Патологічна фізіологія / Оториноларингологія / Організація системи охорони здоров'я / Онкологія / Неврологія і нейрохірургія / Спадкові, генні хвороби / Шкірні та венеричні хвороби / Історія медицини / Інфекційні захворювання / Імунологія та алергологія / Гематологія / Валеологія / Інтенсивна терапія, анестезіологія та реанімація, перша допомога / Гігієна і санепідконтроль / Кардіологія / Ветеринарія / Вірусологія / Внутрішні хвороби / Акушерство і гінекологія
ГоловнаМедицинаОнкологія
« Попередня Наступна »
Петренко А.А. Аналіз метилування ДНК при раку шийки матки, 2003 - перейти до змісту підручника

бісульфітний модифікація ДНК

Даний метод заснований на здатності іона гідросульфіта, що виходить при розчиненні бісульфіту натрію у воді , взаємодіяти з цитозином у складі одноцепочечной ДНК з перетворенням останнього в урацил. У теж час 5-метілцітозін при тих же умовах модифікації не піддається. Надалі проводиться ампліфікація досліджуваної послідовності ДНК за допомогою ПЛР. При цьому всі залишки урацила і тиміну амплифицируют як тимін і тільки 5-метілцітозін відтворюється як цитозин (Olek et al. 1996).

200 нг геномної ДНК витримували 5 хв у киплячій водяній бані, після чого охолоджували в льоду. Додавали розчин NaOH до кінцевої концентрації 0,3 М і інкубували при 50оС 15 хв. Потім вносили 2 обсягу 2% низькоплавкі агарози ("Sigma", США) і всю суміш переносили в пробірку з холодним мінеральним маслом для формування агарозній "намистини". Після цього додавали розчин Na2S2O3 і гідрохінону до кінцевої концентрації 3.1 М і 0.5 мМ відповідно і інкубували при

про Х

50 С 16 ч.
Далі промивали розчином 1 TAE 6 разів по 15 хв. Слідом за тим проводили десульфонацію розчином 0,2 М NaOH 2 рази по 15 хв і промивали спочатку розчином 1 TAE 1 раз 15 хв, а потім бідістіллірованой водою 3 рази по 15 хв. Далі «намистину» розводили нагріванням бідістіллірованой водою в 10 разів і аліквоту використовували для

ПЛР.
« Попередня Наступна »
= Перейти до змісту підручника =
Інформація, релевантна " бісульфітний модифікація ДНК "
  1. Полімеразна ланцюгова реакція
    бісульфітной модифікації ампліфікували з використанням праймерів adpt-bis-1 і adpt-bis-3 в кінцевому обсязі 50 мкл в наступних умовах : 1 буфер для ПЛР, 2 мМ MgCl2, 200 мкМ кожного з чотирьох дезоксинуклеотидов-трифосфатов, 10 пмоль кожного праймера та 1 од. акт. Taq ДНК-полімерази ("НДІ біоорганічної хімії", Росія). Ампліфікація проходила в наступному режимі: 94 ^ 30 сек, 50 ^ 60 сек, 72 ^ 90
  2. Дослідження експресії і статусу метилювання гена Р3А-адаптіна при раку шийки матки
    бісульфітний-модифікованої ДНК. Як і у випадку СП-ПЛР перші два методи подразумевают обробку ДНК метілчувствітельнимі ферментами. При цьому досліджуються CpG динуклеотид, що входять до складу сайтів рестрикції МЧР. Найбільше число сайтів рестрикції в складі CpG острівця гена / ЗА-адаптіна спостерігається для ферментів HpaII (10) і HhaI (8). Статус метилування сайтів рестриктаз HhaI і SacII ми
  3. ревматоїдний артрит. ХВОРОБА БЕХТЕРЕВА
    модифікація IgG є ревматоїдним фактором). Вони з'єднуються з антигеном в комплекси антиген-антитіло, які або самостійно ушкоджують синовіальну оболонку суглоба, або в синовіальної рідини піддаються фагоцитозу. Після поглинання фагоцитом вони активують лізосомальні ферменти, що руйнують оболонку фага і після виходу назовні ушкоджують синовіальну тканину суглоба, викликаючи
  4. ЕТІОЛОГІЯ
    модифікація стилю життя, пов'язана з елімінацією певних чинників, є важливим доданком ефективності терапії АГ. Враховуючи вищевикладене стає зрозумілим ще одне, етіологічне визначення АГ згідно з яким Есенціальна артеріальна гіпертензія є наслідком порушення механізмів регуляції судинного тонусу у генетично схильних осіб при негативному
  5. ПАТОГЕНЕЗ
    модифікації РАС кілька змінилися. Справа в тому, що ангіотензин II може утворюватися не тільки в системному кровотоці, а й у різних тканинах, де існують тканинні, локальні РАС, що володіють специфічними функціями. У нирках такі системи регулюють нирковий кровообіг і швидкість фільтрації, в стінці судин-тонус і гіпертрофію, у серцевому м'язі впливають на метаболізм, і скоротність,
  6. ЛІКУВАННЯ
    модифікація способу життя, оцінка та корекція сумарного кардіоваскулярного ризику, досягнення н підтримування цільового рівня АТ за допомогою антигіпертензивних лікарських засобів і довічний характер терапії, поліпшення якості життя. Модифікація або зміна способу життя хворого АГ, є серйозною, але вдячній завданням, що вимагає як від лікаря, так і від пацієнта великого
  7. ГЛОМЕРУЛОНЕФРИТ
    модифікації "пульс-терапії" , які полягають у веденні тільки великих доз глюкокортикоїдів або введенні 1000 мг циклофосфану 1 раз на місяць. При неможливості призначення цитостатиків і кортикостероїдів для лікування гострого або швидкопрогресуючого нефриту застосовується плазмаферез. Його застосування засноване на видаленні патологічних імунних комплексів медіаторів алергічних реакцій і
  8. Діафрагми - як метод контрацепції
    модифікаціях: o дугоподібна, що складається в двох точках, o з пружиною згорнутого типу , що складається в будь-якій точці. Слід зазначити порівняно низьку ефективність даного методу контрацепції в періоди високої фертильності (25 - 35 років) та / або статевої активності (більше 4 статевих зносин у нед). Підбір діафрагми Лікар підбирає діафрагму відповідного виду і розміру, а
  9. плацентарної недостатності гіпоксія плоду І асфіксія немовляти
    модифікації Vintzileos'а, фетометрія, дослідження плаценти, зокрема визначення ступеня зрілості по Grannum'у), кардіотокографія (системи бальних оцінок Фішера, Кребса, Савельєвої або комп'ютерна оцінка даних по Демидова, Redman & Dowes) доплерівська флоуметрия в судинах системи "мати-плацента-плід". цитологія, амніоскопія, гормональні методи. Гормональні
  10. пологового травматизму МАТЕРІ
    модифікації швів на шийку матки (однорядні, безперервні кетгутовие шви, дворядні, окремі кетгутовие шви), різний шовний матеріал (хромований кетгут, вікрил) . Ведення післяпологового періоду звичайне. Спеціальний догляд за шийкою матки не потрібно. РОЗРИВИ ПРОМЕЖИНИ Розриви промежини є одним з найчастіших ускладнень пологів, відбуваються у 7-15% народили, причому у
© medbib.in.ua - Медична Бібліотека