Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаВетеринарія
« Попередня Наступна »
Балджи Ю.А., Майканом Б.С ., Жанабаева Д.К.. Ветеринарно-санітарна експертиза продуктів тваринництва при контамінації сторонніми речовинами., 2009 - перейти до змісту підручника

Хіміко-токсикологічні дослідження м'яса, м'ясопродуктів, молока і меду

Мета заняття: Освоїти методики хіміко-токсикологічного дослідження токсичних елементів, залишкових кількостей пестицидів в продуктах тваринництва



Завдання:

1. Вивчити методи діагностики отруєнь

2. Визначити вміст пестицидів агар-дифузійним мето-дом

3. Визначити наявність хлорорганічних пестицидів (ХОП) хро-матографіей в тонкому шарі (ТШХ)

4. Визначити наявність фосфорорганічних пестицидів (ФОП) ензімо-хроматографією



Об'єкти дослідження. Зразки м'язової тканини різних видів забійних тварин і птиці; субпродукти I і II категорій, м'ясні продукти різних асортиментних груп; харчові тваринні жири.



Методичні вказівки. Бурхливий розвиток хімічної промисло-лінощів, впровадження хімічної технології в багато галузей народного господарства та сферу побуту створюють забруднення середовища проживання і серйозну загрозу здоров'ю населення. В останні десятиліття відзначається надзвичайно широке використання різноманітних хімічних засобів і препаратів в сільськогосподарському виробництві, що пов'язано з можливістю потрапляння їх залишків в корми, і, в кінцевому рахунку, в продукти харчування тваринного і рослинного походження. При обробках худоби та птиці пестициди виявляють в молоці, м'ясі, яйцях і жирі тварин. Вміст залишкових кількостей хімічних речовин в продуктах харчування залежить від їх фізико-хімічних властивостей, стійкості до дії біологічних і абіотичних факторів, способів і кратності обробок, метеорологічних умов і термінів очікування з моменту застосування. З метою охорони здоров'я людини необхідний дієвий контроль з виявлення залишкових кількостей токсичних компонентів у продуктах тваринництва широким колом лабораторій.

Лабораторна робота з визначення токсикантів є ком-плексної і включає в себе кілька етапів, кожен з яких може використовуватися як самостійно, так і в комплексі. Важкі метали і миш'як в біологічних об'єктах міцно пов'язані з білками. Для їх визначення необхідно зруйнувати ці комплекси (альбумінати). Мета досягається сухій, мокрій мінералізацією або кислотної екстракцією (у разі аналізу жирових продуктів) досліджуваного матеріалу.

Спосіб сухої мінералізації заснований на повному розкладанні органічних речовин шляхом спалювання зразка сировини або продукту в електропечі при контрольованому температурному режимі. Цей спосіб рекомендується використовувати при підготовці проб всіх видів м'ясної сировини і продуктів, крім жирів, для визначення вмісту свинцю, кадмію, міді, цинку методом атомно-абсорбційної спектрометрії.

Спосіб мокрою (кислотної) мінералізації заснований на повному руйнуванні органічних речовин проби продукту при нагріванні з сірчаної та азотної концентрованими кислотами з додаванням хлорної кислоти або пероксиду водню і може бути використаний для дослідження всіх видів м'ясної сировини та продуктів , крім тваринних жирів.

Спосіб мокрою мінералізації застосовується при підготовці проб для якісних реакцій виявлення свинцю і цинку, якісного та кількісного визначень миш'яку, визначення олова в м'ясній сировині і продуктах, за винятком жирових, а також для визначення вмісту міді у всіх видах продуктів, включаючи жири.

Спосіб кислотної екстракції (неповної мінералізації) заснований на екстракції токсичних елементів з проби продукту при кип'ятінні з розведеними розчинами соляної або азотної кислоти. Спосіб може бути використаний при підготовці проб для визначення вмісту в тваринних жирах міді колориметричним методом, а також інших токсичних елементів методами атомно-абсорбційної спектроскопії та вольтамперометрии.

Рекомендації щодо вибору конкретних методів визначення токсичних елементів у м'ясі і м'ясних продуктах та відповідних способів підготовки проб наведені в таблиці 3.

При високому вмісті токсичних металів і миш'яку в м'ясі та продуктах забою тварин їх присутність можна виявити при проведенні з мінералізату нескладних якісних кольорових або інших специфічних реакцій.

Методи якісного виявлення свинцю в мінералізаті осно-вани на його розчиненні в ацетаті амонію з подальшою постановкою кольоровій реакції з дитизоном або мікрокристалоскопічних реакцій.

Метод виявлення міді заснований на екстрагуванні її з міні-ралізата хлороформом у вигляді діетілдітіокарбаміната міді, наступного витіснення з цього з'єднання у водний шар ртуттю, де вона і виявляється відповідними кольоровими реакціями.

Метод виявлення цинку заснований на екстракції цинку з мінералізату хлороформом, зв'язуванні іонів кадмію і міді (які заважають виявленню цинку) тиосульфатом натрію або сечовиною, освіті пофарбованого з'єднання цинку з дитизоном - дітізоната цинку.

Метод якісного та кількісного визначення миш'яку (по Зангер-Блеку) заснований на відновленні миш'яку до мишьяковістого водню AsH3, який при взаємодії з хлоридом HgCl2 або бромідом ртуті HgBr2 утворює забарвлене в жовтий або жовтувато-коричневий колір з'єднання .



Таблиця 3 - Методи визначення токсичних елементів у м'ясі і м'ясних

продуктах



Кількісне визначення свинцю нефелометріческім методом грунтується на отриманні сульфату свинцю, розчиненні його в ацетаті амонію і наступному взаємодії з хроматів калію, що супроводжується утворенням малорастворимого у воді хромату свинцю РbСrO4.

Атомно-абсорбційна спектрометрія заснована на вимірюванні поглинання електромагнітного випромінювання атомним «парою» аналізованого речовини. Різниця інтенсивності випромінювання до і після проходження через аналізований зразок вимірюють фотометрически.

Полярографический метод визначення токсичних елементів заснований на попередній сухої мінералізації проби продукту, отриманні розчину мінералізату з додаванням фонового електроліту, проведенні аналізу в електролізері, отриманні полярографічних кривих і вимірі висоти піків. Для кількісного визначення металів використовують метод добавок.

Практичне значення мають і різні колориметрические методи визначення токсичних елементів.

Наприклад, колориметричний метод визначення ртуті заснований на деструкції аналізованої проби м'яса або м'ясних продуктів сумішшю азотної та сірчаної кислот, осадженні ртуті иодидом міді і наступному колориметрическом визначенні у вигляді тетраіодомеркурата міді шляхом візуального порівняння зі стандартною шкалою. Мінімальна обумовлена ??маса ртуті становить 0,15 мкг в колоріметріруемом обсязі проби.

Фотоколориметричні методи визначення міді і миш'яку в м'ясі та м'ясних продуктах засновані на мінералізації проби і після-ступному вимірі інтенсивності забарвлення розчину відповідного комплексного з'єднання: міді - з діетілді-тіокарбамати натрію (жовтого кольору), миш'яку - з діетілді-тіокарбамати срібла в хлороформі.

Необхідний суворий контроль залишкових кількостей ХОП, ФОП та їх метаболітів в продуктах тваринництва, зокрема у м'ясі і м'ясних продуктах, на відповідність санітарно-гігієнічним нормам. Відповідно до вимог безпечний рівень вмісту хлорорганічних пестицидів (ДДТ та його метаболітів, гексахлороциклогексану) в продукті повинен становити не більше 0,1 мг / кг продукту, а гранично допустима концентрація більшості хлорорганічних, фосфорорганічних і триазинове пестицидів - 0,01-1 мг / кг продукту.

Метод ТШХ для визначення залишкових кількостей пестицидів у харчових продуктах вважається перспективним з точки зору експресності і вибірковості. Його широко використовують для контролю за залишковим вмістом пестицидів у харчовій сировині і готової продукції.

Метод заснований на екстрагуванні препаратів з досліджуваного матеріалу органічними розчинниками, очищенні екстрактів і наступному хроматографування в тонкому шарі сорбентів. Рухомим розчинником служить гексан або гексан в суміші з ацетоном. Місця локалізації пестицидів виявляють після обприскування платівок розчином аміакати срібла з наступним ультрафіолетовим опроміненням пластинок «Силуфол», що містять о-толуидин. Кількісне визначення проводять візуальним порівнянням або виміром площ плям проби і стандартних розчинів. Цим методом можна визначити ДДТ, гексахлоран, альдрин, кельтан, гептахлор, метоксихлор, ефір-сульфонат та інші препарати. Найменша вміст пестициду, що виявляється в м'ясі, органах і жирі, 0,02 мг / кг.

Визначення ФОП ензімохроматографіческім методом (метод М.В. Письмовій) засновано на екстрагуванні ФОП з досліджуваної проби органічним розчинником, очищенню екстракту охолодженим ацетоном та визначенні препарату на платівці методом хроматографії в тонкому шарі з ферментним проявом без активації або після активації. Фосфорні (ДДВФ, дибром тощо) і тіофосфорної ефіри (ріцід, ціодрін та ін) визначають без активації, а тіофосфорнокіслие ефіри (метафос, метілнітрофос, піразофос та ін), дітіофосфати (карбофос, фталофосу, фозалон, рогор та ін ) і ефіри фосфорної кислоти (хлорофос) необхідно попередньо активувати. Препарати, які пригнічують холіноестеразу, проявляються у вигляді білих плям на блакитному тлі.

Діагностика отруєнь (постмортального)

Патологогістологіческое зміни. У отруєних тварин вони характеризуються гістолімфоцітарной інфільтрацією, деструктивно-дистрофічними некробіотичними і некротичними явищами в печінці, нирках та інших внутрішніх органах і тканинах. Експериментальні дані А.В. Акулова, С.М. Євдокимова, В.А. Макарова та інших, отримані при отруєнні тварин карбаматні пестицидами в стерпних дозах показали, що в печінці при гістологічному дослідженні спостерігають застійні явища, крововиливи і інфільтрацію навколо портальних судин. На окремих ділянках органу відзначали декомплексацію (деструктивний некроз) печінкових балок по периферії часточок, виражену гістолімфоцітарную інфільтрацію і роздратування купферовских клітин. Нирки були кровонаповнення, просвіти нефронів розширені, спостерігалося збільшення порожнини Боуменовой капсули, і на тлі лимфоцитарной інфільтрації - атрезія мальпігієвих клубочків і навіть їх випадання. Для легких типові перибронхиальная інфільтрація гістолімфоцітарнимі елементами до утворення солітарних фолікулів, виражений ателектаз і в місцях ателектазу - помірна гістолімфоцітарная інфільтрація паренхіми органу. Селезінка наповнена червоною пульпою, зменшені або зовсім не проглядаються центри мальпігієвих тілець. Можливі зміни і в міокарді, які характеризуються роз'єднанням груп м'язових волокон, їх гістолімфоцітарной інфільтрацією і на окремих ділянках - втратою поперечної смугастість. У меншій мірі патогистологические зміни проявляються в м'язовій тканині. Проте, у випадках вимушеного забою тварин з важко протікають клінічними симптомами інтоксикації в м'язовій тканині можливі не-значний її набряк, згладжування міжм'язових просторів, гісто-лімфоцитарна інфільтрація ділянок сполучної тканини, а на поперечному зрізі бувають помітні відмінності тинкторіальних властивостей (різна здатність м'язів до фарбування).



Лабораторні дослідження пестицидів

Необхідні для підтвердження діагнозу на отруєння, визначення стану тварини перед забоєм, а також встановлення можливих залишкових кількостей отруйної чи токсичної речовини в м'ясі і ступінь його бактеріального обсіменіння.

Для дослідження на вміст залишків отруйної чи токсичний-ського речовини у ветеринарну лабораторію направляють проби ми-шечной, жировій тканині й печінці масою по 200 г. Якщо при вимушеному забої тварини проби беруть на місці забою, то необхідно ще взяти вміст преджелудков або шлунку.

Для бактеріологічного та біохімічного досліджень в лабораторію направляють частину м'язи згинача або розгинача передньої і задньої кінцівок довжиною не менше 8 см або шматок іншого м'яза розміром не менше 8x6x6 см, лімфатичні вузли (поверхневий шийний, зовнішній клубовий) з навколишнім їх сполучною і жировою тканиною, а також частку печінки з печінковим лімфатичним вузлом або жовчним міхуром, звільненим від жовчі, нирку і селезінку.

Щільні проби загортають у вощений або пергаментний папір, наклеюють етикетки, нумерують, загортають у загальний пакет, перев'язують шпагатом, пломбують або опечатують сургучною печаткою. Вміст шлунків або преджелудков поміщають у чисті сухі скляні банки. Упаковка повинна гарантувати цілісність доставляється в лабораторію матеріалу. Пересилати проби в лабораторію потрібно якомога швидше, так як час від взяття проби до початку аналізу може вплинути на результат дослідження.

На що відправляється матеріал складають супровідний доку-мент, в якому вказують вид тварини, час взяття проби, пере-чень зразків із зазначенням їх маси, характеру тари і упаковки, причини напрямки проб в лабораторію. Необхідно відзначити спостережувану клінічну картину отруєння, а також докладно описати патологоанатомічні зміни, виявлені в органах і тканинах. У випадках забою тварин після їх обробки пестицидами слід назвати застосовуваний препарат, кратність його застосування та дату останньої обробки худоби в господарстві. У супровідному документі вказують, на які отруйні речовини потрібно проводити аналіз. Супровідний документ підписує ветеринарний лікар або інша посадова особа, що направляє проби на дослідження.

  Хіміко-токсикологічні дослідження на отруйні речовини визначаються даними супровідного документа і результатом патологоанатомічного дослідження надісланого матеріалу. Якщо в супровідному документі не вказано, на які отруйні речовини проводити дослідження, то господарство запитують про те, які отрутохімікати застосовувалися останнім часом у тваринництві та рослинництві або які добрива могли послужити причиною отруєння тварин. Слід також з'ясувати склад раціону і якість кормів. Залежно від отриманих відомостей в кожному окремому випадку складається план проведення токсикологічного аналізу. Якщо причина отруєнь залишається невідомою, то в лабораторії спочатку досліджують вміст шлунка послідовно на солі важких металів, пестициди, алкалоїди, мікотоксини груповими методами з метою постановки діагнозу на отруєння, а потім - м'язову і жирову тканини і печінку на утримання отрут. Дослідження проводять з використанням офіційних методів, затверджених Міністерством охорони здоров'я. У відповіді лабораторії повинен бути вказаний метод, яким виявлено залишкові кількості отрути, і дані рекомендації з використання продуктів забою тварин.

  Біохімічне дослідження включає визначення величини рН м'яса і постановку реакції на пероксидазу; проби м'яса великої рогатої худоби досліджують додатково реакцією з нейтральним формаліном (формольного реакція). Біохімічне дослідження проб не слід проводити в день забою тварини, так як при незавершена процесі дозрівання м'яса можуть бути, отримані необ'єктивні показники. Рекомендується проби м'яса, призначені для біохімічного дослідження, звільняти від упаковки і при низьких плюсових температурах (в побутовому холодильнику) залишати до наступного робочого дня.

  Для визначення ФОП в біологічних об'єктах застосовують раз-ні аналітичні методи: спектрофотометрію, полярографії, кри-сталлоскопію, всі види хроматографії від колоночной до газожидкостной, а також ензимний і біологічний. З перерахованих найбільш доступними для широкого кола дослідників є ферментні та хроматографічні методи.

  Агар-дифузний метод (розроблений А.А. Непоклонова і В.К. Метелицею). Приготування середовища-агару. 16 р. агар-агару перемішують в 800 мл гарячої дистильованої води до повного розчинення, фільтрують на марлевий фільтр, охолоджують до 50 ° С, рН отриманої середовища коливається від 5,6 до 7,7. Для стабілізації середовища в неї додають 10% розчин їдкого натру: при рН 5,6-5,9 - 3 мл, при рН 6,3-6,7 - 0,5 мл, при рН 7,5-7,7 - 0,3 мл. Після перемішування середу витримують при кімнатній температурі в межах доби, потім розплавляють, доводячи температуру до 50 ° С і додають 100 мг бромтимолового синього, розчиненого в 2 мл 0,1 Н розчину їдкого натру, і додають 20 мл кінської сироватки, розведеної до 200 мл дистильованою водою. рН середовища доводять до 7,8-8,0 при температурі 50 ° С. Середовище розливають в чашки Петрі по 35 мл, товщина шару 5-6 мм.

  Екстракція пестицидів. Пробу масою 20 г ретельно подрібнюють, додають 20 мл хлороформу, перемішують, закривають пробкою і витримують при кімнатній температурі 2 години. Хлороформенний екстракт фільтрують на паперовий фільтр у випарювальну чашку і упарюють в струмі повітря при кімнатній температурі насухо. Залишок розчиняють в 1 мл етанолу або ацетону. ФОП, похідні тіо-і дітіофосфорних кислот об-ладают слабким інгібуючим дією на холіноестеразу in vitro, тому, окислюючи бромом, їх переводять у деревати, сильні інгібітори. При підозрі на отруєння хлорофосом ДДВФ, дібромом, амідофос, ціодріном проводити акцівацію екстракту бромом не слід.

  Проведення аналізу. У застиглому агарі кірковим свердлом діаметром 8-10 мм просвердлюють лунки в центрі чашки Петрі, в лунки вносять по 0,1 мл екстракту. Чашки закривають кришками і залишають на 18-20 годин при кімнатній температурі або ставлять на 6-8 годин в термостат при 38 ° С, потім поверхню агару заливають тонким шаром 0,5% водним розчином ацетилхоліну і ставлять на водяну лазня при 40 ° С на 30 хвилин. Наявність в екстракті ФОП виявляється появою навколо лунки синіх або синьо-зелених кіл на жовтуватому тлі агару чашки. Інтенсивність забарвлення і діаметр кола залежать від кількості пестициду в пробі. Якщо відомо, який ФОП викликав отруєння, то проводять кількісне визначення, порівнюючи діаметр пофарбованого кола навколо лунки досліджуваної проби з лунками зі стандартними розчинами ФОП. Але при цьому треба враховувати, що з проби вилучається близько 50% пестициду, отже, отриманий результат подвоюють. Однак цей метод є орієнтовним і в основному дозволяє дати висновок про присутність або відсутність інгібітора холінестерази в пробі. Метод неспецифичен, він виявляє всю групу ФОП. Для визначення конкретного пестициду або декількох, що знаходяться в пробі, необхідно додатково пробу досліджувати іншим методом із використанням газорідинної або тонкошарової хроматографії. Так як рідинна хроматографія доступна дуже оснащеним лабораторіям, метод тонкошарової хроматографії (ТШХ), доступний широкому колу дослідників.

« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
 Інформація, релевантна "Хіміко-токсикологічні дослідження м'яса, м'ясопродуктів, молока і меду "
  1. В
      + + + Вагіна штучна (лат. vagina - піхва), прилад для отримання сперми від виробників сільськогосподарських тварин. Метод застосування В. і. заснований на використанні подразників статевого члена, замінюють природні подразники піхви самки, для нормального прояви рефлексу еякуляції. Такими подразниками в В. і. служать певна температура (40-42 {{?}} C) її стінок,
  2. К
      + + + Каверна (від лат. Caverna - печера, порожнина), порожнина, що утворюється в органах після видалення некротичної маси. К. виникають (наприклад, при туберкульозі) в легенях. К. можуть бути закритими і відкритими при повідомленні їх з природним каналом. Див також Некроз. + + + Кавіози (Khawioses), гельмінтози прісноводних риб, що викликаються цестодами роду Khawia сімейства Garyophyllaeidae,
  3. П
      + + + Падевий токсикоз бджіл незаразна хвороба, що виникає при харчуванні бджіл (падевим медом і супроводжується загибеллю дорослих бджіл, личинок, а в зимовий час і бджолиних сімей. Токсичність падевого меду залежить від наявності в ньому неперетравних вуглеводів, алкалоїдів, глікозидів, сапонінів, дубильних речовин, мінеральних солей і токсинів, що виділяються бактеріями і грибами. Потрапляючи в середню
  4. Т
      + + + Таблетки (Tabulettae), тверді дозовані Лікарське форми, одержувані пресуванням. Мають вигляд круглих, овальних чи іншої форми пластинок або дисків. До складу Т. входять Лікарське та допоміжні речовини. В якості останніх (їх кількість не повинна перевищувати 20% від маси ліків, речовин) застосовують цукор, крохмаль, глюкозу, гідрокарбонат натрію, хлорид натрію, каолін, тальк і
  5.  Афлатоксини
      Афлатоксини найбільш широко поширені в тропічних країнах з вологим кліматом, таких, як Індія, Бразилія, Таїланд, Філіппіни. У зв'язку з розвитком світової торгівлі і значним імпортом Росією фуражного і продовольчого сировини проблема афлатоксікозов має певне значення і для нашої країни. За хімічною структурою афлатоксини відносяться до класу фу-рокумарінов. Група
  6.  Вимушений забій
      Переробку хворих тварин здійснюють відповідно до ветеринарним законодавством на м'ясокомбінатах. Для цього на підприємствах влаштовують санітарні бійні. Допускається переробка хворих тварин у загальних забійно-обробних цехах в окрему зміну або наприкінці робочого дня після видалення продуктів забою здорових тварин. Доставка хворих тварин на м'ясокомбінат для негайної
  7. Г
      + + + Габітус (лат. habitus - зовнішність, зовнішність), зовнішній вигляд тварини в момент дослідження. Визначається сукупністю зовнішніх ознак, що характеризують статура, вгодованість, положення тіла, темперамент і конституцію. Розрізняють статура (будова кістяка і ступінь розвитку мускулатури): сильне, середнє, слабке. Вгодованість може бути гарною, задовільною,
  8. Л
      + + + Лабільність у фізіології (від лат. Labilis - ковзний, нестійкий), функціональна рухливість, здатність нервової та м'язової тканин тваринного організму відтворювати за 1 сек максимальне число імпульсів (число електричних коливань) у повній відповідності з ритмом діючих на неї подразників; швидкість протікання в тканини циклів збудження, яким супроводжується її
  9. М
      + + + Магнезія біла, те ж, що магнію карбонат основний. + + + Магнезія палена, те ж, що магнію окис. магнію карбонат основний (Magnesii subcarbonas; ФГ), магнезія біла, в'яжучий і антацидний засіб. Білий легкий порошок без запаху. Практично не розчиняється у воді, що не містить вуглекислоти, розчинний у розведених мінеральних кислотах. Застосовують зовнішньо як присипку, всередину -
  10.  ІСТОРІЯ РОЗВИТКУ ТА СТАНОВЛЕННЯ боенской СПРАВИ І ВІТЧИЗНЯНОЇ ВЕТЕРИНАРНО - САНІТАРНОЇ ЕКСПЕРТИЗИ
      Вивчення історичних документів показує, що в Російській імперії з 1649 по 1682 рр.. були вказівки, що стосуються тільки падежу худоби. Перші натяки на ветеринарно-санітарний огляд м'яса з'явилися в період царювання Іоанна та Петра Олексійовича. У 1683 р. був виданий указ, що забороняв торгувати рибою та м'ясом в куренях і на лавах. У 1691 р. було видано другий указ, що стосується торгівлі
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека