Головна |
« Попередня | Наступна » | |
Антигенна мінливість вірусу грипу |
||
I. ВСТУП Вірус грипу типу А1 є унікальним серед 'збудників інфекційних захворювань людини внаслідок своєї здатності настільки сильно змінювати власну антигенну структуру, що специфічний імунітет, набутий у відповідь «а зараження одним штамом, дуже слабо або зовсім не захищає від наступного з'явився вірусу. У зв'язку з такою мінливістю вірусу грип продовжує залишатися одним з основних епідемічних захворювань людини. У вірусів грипу були виявлені два типи антигенної мінливості: антигенний дрейф (Burnet, 1955) і значний антигенний зрушення. Для антигенного дрейфу характерні відносно невеликі зміни, що виникають в основному усередині деякого сімейства штамів, кожен з. Яких легко може бути поєднана з усіма іншими штамами цього сімейства у відношенні як внутрішніх, так і. Поверхневих антигенів. Серед штамів вірусу грипу А, що заражають людини, кожний наступний варіант замінює попередній. Це відбувається, можливо, завдяки виборчому перевазі, яким володіють нові антигенні варіанти, в подоланні імунологічних бар'єрів господаря. Антигенний дрейф властивий вірусам грипу не тільки А, яо і В. Другий вид антигенної мінливості, який був описаний тільки для вірусу А, включає більше несподівані й драматичні зміни. Їх називають значними антигенними сдвігамі2. Ці зрушення виникають з інтервалом в 10 - 15 років (див. гл. 15) і відзначені появою антигенно «нових» вірусів, імунітету до яких популяція не має, і це саме ті 'віруси, які викликають значні пандемії грипу. Ці «нові» віруси володіють субодиницями НА1 і NA, повністю відрізняються ють тих, які циркулювали серед людей до появи нового вірусу. Значне зрушення може відбуватися в одному або відразу в обох поверхневих антигенах; були описані дві пандемії грипу, викликані вірусами, що відносяться до кожної з цих двох категорій, (див. гл. 15). Грип є також природною інфекцією деяких тварин я птахів. Віруси, пака виключно типу А, були виділені від свиней, коней і безлічі птахів, включаючи курей, качок, індиків, перепелів, фазанів і крячок (McQueen et al., 1968; Pereira, 1969; World Health Organization, 1972). Раніше вважали, що поверхня частинки вірусу грипу складається з мозаїки антигенів, що входять до складу всіх штамів даного типу, і що антигенна мінливість є результатом переміщення цих антигенів з виступаючого положення в приховане і навпаки. Пізніше передбачався інший механізм антигенного дрейфу. В даний час вважають, що в амінокислотах, складових антигенні детермінанти субодиниць НА та NA, постійно відбуваються зміни. Вони є результатом відбору мутантів, які проявляють зміни в послідовності амінокислот по-лііелтідов субодиниць, що викликаються в свою чергу мутацією вірусної РНК-Значні антигенні зрушення, в результаті яких виникають «нові» віруси, обумовлені, ймовірно, іншим механізмом. Гемагтлютінірующая і нейрамінідазной субодиниці цих «нових» вірусів в антигенному відношенні повністю відрізняються від субодиниць вірусів, що циркулювали серед людей до появи нових штамів. Ми думаємо, що «новий» вірус не є результатом мутації попереднього вірусу грипу людини, а виникає внаслідок генетичної рекомбінації. Між вірусом людини і одним з багатьох штамів вірусу грипу А, природними. Господарями яких є тварини або ттіци. Виникнувши, «новий» вірус заміщає «старий», який повністю зникає з популяції людини. Значних антигенних зрушень у вірусів-грипу В досі не виявлено. Pereira (1969) припустив, що відсутність значних антигенних зрушень у вірусах грипу В маже бути наслідком відсутності таких вірусів грипу серед нижчих тварин і птахів. Антигенна мінливість включає тільки субодиниці НА і NA; внутрішні білки вірусу (нуклеоіротеіновий антиген і матриксний або мембранний М-білок) в значній мірі постійні. З двох поверхневих антигенів більш важливим є НА, тому що антитіла до цього антигену нейтралізують інфекційність вірусу. II. ГРИП В історичному аспекті (див. також гол. 15) А. ДОКАЗИ АНТИГЕННИХ ЗМІН Захворювання, подібне грипу, часто реєструвалося в минулі століття (Hirsch, 1883) ; хвороба виникала або у формі пандемій, охоплюючи дуже велику частину населення і поширюючись майже по всьому світу, або представляла собою локальні спалахи. До 1933 р., коли вірус грипу вперше був виділений (від людини. Прим. Ред.) 1, не можна було з упевненістю сказати, чи дійсна дана пандемія викликалася вірусом грипу. Однак характерні риси епідемій, описаних в історичних документах, свідчать про те, що ці епідемії цілком могли бути викликані вірусами грипу. Хоча характерні для грипу симптоми можуть мати й інші інфекційні захворювання, лише грип викликає раптові епідемії, які тривають кілька тижнів і так само раптово зникають ('Burnet, White, 1972). Серологічні дослідження, проведені на-пожі-"лих людях, також свідчать про попередні епідеміях грипу, що відбувалися в не настільки віддалені часи (Mulder, Mazurel, 1958). Найбільш рання з відомих епідемій грипу була зареєстрована в Німеччині в 1170 р. (Hirsch, 1883), а з інших історичних джерел можна скласти досить повний перелік епідемій в Європі, починаючи з 1500 р. Тут буде згадано лише про найбільш жорстких епідеміях. Більш докладні відомості можна знайти в роботах Hirsch (1883), Creighton (1891, 1894), Burnet і Clarke (1942) і Burnet і White (1972). Епідемія 1781-1782 рр.. почалася в Азії в 1781 р., а потім до початку 1782 поширилася через Росію до Європи. Ця епідемія викликала відносно мало смертних випадків, але її особливість полягала: у тому, що хвороба частіше вражала людей середнього віку, ніж дітей і літніх. Досить жорстокі епідемії виникали також в 1803, 1833, 1837 і 1847 рр.. Епідемія 1847-1848 рр.. почалася в Східній Росії в березні 1-847 р. і досягла Європи і Англії взимку 1847-1848 рр.. Ця епідемія-викликала багато смертних випадків, особливо серед літніх людей. Пандемія 1889 також прийшла до Європи з Росії, досягнувши Англії та Америки на початку 1890 Хвороба поширювалася зі швидкістю пересування мандрівників. Після появи вірусу в 1889 р. в кожному з наступних років мали місце ще чотири інфекційні хвилі. Друга і третя спалаху викликали багато смертних випадків, особливо серед дітей і старих. Серологічні (Mulder, Mazurel, 1958) та інші дослідження (Pereira, 1969) припускають, що в ті часи були присутні віруси, споріднені вірусам грипу Азія, Гонконг і 2-го кінського серотипу. Найбільш жорстока пандемія грипу відзначалася в 1918 - 1919 рр.. Місце виникнення цієї пандемії точно не відомо, але Burnet і Clarke (1942) вважають, що вірус міг розвиватися незалежно в Азії і в Європі чи міг бути завезений до Європи (Китайськими робітниками. Пандемія протікала хвилями і забрала в середньому від 20 до 50 млн. 'людських життів, переважно молодих людей. Ймовірно, пандемія 1918-1919 рр.. була обумовлена штамом вірусу грипу А, споріднений вірусу грипу свиней. Вперше це припустили Laidlaw (1935) і Shope (1936), але можливо, що цей вірус був перенесений від людини свиням, а не в зворотному напрямку. Інтенсивні дослідження зниження з віком антитіл до вірусу грипу свиней в сироватках людей, проведені Davenport і еоавт. (1953-1964), Hennessy і співавт. (1965), дають підстави вважати, що вірус, що викликав епідемію 1918-1919 1пг., серологічно родствен вірусу грипу свиней. Велике число смертних випадків змусило Burnet і Clarke (1942) припустити, що цей вірус, можливо, володів незвичайною вірулентністю. На думку інших дослідників (Zhdanov et al., 1958; Kilbourne, 1960), причинами високої смертності від вторинних 'бактеріальних інфекцій могли бути умови війни і відсутність антибіотиків. Здається ймовірним, однак, що деякі мутанти вірусу володіли високою вірулентністю, бо вірус пандемії 1781 «р., який також вражав молодих людей, не викликав такої високої смертності. Б. антигенні ЗМІНИ ВІРУСУ У ПЕРІОД ПІСЛЯ 1933 Після ідентифікації першого вірусу грипу, який був позначений як H0N1 (World Health Organization, 1971), антигенні зрушення відбувалися в 1947 р., коли з'явився вірус H1N1 (наприклад, A / FM / 1/47), в 1957 р., коли з'явилися віруси H2N2 (наприклад, А/Сінгапур/1/57), і в 1968 р., коли з'явився вірус Гонконг (А/Гонконг/1/68). Антигенний зрушення в 1947 р. складався в зміні гемагглютінірующімі антигену (від H0N1 до H1N1 '); в 1957 р. і НА та NA в антигенному відношенні повністю відрізнялися від антигенів вірусів попередніх років (від H1N1 до H2N2), а в 1968 р. варіант Гонконг проявив значне антигенное відмінність по НА (від H2N2 до H3N2). Азіатський штам вірусу грипу (H2N2), який вперше з'явився в одній з провінцій Китаю в 1957 р., містив субодиниці НА та NA, які повністю відрізнялися в антигенному відношенні від субодиниць H0N1 і H1N1 вірусів грипу, що циркулювали раніше серед людей. Цей штам вірусу грипу викликав небувалу в історії пандемію (Burnet, White, 1972), але число смертних випадків було невелике. Наступна і поки остання пандемія грипу була викликана вірусом А / Гонконг/68, у. якого субодиниці NA були подібні таким «старого» азіатського вірусу А2, а субодиниці НА мали повне антигенное відміну від таких «старого» азіатського штаму (Coleman et al., 1968; Schulman, Kilbourne, 1969; Webster, Laver , 1972). В. ЗАГАЛЬНІ ВЛАСТИВОСТІ ПОПЕРЕДНІХ пандемії Пандемічний характер грипу у людей вказує на те, що через нерівні проміжки часу людство уражається вірусам, що володіє новими антигенними детермінантами . Наведена вище інформація вказує на те, що ці пандемії часто виникають в Південно-Східній Азії і поширюються зі швидкістю пересування мандрівників. Більшість пандемій викликало підвищену смертність серед дітей і старих, але принаймні дві пандемії (1781 і 1918 рр..) викликали підвищену смертність серед молодих людей. III. ВЛАСТИВОСТІ геном вірусу ГРИПУ Вірус грипу має фрагментованим геномом, що складається щонайменше з семи фрагментів одноцепочеч-ної РНК-Така фрагментація дозволяє геному 'перегруповуватися («рекомбінація») у процесі змішаних інфекцій різними штамами (див. гл. 7) і може мати основне значення для антигенної мінливості вірусу грипу. Після змішаного зараження клітин двома різними вірусами грипу А з високою частотою утворюються вірусні рекомбінанти. Висока частота рекомбінацій між вірусами грипу А вперше була продемонстрована Burnet (Burnet, Lind, 1949, 1951) і багаторазово підтверджена іншими працюючими в цій області дослідниками (Hirst, Gotlieb, 1953, 1955; Simpson, Hirst, 1961; Simpson, 1964; Sugiura, Kilbourne, 1966). Було виявлено, що частота рекомбінації може доходити до 97%. Висока частота рекомбінацій між вірусами грипу | дозволяє досить літо утворюватися антиген-но гібридним вірусам в ході змішаної інфекції в дослідах як in vitro, так і in vivo. Вперше біохімічне підтвердження цього дали Laver і Kilbourne (1966), які виявили, що генетично стабільний рекомбінантний вірус Х7, виділений з клітин, змішано інфікованих Штамсе вірусу грипу NW-S (H0N1) і RI / 5 + (H2N2) , володіє субодиницями НА вірусу H0N1, а субодиницями NA вірусу H2N2. Згодом було виділено багато інших таких рекомбі-нантних вірусів грипу А, і фактично їх. можна створити «в потрібному порядку» (Webster, 1970) (див. також 39). Освіта нових штамів грипу шляхом рекомбінації між. вірусами тварин (або птахів) і людини обговорюються в розділі VII. Були отримані дані, що свідчать про те, що штами вірусів, які викликають пандемії грипу, можуть виникати таким шляхом і в природі. Рекомбінації між вірусами грипу В теж можливі (Perry, Burner, 1953; Perry et al., 1954; Ledinko, 1955; Tobita, Kilbourne, 1974), але ніколи ще не було виявлено рекомбінації між вірусами-грипу типів А і В. IV. Субодиниця гемаглютиніну І нейрамінідази ЯК ВИСОКОІЗМЕНЧІВИЕ АНТИГЕНИ гемагглю-ютінірующая і нейрамінідазной активності вірусу грипу асоційовані з різними субодиницями (Laver, Valentine, 1969; Laver, 1973), що утворюють шар «шпильок» на поверхні вірусних часток (32). Гемагглютііін є основним поверхневим антигеном. Він відповідальний за взаємодію вірусу з поверхнею клітини і за індукцію нейтралізуючих антитіл. Мінливість гемагглютінірующімі антигену сприяє появі нових зпідамій грипу. Фермент NA є другим вірусспеці-фичним поверхневим антигеном частинки вірусу 'грипу. У антигенному відношенні NA повністю відрізняється від НУ (Seto, Rott, 1966 ; Webster, Laver, 1967). Антитіла ж NA НЕ нейтралізують інфекційності вірусу (крім дуже високих концентрацій), але вони сильно сповільнюють звільнення вірусу з інфікованих клітин (Seto, Rott, 1966; Webster, Laver, 1967; Kilbourne et al., 1968 ; Becht et al., 1971; Dowdle et al., 1974), і ці антитіла можуть відігравати важливу роль у зниженні реплікації вірусу in vivo і в запобіганні поширення інфекції (Schulman et al., 1968). Звичайна мінливість властива і NA, то варіації цього антигену, можливо, менш істотні для епідеміології грипу. Гемагглютинирующие субодиниці являють собою глікопротеїнові палочкообразниє структури, трикутні в перетині з відносною молекулярною масою близько 215 000 (33). Вони «моновалентних» і (взаємодіють з рецепторами клітини тільки одним кінців (Laver, Valentine, 1969). Ізольовані субодиниці - високоімуногенний при введенні тваринам у присутності ад'юванта. Кожна вірусна частка містить приблизно 400 суб'едшшц НА (Tiffany Blough, 1970; Schulze, 1973; Layer, 1973). Субодиниці НА складаються з двох полілептідов з відносною молекулярною масою близько 25 000 і 55 000 (Сот-pans et al., 1970; Schulze, 1970; Laver, 1971; Skehel, Schild, 1971; Stanley, Haslam, 1971; Skehel, 1971, 1972; Klenk et al., 1972). Їх позначають як важкий і легкий шоліпептіди НА1 і НА2. Oi6e ці ланцюги синтезуються в 'вигляді одного тюлі-пелтіда-предшествеН'Ніка з молекулярною масою близько 80000, який у ряді. Клітин розщеплюється на легкий і важкий поліпептиди (Lazarowitz et al., 1971, 1973; Skehel, 1972; Klenk et al ., 1972). У інтактних субодиниць важка і легка ланцюга з'єднані дисульфідними зв'язками, обр-азуя димер, а кожна субодиниця НА складається з двох або трьох таких димарів (Laver, 1971). Суб'ед'ініци НА мають гідрофобний і гідрофільний Жонца (34). Гідрофільний кінець відповідальний за біологічну активність субодиниці, тоді як гідрофобний кінець здійснює зв'язок з ліпідами вірусної оболонки. Гід-рофо; бние властивості субодиниці пов'язані, мабуть, з С-кінцем ліпленням поліпептидного ланцюга (НА2) (Skehel, Wa-terfield, 1975) (ом. гл. 3). Нейрамінідазной субодиниця являє собою сгліко-протеїнову структуру з відносною молекулярною масою близько 240 000. Вона складається з квадратних, що мають форму коробочок, головок розміром 8-8-4 ям, IK центру яких прикріплена нитка з дифузним хвостом або з невеликою голівкою на кінці (, 35) (Laver, Valentine, 1969; Wrigley et al., 1973) . Виділені субодиниці мають повну ферментативної активністю і високоімуногенний при введенні тваринам з ад'ювантом. Кожна вірусна частка містить приблизно 80 субодиниць NA (Schulze, 1973; Laver, 1973). Однак кількість субодиниць NA у вірусній частці може варіювати залежно від штаму (Webster et al., 1968; Webster, Laver, 1972; Palese, Schulman, 1974), а також від виду «льотки-господаря, на якій вирощували вірус Субодиниці NA складаються з чотирьох тлікозіліро-ванних лоліпептідов з відносною молекулярною масою близько 60000, пов'язаних один з одним дисульфідними зв'язками, локалізованими в нитки або в її хвості (див. також гол. 4). У 'більшості штамів ці 4 поліпептиду, гао мабуть, ідентичні. Однак у деяких штамів NA, (можливо, складається з двох типів поліпептидів, злегка розрізняються за розмірами (Webster, 1970a; Skehel, Schield, 1971; Bucher, Kil-bourne, 1972; Laver, Baker, 1972; Lazdins et al., 1972 ; Downie, Laver, 1973; Wrigley et al., 1973). Активний центр ферменту і антигенні детермінанти локалізовані в різних областях головки субодиниці NA (Ada et al., 1963; Fazekas de St. Groth, 1963), причому ці головки володіють гідрофільними властивостями. «Хвіст» NA гидрофобен і служить для приєднання субодиниці до ли-Підну оболонці вірусу (Laver, Valentine, 1969) (див. '29). А. ВИДІЛЕННЯ І ВІДДІЛЕННЯ ОДИН ВІД ОДНОГО Субодиниця НА І NA Для деяких штамів вірусу грипу чисті, інтактні субодиниці НА і NA можуть бути отримані методом електрофорезу на смужках ацетатцеллюлози після руйнування вірусних частинок за допомогою SDS (Laver, 1964, 1971; Laver, Valentine, 1969; Downie, 1973). Успіх виділення будь-який з цих субодиниць за допомогою даної методики залежить від стійкості їх до денатурації SDS при кімнатній температурі. За цим критерієм віруси грипу можуть бути розділені на чотири групи. 1. Віруси з субодиницями НА, стійкими до денатура ції SDS. При руйнуванні вірусів цього типу SDS і елек трофорезе на смужках ацетатцеллюлози. всі вірусні білки, «Ромі субодиниць НА, мігрують як аніони. Гемагглюті- нин, мігруючий як катіон, може бути виділений в чистому вигляді з повним відновленням біологічної активності при умовах, що не руйнують ковалентних зв'язків [напри заходів: A/Bel/42 (H0N1)]. 2. Віруси з субодиницями NA, стійкими «денатура ції SDS. Чисті, активні субодиниці NA можуть бути ви делени з цих вірусів методом, описаним вище (напри заходів: B/LEE/40). 3. Віруси, у яких ні НУ, ні NA не стійкі до дена тураціі SDS. У цьому випадку всі вірусні білки. Мігрують як аніони і жодна з поверхневих субодиниць НЕ мо жет бути виділена описаними методами [наприклад: A/NWS/33 (H0N1)]. 4. Віруси, у яких субодиниці як НА, так і NA стійкі до денатурації SDS. Для цих вірусів обидві суб'єктів незалежно одиниці в процесі електрофорезу-мігрують як катіони і не можуть бути розділені таким способом [наприклад: А / Сінгапур? 1/57 (H2N2)]. Субодиниці НА і NA останньої групи вірусів можуть бути виділені, як показано на 36. Був виділений пташиний вірус грипу (А/буревестнік/Австралія/1/72 (Нау6Мау5), який мав стабільні до SDSHAHNA (Downie, Laver, 1973). У процесі електрофорезу на ацетатцеллюлозе вони рухалися разом як катіони (див. 31, вгорі) і не могли бути розділені таким способом. У зв'язку з цим два види цих субодиниць розділили генетично за допомогою рекомбінації (Webster, 1970b). Для отримання рекомбінантов були обрані батьківські віруси з субодиницями НА або NA, чутливими до денатурації SDS. SDS-стабільні субодиниці НА та NA пташиного вірусу були потім виділені із зруйнованих за допомогою SDS рекомбінантних вірусних частинок шляхом електрофорезу на смужках ацетатцеллюлози (ем. 31, IB середині і внизу). Таким образам можна отримати чисті субодиниці, необхідні для хімічного аналізу та приготування «моноспеціфічних» антисироваток. Субодиниці НА і NA можуть (бути також виділені з певних штамів вірусу грипу шляхом обробки вірусних частинок шротеолітічними ферментами (Noll et al., 1962; Seto et al., 1966; Compans et al., 1970; Brand, Skehel, 1972; Wrigley et al., 1973). При такому способі відділення поверхневих субодиниць від вірусних часток відбувається,-мабуть, в результаті переварювання гідрофобних (кінців поліпентідной ланцюга, які відповідальні за приєднання субодиниць до липидному шару вірусної оболонки. Однак при цьому має відбуватися також часткове переварювання інших областей субодиниці НА, внаслідок чого порушується гемагглютінірующімі активність і губляться деякі антигенні детермінанти. Б. РОЗДІЛЕННЯ поліпептиді гемаглютинін (НА1 І НА2) Легка й важка ланцюга гемагглютинирующих субодиниць можуть бути розділені методом електрофорезу в SDS-полі-акріламідном тілі. Однак для препаративних цілей найкраще поділ досягається при центрифугировании в градієнті щільності гуанидина гідрохлориду - дітіотріетола (Laver, 1971), що проводиться в умовах, в яких розриваються дисульфідні зв'язки, або шляхом тель-фільтрації в розчині гуанидина гідрохлориду - дітіотріетола (Webster, 1970а). В основі такого поділу лежить, мабуть, значна. Гидрофобность легкої поліпептидного ланцюга. У процесі центрифугування в концентрованому розчині гуанидина гідрохлориду - дітіотріетола цей легкий поліпептид еедіментірует «швидше, ніж важка ланцюг, а при гель-фільтрації легка ланцюг виходить перша, мабуть, через те, що навіть у такій сильно диссоциирующих середовищі легка коло не існує iB вигляді мономера. Ці зауваження відносяться тільки ж 'Субодиниця НА, отриманого з вірусу, вирощеного на клітинах, в яких відбувається повне протеолітичну розщеплення предшеет- вующего поліпептиду НА на НАЛ і НА2. Більш того, важкий і легкий поліпептиди (НА1 і НА2) субодиниць НА, одержуваних шляхом протеолітічеокого перетравлення, не можуть бути розділені таким образам, можливо, через те, що при перетравлюванні руйнуються 'Гідрофобні області легкого ланцюга (Skehel, Laver, неопубліковані дані). В. ВЛАСТИВОСТІ НА1 І НА2 Легкі і важкі поліпептидні ланцюга вірусу грипу А, штам BEL (H0N1), мали подібний склад поліпептидів, за винятком того, що важкий поліпештід містив значно більше пролина, ніж легка ланцюг (Laver, Raker, 1972). Однак пептидні карти продуктів триптичного розщеплення цих двох ланцюгів були абсолютно різними, що свідчить про різній послідовності амінокислот в цих ланцюгах (Laver, 1971). Обидві поліпелтідние ланцюги містять вуглеводи, але аналіз глюкозаміну дає підстави вважати, що важкий поліпептид містить набагато більше вуглеводів, ніж легка ланцюг. Було виявлено, що важка ланцюг містить 9,4% N-ацетилглюкозаміну, так само як і нейтральних Сахаров; таким чином, вона, ймовірно, містить близько 20% вуглеводів. Г. КІЛЬКІСТЬ РІЗНИХ Віру СПЕЦИФІЧНИХ АНТИГЕННИХ ДЕТЕРМІНАНТ НА ПОВЕРХНІ Субодиниця НА Кількість різних вірусспеціфічеекіх антигенних детермінант на гемалглютінірующіх субодиниць вірусу грипу невідомо (на поверхні гемагглютинирующих субодиниць існують також детермінанти, специфічні до клітини-господаря). Проведені нещодавно досліди показали, однак, що гемагглютинирующие субодиниці штаму Гон конг (H3N2) вірусу грипу людини володіють по меншій міру двома, а можливо, і більше різними вірусспеціфі- тичними антигенними детермінантами (Laver et al. Це було продемонстровано наступним чином: гемагглю тінірующіе субодиниці були отримані з вірусу грипу Гонконг (А/Гонконг/68, H3N2) і його антигенного варіанту А/Мемфіс/102/72, який виник в результаті антигенного дрейфу. Тести на іммунодіффузія показали, що суб'еді Ниці вірусу Гонконг/68 володіють по крайней. заходу двома різними видами антигенних детермінант, тоді як ва риант 1972 несе на собі, мабуть,; не менше трьох разів особистих детермінант (37). Гемагглютинирующие субодиниці вірусів А/Гонконг/68 і А/Мемфіс/102/72 мали одну загальну детермінанту. Антитіла ж цієї детермінанті давали 'перехресні реакції з обома вірусами в тестах на іммунодіффузія, гальмування гем-аглютинації і нейтралізації. Антитіла до інших детерминантам не показали скільки-небудь помітних серологічних перехресних реакцій між вірусами Гонконг/68 і Мемфіс/72. Таким чином, очевидно, що в процесі анти- генного дрейфу вірус грипу Гонконг зазнав значних змін в одній зі своїх «специфічних» детермінант. Дані Laver і співавт. (1974) (припускають, що різні антигенні детермінанти локалізовані на одній і тій же субодиниці НА і що вірусні частинки не володіють сумішшю антигенно розрізняються субодиниць. Д. ЛОКАЛІЗАЦІЯ АНТИГЕНУ КЛІТИНИ-ГОСПОДАРЯ Хоча перші описи антигену клітини-господаря у вірусі грипу '(Knight, 1944, 1946)' були зустрінуті з деяким скептицизмом, \ нині їх існування встановлено твердо1. Наявність таких антигенів було виявлено поруч серологічних методів, що включають реакції преципітації (Knight, 1944), иммунодиффузии (Howe et al., 1967), зв'язування комплементу (Smith et al., 1955), гальмування гематглютінаціі (Knight, 1944; Harboe et al. , 1961; Harboe, 1963a) і методом блокування гальмування гемагглютіна-ції (Harboe, 1963b; Laver, Webster, 1966). Антиген клітини-хазяїна складається головним образам з вуглеводів і жовалентно пов'язаний з іоліпептідамі суб'едіііц НА і NA. Зв'язків антигену (і вуглеводів) 'клежі-господаря з внутрішніми білками вірусної частки виявлено не було. Однією з загадкових рис хазяйського антигену вірусів грипу є те, що він виявляється у вірусах, вирощених в порожнині аллантоиса ембріонів курей або індичок (Harboe, 1963а), але не у вірусах, вирощених, наприклад, в порожнині 'аллантоїса качиних ембріонів, в легенях мишей або в | різних культурах клітин. Віруси, вирощені на цих клітинах, зовсім інгібованими в реакції гальмування темагглютінаціі антисироватками, отриманими проти екстрактів з. Незаражених «льоток-господарів. Ймовірно, це відбувається через те, що вірус, вирощений в цих клітинах, 'Містить вуглеводи' кліть-господаря, але яо деяких причин вони або «е володіють антигенними властивостями, або антитіла, спрямовані проти них, чи не інгібують гем-аглютинацію. Е. РОЛЬ АНТИГЕНУ КЛІТИНИ-ГОСПОДАРЯ Вуглеводний компонент може грати дуже важливу роль в збірці вірусної оболонки. Ізольовані субодиниці NA | і НА в відсутність SDS агрегує. Це дає підставу вважати, що дані субодиниці володіють як гідрофобними, так і гідрофільними кінцями (Laver, Valentine, 1969) і, шозможно, вуглеводний компонент клітини-господаря і обумовлює гідрофобвость одного кінця еуб'едініц НА і NA. Ж. антигенною мінливістю Субодиниця Гемаглютиніну та нейрамінідази, виявляти Моноспеціфічної Антисироватки До 'недавнього часу вважалося, що V-антиген, або обо-Лочжа частинки вірусу грипу,' являє собою щось неподільне, але це не так. Зараз відомо, що V-антиген складається ІЗ НА, NA та вірусного антигену клітини-хазяїна. Ні в одній з раніше опублікованих робіт але антигенними взаєминам між вірусами грипу це не приймалося до уваги, внаслідок чого рівні реакцій перехрещення | між даними вірусами залежали від використовуваних тестів. Так, широко використовувана штаммоспеціфічна реакція зв'язування комплементу виявляла перехресні реакції ОКЗК між нейрамінідазной, так і між гемагглютіпі-рующими антигенами,: у той час як реакція перехрещення між нейрамінідазним'і антигенами може виявлятися також і в РГГА. Це відбувається тому, що в интактном вірусі може виникати «стеричну нейтралізація» нейро-амінідазной активності антитілами до гемаглютиніну і навпаки (Laver, Kilbourne, 1966; Schulman, Kilbourne, 1969; Easterday et al., 1969; Webster, Darlington, 1969). Антигенний дрейф окремих антигенів вірусу грипу може бути вивчений після відділення цих антигенів від вірусної частинки (Webster, Darlington, 1969) або шляхом 'генетичного поділу цих антигенів (Kilbourne et al., 1967). Таким чином, тепер при використанні моноспеціфічних антісиворотож «цим двом антигенів 'можливе проведення детальних серологічних досліджень антигенного дрейфу індивідуальних антигенів вірусу грипу. V. МЕХАНІЗМ антигенною дрейфу (Незначні АНТИГЕННИХ ЗМІНУ) А. ВСТУП Два різних прояви антигенної мінливості, спостережувані серед вірусів грипу А, а саме: раптова поява нових антигенних підтипів і-поступовий дрейф в межах одного підтипу, ймовірно, не пов'язані один з одним. Загальноприйнято, що дрейф-'послідовне заміщення вірусів грипу А антигенно новими штамами - це резуль тат взаємодії мутаційної мінливості вірусу і імунологічної селекції Важливість цього механізму селекції підтверджується експериментальним отриманням антигенних варіантів шляхом розмноження вірусів грипу в присутності невеликих 'кількостей антісиазоротаі (Burnet, Lind, 1949; Archetti, Hors-fall, 1950; Isaacs, Edney, 1950; Edney, 1957; Laver, Webster, 1968) або в частково імунних тварин (Gerber et al., 1955, 1956; Magill, 1955; Hamre et al., 1958). Епідеміологіче ські спостереження також узгоджуються з таким механізмом, ко торий пропонує розумне пояснення зникнення уста застарілих штамів з популяції людей. Для пояснення механізму антигенного дрейфу було висунуто кілька гіпотез. Одна з них (Francis, 1952, 1955, 1960; Jensen et al., 1956; Jensen, 1957) припускає, що поверхня вірусу грипу складається з мозаїки антигенів, що належать всіх штамів даного типу, але присутніх в окремих антигенних штамах в різних пропорціях або в різних місцях. Антигенна мінливість повинна бути наслідком зміщення даних антигенів на вірусної оболонці з виступаючого в 'Приховане положення. Відповідно до іншої гіпотези (Hilleman, 1952; Magil, Jotz, 1952; Andrewes, 1956, 1957; Takatsy, Furesz, 1957), антигени поступово за міщуються в ході мінливості. Обидві ці гіпотези потребують існування щодо великої кількості антиген але розрізняються білкових молекул на поверхні ві руса. Jensen і співавт. (1956) встановили, що в кожному з багатьох штамів в великої колекції вірусів грипу А, доступних для досліджень в 1953 р., кількість антигенів, присутніх у різних (кількостях і (або) місцях, доходило до 18. Поширення цих даних на безліч нових варіантів, виявлених відтоді, повинно, мабуть, привести | до 'припущенням навіть більшого числа антигенів в кожному вірусі, особливо якщо приймається, і, по-видимо- му, логічно, що штами, що виділяються у людей, свиней, коней і птахів, є частинами одного і того ж комплексу. Існування такого 'великої кількості окремих білкових молекул у вірусах грипу неможливо пов'язати з кодує ємністю вірусної РНК (Laver, 1964). Крім того, електронно-мікроскопічні (Lafferty, Oertelis, 1963), іммуіохімічеокіе (Fazekas de St. Groth, 1961, 1962; Fazekas de St. Groth, Webster, 1963, 1964) і 'біохімічні (Laver, 1964) дані більш узгоджуються з присутністю на вірусної оболонці дуже обмеженого числа антигенно помітних білкових молекул. На підставі нещодавно проведених дослідів-припускають, що антигенний дрейф є результатом селекції імунної популяції мутантних вірусних часток з 'зміненими антигенними детермінантами, а отже, і з перевагами в зростанні в присутності антитіл (табл. 26). Більш того, було «надано, що є зміни в послідовності амінокислот аз поліпептидах гемагтлю-тінірующіх одиниць антигенних мутантів, виділених путам селекції антитілами в системі in vitro (Laver, Webster, 1968) (рис 38). Пептидні карти виявили, що під час природного антигенного дрейфу також мають місце зміни в послідовності амінокислот як легкого, так і важкої поліпел-тидной ланцюгів (39). Ці результати припускають, що антигенні варіації серед вірусів грипу пов'язані із змінами послідовності амінокислот їх антигенних білків. Хоча деякі з змін в послідовності можуть бути випадковими, що надають невелике або не які надають зовсім впливу на антигенні детермінанти, ймовірно, деякі з цих змін зачіпають антигенні детермінанти субодиниць НА, роблячи їх менш здатними строго «підганяти» до відповідних молекулам антитіл. В експерименті, однак, не показано, чи існують ці зміни саме в антигенних детерминантах вірусних 'білків або в деяких інших областях молекули. Віруси грипу в РГГА проявляють асиметричні реакції перехрещення. Fazekas de St.-Groth (1970) назвав віруси, які поводяться подібним чином, «старшими» і «молодшими» штамами. Більш того,, він 'Припустив (Fazekas de St. Groth, 1970), що в процесі природного антигенного дрейфу «старші» віруси грипу заміщають «молодші» штами. Останнє припущення 'підтверджується лише дуже' нечисленними даними. Б. МОЖНА ПЕРЕДБАЧИТИ НАПРЯМОК ДРЕЙФУ ' Здатність вірусу грипу до антигенних змін залишається основною проблемою. Кожен новий варіант повинен бути виділений і ідентифікований, перш ніж почнеться виробництво вакцини, тому. Кожен новий варіант здатний інфікувати велике число людей, перш ніж його можна 'буде. Контролювати за допомогою вакцин. У зв'язку з цим були зроблені спроби передбачити антигенний дрейф в лабораторії, проте не зовсім успішно. Hannoun і Fazekas de St. Groth в Інституті Пастера в (Парижі пасеровані штам А/Гон.конг/68 (H3N2) у присутності невеликих концентрацій антисироватки. Після кількох таких циклів зростання був отриманий (варіант, який 'більш ні (піддавався антигенними мутацій в даних умовах експериментів. Цей варіант , як припустили автори, представляв собою кінцеву точку еволюції в межах се-ротіпа НЗ, і. був, таким чином, вірусом, появи (якого можна: було очікувати після 1970 р. Це припущення підтверджувалося відкриттям, що лондонський варіант вірусу грипу, виділений вперше , в 1972 р. (А/Англія/42/72), ан-антигеном був дуже схожий на перший мутант, який Hannoun і Fazekas de St. Groth отримали у своїй лабораторії роком раніше (Fazekas de St. Groth, Hannoun, 1973) . Була надія, що вакцини, отримані на основі кінцевого «старшого» варіанту, забезпечать захист від усіх НЗ-ва-риантов, які можуть з'явитися у 'людини. Однак віруси (грипу типу А, виділені згодом у 1973 і 1974 рр.. (Наприклад, А / Порт Чалмерс/1/73), які антигенно відрізнялися від штаму А/Англія/42/72, також значно відрізнялися і від штучно отриманого варіанту. На підставі цього припустили, що в природних умовах дрейф не пішов у предсказанном напрямку. У будь-якому випадку варіант, отриманий в лабораторії шляхом пасажів у присутності антисироватки, відчував дрейф тільки в НА, тоді як природні варіанти проявляють дрейф як в НУ, так і в NA. Таким чином, ця спроба приготувати «майбутню» вакцину, ло-тідімому, виявилася безуспішною. В. МОЖЛИВІСТЬ ЗНАЧНИХ ЗМІН, ЩО ВІДБУВАЮТЬСЯ ВИДУ антигенні детермінанти У ПРОЦЕСІ антигенною дрейфу У розділі IV було показано, що субодиниці НА вірусу грипу Гонконг володіють щонайменше двома видами антигенних детермінант і що в процесі еволюції шляхом антигенного дрейфу грипу Гонконг утворився вірус (А/Мемфіс/102/72), у якого одна з цих антигенних де- терміяант зазнала значного антигенное зміна (порівнянне за величиною з антигенним зрушенням), тоді як інша «дрейфувала» (ом. 37). Ми назвали першу з цих детермінант «специфічної», а другий - «загальної» для цих двох вірусів <(Laver et al., 1974). Антитіла до «специфічної» детермінанті не виявляється ніяких перехресних реакцій між цими двома вірусами в тестах іммунодіффузія-ії, РГГА або нейтралізації інфек-ціонності. Інша детермінанта (детермінанти) була спільною для обох вірусів (хоча в цій детермінанті і відбувався деякий антигенний дрейф), і між вірусами Гонконг/68, і Мемфіс/72 були виявлені перехресні реакції завдяки однаковості антитіл до цієї «загальної» детермінанті (детерминантам). Різні тварини IB різного ступеня реагують на ті чи інші детермінанти при імунізації одним і тим же препаратом виділених субодиниць НА. Ці варіації в імунологічній відповіді можуть пояснити мінливість реакцій перехрещення, спостережувану іноді між двома вірусами при дослідженні їх за допомогою різних сироваток. Незважаючи на значне антигенное зміна IB ОДНІЄЇ з детермінант, пептидні карти важких і легких поли пептидів (НА1 і НА2) субодиниць НА вірусів Гонконг/68 | І Мемфіс/72 були значною мірою схожими (див. 39), на підставі чого припускають, що в процесі еволюції вірусу Гонконг та освіти. варіанту Мем фіс/72 в послідовності амінокислот цих поліпептидів відбуваються лише відносно невеликі зміни. Изме нения мають місце в пептидних картах як важких (НА1), так і легенів (НА2) поліпептидних ланцюгів; деякі з них можуть бути випадковими змінами, інші - відібраними під тиском антитіл. Г. антигенні ЗМІНИ нейрамінідази Антигенний дрейф спостерігали в нейрамінідазной антигенів не вірус грипу як типу А, так і типу В (Paniker, 1968; Schulman, Kilbourne, 1969; Schild et al., 1973; Curry et al., 1974). Він, ймовірно, відбувається шляхом селекції (під давле ням антитіл) мутантів, які мають змінену последо вательность амінокислот у поліпептиду субодиниць NA (Kendal, Kiley, 1973). До цих пір не вдалося домогтися анти генного дрейфу в лабораторії. Антитіла до NA НЕ нейтрали зуют інфвкціонності вірусу; отже, ймовірно, що мінливість цього антигену менш важлива для виживання вірусу, ніж мінливість НА (Seto, Rott, 1966; Dowdle et al., 1974). Д. антигенною мінливістю вірусу грипу типу В Антигенний дрейф відбувається серед вірусів грипу типу В приблизно в тій же мірі, що і серед вірусів грипу: типу А, але значні антигенні зрушення, видимі у них,, не були виявлені серед штамів грипу типу В. Антигенний дрейф (включає зміни обох антигенів - НА ї NA (Chakraverty, 1972a, b; Curry et al., 1974). Механізм антигенної мінливості штамів В, ймовірно, подібний до механізму, притаманного вірусам. грипу типу А, але «біохімічних досліджень проведено не було. Е. антигенні ЗМІНИ ВІРУСІВ ГРИПУ ПТАХІВ І ТВАРИН Антигенні зміни серед вірусів грипу, що інфікують нижчих ссавців і птахів, що не були вивчені в достатній мірі, і інформація про них невелика. На підставі деяких результатів, однак, можна припустити, що антигенний дрейф має місце і у штамів (грипу ссавців і птахів, але в меншій мірі, ніж у вірусів грипу, що інфікують людини. Антигенний дрейф спостерігали у вірусів грипу свиней і коней (ееротіп 2) (Meier-Ewert et al., 1970; Pereira et al., 1972), але дані про антигенному дрейфі у вірусів грипу птахів відсутні. Можливо, причина цього в тому, що птахи, особливо домашні, живуть менше, ніж людина або кінь. У людини кожний наступний варіант вірусу грипу А швидко повністю заміщає попередній, але серед тварин і птахів часто одночасно циркулюють віруси, що відрізняються один від одного. VI. МЕХАНІЗМ АНТИГЕННИХ ЗРУШЕНЬ (ЗНАЧНИХ АНТИГЕННИХ ЗМІНУ) У ході антигенних змін іншого роду поверхневі субодиниці вірусу відчувають значні антигенні зрушення. При цих значних зрушеннях відбуваються раптові і повні зміни одного або обох поверхневих антигенів, так що 'виникають «нові» віруси, до яких імунітету в популяції немає. Це саме ті віруси, які викликають пандемії грипу. Віруси грипу людини H2N2 є природною системою для вивчення молекулярних аспектів значних антигенних зрушень. Віруси, що з'явилися у людини в 1957 р., володіли субодиницями НА та NA, які повністю анти-| генно відрізнялися від таких штамів H1N1. Віруси H2N2 випробовували антигенний дрейф до 1968 р., коли з'явився «новий» пандемічний штам; м Гонконг. . Віруси А2 (H2N2) і штам Гонконг (H3N2) виникли в Китаї. Вірус Гонконг мав тієї ж NA, що і попередні віруси А2, але ан-антигеном відрізняється НА (Coleman et al., 1968; Schulman, Kilbourne, 1969). Це чітко 1бил показано за допомогою специфічних антисироваток до виділених суб'едівіцам НА представників вірусів грипу типу А2, (Вирощених в курячих ембріонах. Ці моноспеціфічної сироватки використовували в РГГА з вірусами, вирощеними в качиних ембріо-- на'х (Webster, Laver, 1972), що знімало проблеми стеріче-ського придушення гемагглютінащіі антитілами до NA та антигену клітини-хазяїна,. які можуть мати місце при використанні сироваток до цілих вірусам. Результати цих тестів (табл. 27) показали, що серологічного відповідності між гемагглютініновой антигенами «старих» штамів А2/Азія, виділених між 1957 і 1968 р., і вірусом Гонконг (1968) не було. Серед трьох штамів Гонконг, ^ виділених протягом перших 3 років пандемії цього грипу, були лише дуже невеликі варіації або їх зовсім не було (Webster, Laver, 1972). Звідки ж тоді з'явилися «нові» субодиниці НА вірусу грипу Гонконг? Мабуть, маються дві можливі, причини утворення «нових» гемапглютінірующіх субодиниць: або вони відбулися в результаті мутації з лредсуществовавшего вірусу грипу людини або прийшли з деякого іншого джерела, такого, як віруси грипу тварин чи птахів. Одиночна мутація «старого» вірусу грипу А2/Азія могла б викликати згортання поліпептидних ланцюгів субодиниць НА таким чином, щоб утворилися повністю нові антигенні детермінанти. Якби субодиниці НА вірусу грипу Гонконг були отримані шляхом такої мутації з більш ранніх вірусів типу А2, то послідовність амінокислот у поліпептиду «старих» і «нових» субодиниць повинна бути близька. Раніше описаний повний зсув в одній з антигенних детермінант субодиниць НА, який стався в процесі антигенного дрейфу, і цей «зрушення» в одній з-детермінант не супроводжується, ио-шідімому, якими б то »не було значними загальними змінами послідовник 'Н'Ості амінокислот у поліпептиду НА. Однак якщо «нові» субодиниці не виникають шляхом мутації і відбору, а приходять від вірусу грипу тварин, то їх поліпептидні ланцюги можуть значно відрізнятися по послідовності амінокислот від лоліпаптідних ланцюгів «старих» вірусів А2/Азія. Субодиниці НА були виділені з трьох штамів грипу А2/Азія, отриманих в 1968 т. до настання пандемії грипу Гонконг, і з трьох штамів вірусу грипу Гонконг, ізольованих у різних частинах світу в 1968, 1970 і 1971 рр.. Внаслідок антигенного дрейфу три віруси, виділених в кінці періоду існування А2/Азія, проявляють значні антигенні відмінності. З іншого боку, три штами Гонконг, які були виділені протягом перших 3 років нової пандемії, майже не виявляють антигенної мінливості. Субодиниці НА, виділені з кожного з цих шести вірусних штамів, диссоциированного шляхом обробки Гуань-дінгідрохлорідом і дітіотреїтолу і при центрифугировании поділяли їхні легені ітяжелие мети (Laver, 1971). Кожну з виділених поліпептидних цілей обробляли трипсином і картірован трілтічні пептиди. Карти показали, що поліпептидні ланцюги з гемагглютинирующих субодиниць «старих» вірусів А2, виділених у 1968 р., значно відрізнялися за складом амінокислот від лолілептід-них ланцюгів «нових» штамів Гонконг! (40 і 41). При цьому припустили, що «нові» поліпелтіди ні (отримані шляхом мутації з «старих» (Laver, Webster, 1972)., Одне з пояснень такого результату полягає у припущенні мутації зі зсувом рамки, приводить до появи поліпептидів з повністю відмінною послідовністю амінокислот. Однак здається малоймовірним, щоб така мутація, якщо вона і відбувається, призводила до появи поліпелтідов, здатних утворити функціональну гемагглютінірующімі одиницю. Друге - можуть відбуватися мутації, що зачіпають головним чином основні амінокислоти, так що карти тріштічних пептидів могли б значно відрізнятися без якого-небудь істотного зміни загальної послідовності амінокислот в лолілелті-дах. У «астоящем час отримані дані, що вказують на деякі віруси-грипу тварин як на можливі попередники шта1М'ма Гонконг вірусу грипу людини. Два штаму вірусу грипу, А/лошадь/Майамі/1/63 (Heq2Neq2) | і А/утка/Украіна/1/63 (Hav7Neq2), виділені від коней і качок в 1963 р., тобто за 5 років до появи грипу Гонконг серед людей, виявилися, як було показано, антигенно близькими штаму Гонконг (Coleman et al., 1968; Masurel, 1968; Kaplan, 1969; Zakstelskaja et al., 1969; Tumova, Easterday, 1969; Kasel et al., 1969). Субодиниці НА вірусів коней і качок давали в РГГА і в тесті иммунодиффузии перехресні реакції з суб'едівіцамі штаму Гонконг вірусу грипу людини А/Гон-конг/1/68 (H3N2). Більш того, пептидні-карти легких іолі-пептидних ланцюгів з темапплютінірующіх субодиниць вірусів коней, Утаки і людини були майже ідентичними, иа підставі чого припустили, що легкі ланцюги з цих трьох штамів мають практично однакові послідовності амінокислот (Laver, Webster, 1973). Це чітко видно з 42, де пептидні жарти легких лоліпептідних ланцюгів з субодиниць НА вірусу грипу Гонконг і з штамів качка / / Україна і кінь / Майамі (2-й серотип) майже ідентичні і значно відрізняються від карти легких лоліпаптідних ланцюгів, з «старого» вірусу Азія/68. Ці результати дають підставу вважати, що віруси коней і птахів і вірус людини штаму Гонконг могли виникнути шляхом генетичної рекомбінації від загального прародителя, і запропонувати альтернативний по відношенню до мутація механізм для пояснення виникнення вірусу грипу Гонконг. Вперше припущення про. 'Участю вірусів грипу коней в пандемії грипу серед людей виникло зі спостережень, зроблених під час епідемії 1963 р. (Molineux, 1965). З тих пір багато авторів вказували на тварин, 1как на. Джерело вірусів грипу людини. Недавні дослідження показали, що в сироватках диких птахів містяться антитіла, спрямовані проти антигенів, присутніх у вірусах грипу, що інфікують людину (World Health Organization, 1972). Крім того, недавно віруси грипу були виділені від диких птахів, віддалених від ло-пуляций людини, що передбачає грип. Як природну інфекцію птахів протягом багатьох тисяч років (Downie, Laver, 1973). Rasmussen (1964) перший (припустив, що пандемічний вірус грипу виникають з таких вірусів тварин в результаті процесу рекомбінації. Згодом Tumova і Pereira (1965), Kilbourne (1968) і Easterday з співавт. (1969) отримали антигенно-гібридні віруси шляхом генетичної рекомбінації in vitro між вірусами грипу людини і штамами вірусів грипу тварин і птахів. Нещодавно Webster і співавт. (1971, 1973) імітували виникнення нового пандемічного штаму вірусу грипу. в дослідах in vivo (вони будуть 'описані далі). VII. ДОДАТКОВІ ДОКАЗИ, Підтверджують роль ПРОЦЕСУ Рекомбінації в ПОХОДЖЕННЯ НОВИХ Пандемічний вірус ГРИПУ Наведені біохімічні дані не підтверджують теорію про те, що антиген НА вірусу Гонконг стався внаслідок одиночній мутації з попередніх штамів Азії. Отже, можна поставити запитання, чи є які-небудь дані, отримані при лабораторних дослідженнях in vitro або in vivo або особливо при спостереженнях в природних умовах, які підтримували б теорію, яка передбачає, що нові віруси виникають шляхом рекомбінації. А. ДАНІ, отримані при дослідженні В СИСТЕМІ IN VITRO Антигенні гібриди (рекомбінанти) багатьох вірусів | грипу А ссавців і птахів були виділені після змішаної інфекції курячих ембріонів або культур клітин різними вірусами грипу типу A (Tumova, Pereira, 1965; Kilbourne, Schulman, 1965; Kilbourne et al., 1967; Kilbourne, , 1968; Easterday et al., 1969). Ці дослідження підсумовані в оглядах Kilbourne і співавт. (1967), а також Webster і La-ver (1971). В даний час очевидно, що рекомбінантні віруси грипу А зі змішаними поверхневими антигенами (Webster, 1970b) або потенціями до зростання (Kilbourne, Murphy, 1960; Kilbourne et al., 1971) або іншими біологічними характеристиками (McCahon, Schild, 1971) можуть бути зроблені «на замовлення». Таким чином «нові» віруси грипу можуть бути створені в лабораторії, але лише недавно були отримані докази того, що рекомбінація і відбір «нових» вірусів можуть відбуватися також in vivo в умовах, наближених до природних (Webster et al., 1971). Б. ДАНІ, отримані при дослідженні В СИСТЕМІ IN VIVO vivo 1. Демонстрація рекомбінації в системі in Kilbourne (1970) відзначав, що рекомбінація між двома різними штамами вірусів грипу типу А досі не була показана у випадку інтактних тварин, навіть в експериментальних умовах. Для того щоб з'ясувати, (чи може відбуватися рекомбінація in vivo, використовували дві системи. У першій лише один з батьківських вірусів розмножувався в тваринному-хазяїні, а в другій розмножувалися обидва батьківських вірусу. Тваринам вводили великі дози батьківських вірусів і на 3-й день , коли опинявся розмноженим хоча б один з вірусів, тварин забивали. Суспензії легких досліджували прямо в оболонках аллантоїса на наявність рекомбінантних (антигенно-гібрддних) вірусів;, батьківські. віруси придушували специфічними антисироватки (Webster, 1970b). У першій системі свиням вводили суміш вірусу грипу свиней - ВГ'С (А/свінья/Вісконсін/1/67 [HswlNl]) і вірусу чуми птахів типу А - ВЧП (Данія/27 [HavlNeql]) (43). Останній не дає виходу інфекційного вірусу після введення свиням. Суспензії легких, зібрані через 3 дня, містили батьківські віруси і рекамбінантние віруси, що несуть НА ВГС і NA ВЧП, ВГС (Н)-ВЧП (N) (A / Hswl-Neql), і віруси, що володіють НА ВЧП і NA ВГС, ВЧП (Н)-В ГО (N) (Havl-Nl) (Webster et al., 1971). У другій системі, де реплицироваться обидва віруси, індичок заражали ВЧП та вірусом грипу індиків - ВГІ (А / я'ндюк / Массачусетс/3740/65 [Hav6N2]). Як (було вказано, в системі аллантоіоних оболонок виділяли антигенні гібриди, що мають ВГІ (Г)-ВЧП (N) (Hav6Neql) і ВЧП (Н)-ВГІ (1Ч) (Havl-N2). Є два можливих заперечення проти того, що описана рекомбінація відбувається in vivo. Перше - рекомбінація може мати місце в системі культури клітин, використаної для селекції вірусів; второе'-невідомо, 'чи були ці антигенні гібриди генетично стабільними і не були чи просто фенотипично змішаними частинками. Перше заперечення можна не брати до уваги, оскільки селекція антигенно гібридних вірусів проводилася безпосередньо при дуже високих концентраціях антитіл, які повинні нейтралізувати батьківські віруси. Для отримання (більш суворих доказів того, що анти-(гештснгібрідние віруси не виникають у процесі виділення поза інфікованого господаря, було необхідно отримати бляшки вірусів змішаного врожаю з суспензії Лепких, щоб виділити окремі бляшки і охарактеризувати зразки вірусів, отримані з окремих бляшок. 25% бляшок, виділених з суспензії легких індичок, змішано інфікованих ВЧП + ВГІ, були рекомбінантними вірусами. Гібридні віруси не виділялися з контрольних культур, заражених штучною сумішшю обох батьківських вірусів. Генетична стабільність рекомбінантних вірусів була встановлена шляхом «ведення твариною-господарям клонованих аятігенно-гібридних вірусів (Webster et al., 1971). Так, наприклад, курчата, заражені антигенно-гібридним вірусом, несучим ВЧП (Н)-ВГІ (N), (HavliN2), гинули від швидкоплинної інфекції, а вірус, знову виділений з легких цих птахів через 3 дня, був чистою культурою вірусу, володіє B4n (H) - (Havl-N2). Також були знову виділені від тварин і виявилися генетично стабільними та інші антигенно-тібрідние віруси. 2. Природна передача вірусу і селекція Описані дослідження показали, що два різних штами вірусу грипу А можуть рекомбінувати in vivo, якщо вони одночасно введені одному й тому тварині. Одночасне введення тваринам великих доз двох різних вірусів грипу А являє собою, однак, штучну систему, якої, ймовірно, немає в природі. Для того щоб з'ясувати, чи може рекомбінація відбуватися при більш природних умовах, двом різним вірусам грипу А дозволили одночасно поширюватися в зграї чутливих до вірусів птахів наступним чином: двох індичок, заражених ВГІ (А/і-ндкж/Віеконсін/66 {Hav6N2]) , підселили до зграї з 30 чутливих охоронюваних індичок. Через 2 дні в ту ж зграю ввели ще двох індичок, заражених ВЧП. Щодня забивали по 2 індички зі зграї і зразки легких досліджували на наявність кожного з батьківських та аятігенно-гібридних вірусів в оболонках аллантоїса, а також шляхом виділення бляшок та ідентифікації вірусів (Webster et al., 1971). ВЧП швидко поширювався серед охоронюваних птахів і виявлявся через 3 дні після введення; ВГІ б не визначався до 9-го дня після введення в зграю заражених птахів (Webster et al., 1973). Антигенно-гібридні віруси, що несуть ВЧП (Н)-ВГІ (N), виявлялися на 10-й день після початкового впливу і становили основну частину вірусної популяції в суспензії Лепких однієї з досліджених птахів. Досліди такого роду проводилися тричі, і в кожному досвіді на 9-10-й день виділялися антигенні гібриди; ці гібриди володіли ВЧП (Н)-ВГІ (N), але зворотних-гібридів виділено не було. Виділяється рекомбінантний 1вірус мав, ймовірно, перевагу в зрості перед батьківськими вірусами; в кожному досвіді цей вірус виділяли як домінуючий від однієї або більше птахів. Для того щоб «новий» штам вірусу грипу з'явився в природі шляхом такого роду рекомбінації і став епідемічним штамом, необхідно, щоб «новий» вірус мав деякий селективну перевагу. Це селективне перевага може складатися у володінні антигенами, до яких популяція в більшості своїй не є імунної, але вірус повинен також мати здатність переходити до чутливих господарям. Обидві можливості були вивчені в наведених дослідах. Так, наприклад, до часу, коли рекомбінантний вірус вже був присутній, в зграю вводили нормальних птахів, «про рекомбінанти не зуміли стати домінантним штамом, і всі нормальні контактують птахи загинули від інфекції, викликаної батьківським ВЧП. 3. Селекція і передача «нового» вірусу грипу в системі in vivo Якщо ми припускаємо, що нові штами вірусів грипу типу А можуть виникати> в пр'іроде шляхом рекомбінації, важливо показати,. Як ці віруси можуть селектировать і стати домінуючими або новими епідемічними штамами. Можливий механізм селекції може полягати в тому, що рекомбінація і селекція мають місце в імунних тварин. Досліди Webster і Campbell (1974) показали, що рекомбінація і селекція «нового» штаму-вірусу грипу може відбуватися у індичок з низькими рівнями антитіл до НА одного батьківського вірусу і до NA іншого батьківського вірусу (45). Індичок, що володіють низькими рівнями антитіл до НА ВГІ (А / індкж / Вісконсін / бб [Hav6N2]). І до NA ВЧП, піддавали змішаної інфекції ВЧП і ВГІ. Через 1-2 дні після змішаної інфекції в трахеях індичок були присутні як обидва батьківських вірусу, так і рекомбінантний вірус грипу, що несе ВЧП (Н)-ВГІ (N). На 6-й день після змішаної інфекції був присутній тільки рекомбінантний вірус B4n (H) iBrH (N). На 7-й день 'після змішаної інфекції індички гинули, і виділялися лише рекомбінантні віруси грипу, що володіють ВЧП (Н)-ВГІ (N). Всі віруси виділяли при граничних розведеннях з оболонок аллан-тоіса або з ембріонів, і не використали антитіл для селекції рекомбінантних вірусів. Всі неімунні птиці, введені в зграю на 5-й день, загинули від швидкоплинної інфекції і від «їх виділяли лише (рекомбінантні віруси грипу. Після змішаної інфекції неімунних або гіперімунна індичок поселенців рекомбінантного вірусу грипу не відбувалося. Таким образам, змішана інфекція птахів, які мають низький рівень антитіл до НА одного вірусу і до NA іншого, забезпечує ідеальні умови для селекції рекомбінантов. Слідом за інфекцією в обмеженій мірі реплицируются обидва батьківських вірусу, стимулюючи тим са-мььм імунну систему, яка елімінує батьківські віруси. Таким шляхом можуть бути селектировать рекамбіная-ти та за умови, що вони володіють необхідними властивостями вірулентності і здатністю до передачі іншим особинам, ці рекомбінанти можуть викликати епідемічне захворювання. Ці експерименти показують, що при відносно природних умовах мається рекомбінація між різними вірусами грипу А і що нові віруси можуть і ^ меть селективну перевагу перед обома батьківськими штамами. Ці досліди не доводить, що всі нові віруси грипу нижчих ссавців, птахів і людини виникають за таким механізмом, але вони встановлюють, що цей механізм є одним із способів, 'завдяки яким з'являються нові' віруси. В. ДАНІ ПО рекомбінації ВІРУСІВ ГРИПУ У ПРИРОДІ Наведені досліди не залишають сумнівів у тому, що нові штами вірусу грипу можуть бути 'отримані in vitro і in vivo, і дозволяють припустити, що подібні процеси можуть мати місце і в природі. Чи є, однак, які або докази того, що рекомбінація в природі відбувається? Ці докази непрямі і включають: 1) антигенні відповідності між вірусами грипу, виділеними від людей і від нижчих ссавців 'і птахів; 2) відсутність суворого кола господарів вірусів грипу. 1. Антигенні співвідношення між вірусами грипу людини, нижчих ссавців і птахів Доказами, що припускають, що рекомбінація між вірусами грипу людини і тварин можлива в природі, можуть служити дані про те, що деякі віруси грипу людини, нижчих ссавців і птахів володіють близькими, якщо не однаковими, (поверхневими антигенами. а) Антигенні взаємини, зумовлені NA. NA деяких вірусів грипу птахів антигенно дуже близька NA ранніх вірусів грипу людини. Так, наприклад, вірус качок (А/ужа/Германія/1868/68 [Hav6Nl]) володіє NA, близької NA вірусів людини НТШ і H1N1 (Schild, Newman, 1969). Віруси грипу, що виділяються від свиней, також несуть антиген NA, споріднений антигену NA вірусів людини H0N1 (Meier-Ewert et al., 1970). Аналогічним чином ВГІ (А/індкж/Массачусете/65 [Hav6N2]) володіє NA, подібної, якщо не ідентичною, NA вірусів грипу людини H2N2 (Pereira et al., 1967; Webster, Pereira, 1968; Schild, Newman, 1969). Інші віруси грипу птахів мають NA-антигени, | близько пов'язані, до NA вірусів грипу коней типів 1 і 2 (Webster, Pereira, 1968; World Health Organization, 1971). Так, NA ВЧП (А/ВЧП/Голландія/27 [HavlNeql]) подібна NA вірусу грипу коней типу 1 (А / лоша, дь/Прага/1/57 [HeqlNeql]). Ці міжвидові взаємини використані в переглянутої номенклатурі вірусів грипу (World Health Organization, 1971). Є вісім різних. Підтипів вірусів грипу птахів і чотири з них мають NA-ан-антигеном, родинними NA-антигенів вірусів грипу людини і коней. б) Антигенні відповідності, обумовлені НА-антигенів | ном. Менше подібних прикладів було-виявлено з вірусами грипу, виділеними від нижчих ссавців і птахів, які мали б НА-антигени, родинні НА-антигенів вірусів людини. Вище обговорювалося відповідність НА вірусів Гонконг, утка/Украіна/63 і кінь / тип 2. Нещодавно було знайдено, що вірус, виділений від качок у Німеччині (А/ут-ка/Германія/1225/74 [H2Nav2]), володіє НА, близьким НА вірусів грипу сімейства Азія. Таким чином, з виділенням більшої кількості вірусів зростає кількість виявляються відповідностей. 2. Коло господарів Віруси грипу типу А не завжди мають строго визначений ную специфічність до господаря (див. Easterday, Tumova, 1971; Webster, 1972). Так, наприклад, вірус грипу Гонконг був виділений від свиней, собак, кішок, бабуїнів і гібонів. Віру си грипу А / Гонконг (H3N2) нещодавно були виділені також від курей і телят (Zhezmer, 1973). Ці віруси експери але були перенесені телятам і курчатам; в усіх випадках вірус реплицироваться в хазяїні, від якого він був виокрем льон. Так, вірус грипу телят викликав респіраторну инфек цію у телят, а вірус грипу курей реплицироваться, але не про являв ознак захворювання у, курей (Schild, Campbell, Web ster, неопубліковані дані). Людські штами ві русів грипу Гонконг не могли реплицироваться в курях. У разі вірусу грипу Гонконг очевидно, що цей вірус адаптувався до того, щоб викликати природну инфек цію у інших господарів, і таким чином створювалися умови, коли можуть мати місце подвійна інфекція і генетичні взаємодії Г. УЗАГАЛЬНЕННЯ ДАНИХ, ПІДТВЕРДНИХ ТОЧКУ ЗОРУ Про ВИНИКНЕННІ НОВИХ ШТАМІВ ВІРУСУ ГРИПУ ШЛЯХОМ рекомбінації 1. Пандемії грипу у людей викликаються тільки вірусу ми грипу типу А, і тільки віруси грипу цього типу були виділені від нижчих ссавців і птахів. Віруси грипу типу В постійно рекомбинируют in vitro, але в природі мо жет не відбувається такого об'єднання генетичної інфор мації, [яке дозволило б 'виникнути пандемічного штаму вірусу грипу типу В. рекомбінації між вірусу ми грипу типів Аі В показано не було. 2. Біохімічні дані, представлені раніше, свиде тельствуют про малоймовірною можливість виникнення «Нових» пандемічних штамів вірусу грипу шляхом непо средственно мутації з попередніх вірусів грипу людини. 3. Нові віруси грипу, здатні викликати пандемію, можуть виникнути шляхом рекомбінації та селекції в умовах експерименту in vivo. 4. На підставі антигенних і біохімічних відпо вий між гемалглютінірующімі і нейрамінідазной ан антигеном вірусів грипу людини, нижчих ссавців і птахів припускають, що генетичні обміни існують і в природі. Наведені докази є непрямими; більш прямі дані можна буде отримати, якщо виявиться, що майбутні пандемічні штами мають антигени, ідентичні вже виділених антигенів, властивим вірусам грипу домашніх або диких тварин (див. також гол. 15). VIII. МАЙБУТНІ антигенні ЗМІНИ ВІРУСІВ ГРИПУ ТА МОЖЛИВОСТІ ПРОГНОЗУВАННЯ МІНЛИВОСТІ І КОНТРОЛЮ ЗАХВОРЮВАНЬ А. МОЖЛИВІ ПОЯСНЕННЯ циклічної природи пандемії На підставі дослідження антитіл у сироватках літніх людей можна припустити, що вірус грипу, схожий на вірус Тріппа Гонконг, існував-серед людей в колишні часи і, можливо, з'явився причиною 'пандемії грипу наприкінці XIX століття (див. розділ II). У сироватках літніх людей-виявлені також в низьких титрах антитіла до НА вірусів грипу коней типу 2 і Азія. Антитіла до NA вірусів грипу. Гонконг або Азія не визначались в тих же аятіси-воротком, тоді як антитіла до NA вірусу грипу коней типу 2 були визначені. Це передбачає відповідальність вірусів, що мають аналогічні субодиниці НА, але різні субодиниці NA за колишню і 'нинішню епідемії. Епідеміологічні дані дозволили вважати, що пандемічний вірус грипу людини з'являються циклічно. Відсутність даних про гомологичности NA робить малоймовірним існування одного і того ж 'вірусу грипу Гонконг наприкінці XIX вежа' і знову в 1968. Р. Здається більш ймовірним, що вірус грипу, що існував в кінці XIX століття, мав субодиницею НА, яка проявляла деякий антигенное подобу вірусу грипу Гонконг, але ніс на собі абсолютно відмінний антиген NA. Виходячи з серологічних даних, ця NA антигенно споріднена NA типу 2 грипу коней. Новий цикл вірусів грипу може відбуватися в результаті появи вірусів з деякого резервуара, пов'язаного з тваринами, з участю або без участі рекомбінацій, коли колективний імунітет 'більш не оберігає від нього популяцію людей. Інше явище, пов'язане з виникненням нових-штамів грипу, - очевидне зникнення попередніх штамів. Воно могло б бути обумовлено просто незацікавленістю в зборі зразків вірусів грипу, які більш не небезпечні для більшої частини суспільства (Fenner, 1968), але це пояснення малоймовірно, бо практика показала, що віруси грипу людини не співіснують в природі протягом скільки-небудь тривалого часу. Можна пояснити зникнення штамів, які з'явилися в результаті антигенного дрейфу, самоупраздненіем; серологічно новий вірус підвищує рівень старіших антитіл, запобігаючи тим самим поширення старого вірусу. Зникнення ж старших штамів (Fazekas de St. Groth, 1970) кожного підтипу після значного антигенного зсуву менш зрозуміло і задовільного пояснення поки не має. В. МОЖЛИВОСТІ КОНТРОЛЮ ЗА антигенні ЗМІНАМИ ВІРУСУ ГРИПУ А В МАЙБУТНЬОМУ Біологічні, біохімічні та імунологічні дані, наведені вище, дають лише непрямі докази того, що значні антигенні зрушення вірусів грипу людини відбуваються шляхом рекомбінації. Більш певні дані будуть отримані, якщо в природі можна буде 'виявити рекомбінацію між різними вірусами грипу, що приводить до появи нового пандемічного штаму, Рідкість такої події фактично виключає цю можливість. Альтернативний підхід до цієї проблеми полягає у виділенні вірусів грипу від популяцій тварин до появи наступного пандемічного для людей штаму, тобто створенні «банку» вірусів грипу. Після появи наступного, що викликає пандемію серед людей, штам1ма цей вірус може бути порівняний з вірусами, наявними в «байці», і можна буде отримати дані про його виникненні. Популяції диких тварин як 'джерела нових вірусів грипу в значній мірі ігнорувалися. Популяції птахів у світі мешкають в колоніях з високою щільністю протягом більш тривалих періодів, ніж ссавці або люди. Цікаво, що вже виділено вісім різних підтипів вірусів грипу птахів, шість з них - від домашніх птахів. Отже, логічно почати пошук вірусів грипу ь природі у великих пташиних колоніях, особливо в-кінці сезону гніздування. Такі екологічні дослідження допоможуть встановити число різних підтипів вірусу грипу, які існують в природі і можуть зрештою показати, яким чином виникають нові штами. Якщо є лише обмежена кількість вірусів грипу А, то в майбутньому можна буде думати про контроль над цими вірусами, що представляють величезну лихо для людини. ЛІТЕРАТУРА Ada G. L., Lind P. E., Laver W. G. J. gen. Microbiol., 1963, v. 32, p. 225. Andrewes С. Н. Calif. Med., 1956, v. 84, p. 375. Andrewes З H. N. engl. J. Med., 1957, y. 242, p. 197. Andrewes С. Н. In: Perspectives in Virology (M. Pollard, ed.); New York, Wiley, 1959, p. 184-196. Archetti I., Horsfall F. L. J. exp. Med., 1950, v. 92, p. 441. Becht H., Hammerling U., Rott R. Virology, 1971, v. 46, p. 337. Brand З M., Skehel J. J. Nature (London). New Biol., 1972, v. 238, p. 145. Bucher D. J., Kilbourne E. D. J. Virol., 1972, v. 10, p. 60. Burnet F. M. «Principles of Animal Virology», 1st ed. New York, 1955, p. 380. Burnet F. M., Clarke E. Influenza, Melbourne, Walter and Eliza Hall Inst, 1942. Burnet F. M., Lind P. E. Aust. J. Sci., 1949, v. 22, p. 109. Burnet F. M., Lind P. E. J. gen. Microbiol., 1951, v. 5, p. 67. Burnet F. M., White D. O. Natural History of Infectious Disease, 4th ed. London-New York, Cambridge Univ. Press, 1972, p. 202-212. Chakraverty P. Bull. Wld Hlth Org., 1972a, v. 45, p. 755. Chakraverty P. Bull. Wld Hlth Org., 1972b, v. 46, p. 473. Chu C.-M. J. Hyg., Epidemiol., Microbiol., Immunol., 1958, v. 2, p. 1. Coleman M. Т., Dowdle W. R., Pereira H. G., Schitd G. C, Chang W. K-Lancet, 1968, v. 2, p. 1384. Compans R. W., Klenk H. D., Caliguiri L. A., Choppin P. W. Virology, 1970 |
||
« Попередня | Наступна » | |
|
||
Інформація, релевантна "Антигенна мінливість вірусу грипу" |
||
|