'язані з вагітністю та пологами (грип, дізентірея та ін), до групи післяпологових захворювань не відносять. ЕТІОЛОГІЯ І ПАТОГЕНЕЗ
  10.  Реферат на тему: АКУШЕРСЬКІ ДОСЛІДЖЕННЯ МЕТОДИ ОБСТЕЖЕННЯ ВАГІТНИХ І ПОРОДІЛЬ
      Мета заняття: вивчити і практично освоїти методи діагностики вагітності, обстеження вагітних, різні методи визначення терміну вагітності та пологів. Студент повинен знати: ознаки вагітності (сумнівні, ймовірні, достовірні), зміна величини матки в залежності від терміну вагітності, розміри великого таза, чотири прийоми зовнішнього акушерського дослідження, поняття "малий
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека